NEBNext 快速连接模块 货 号 #E6056LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于所有测序平台/模块和酶

NEBNext 快速连接模块                              收藏

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#E6056L
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#E6056S
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概述

The NEBNext® Quick Ligation Module has been optimized to ligate efficiently DNA adaptors compatible

with Illumina® sequencing to end-repaired, dA-tailed DNA fragments. The module is optimized for use with the NEBNext End Repair Module (NEB #E6050) and the NEBNext dA-Tailing Module (NEB #E6053) and is part of the original standard DNA library prep workflow, which is suitable for 1 – 5 μg of input DNA.

NEBNext 快速连接模块组份

 Quick T4 DNA Ligase

 NEBNext Quick Ligation Reaction Buffer

贮存温度

-20°C

 

请登陆 NEBNextSelector.neb.com 可以使用在线产品选择工具进行产品选择。

 

NEBNext DNA 文库制备预混液试剂盒 – 454(停产) 货 号 #E6070LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于Ion Torrent或454测序平台

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#E6070L
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#E6070S
10 次反应
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NEBNext 优势

 简单方便的操作流程 – 产品可用于快速操作和低样本起始量。
 简单方便的剂型 – 试剂盒包含的酶、核苷酸和缓冲液都按照操作所需的浓度和体积提供;
    许多产品都有预混液形式;客户可根据需要个性化选择模块试剂。

 严格的质量监控 – 更多的质量监控确保产品的质量及纯度
 功能验证 – 每种试剂盒和模块都经过相应的文库制备,再通过相应测序平台测序验证(Illumina、
    Ion torrent、454 或 SOLiD)。
 更高性价比   

454 产品选择表

使用下面的图表,选择最适合 454 文库制备的 NEBNext 产品。 

NEBNext DNA 文库制备预混液试剂盒 - 454(停产)            货   号                  #E6070L 

用于 454 测序平台的 NEBNext 试剂: DNA 文库制备

适用于 454 的 NEBNext DNA 文库制备试剂以试剂盒的形式提供,您可以选择以下两种方法中的任何一种,DNA 快速文库制备法:其中包括末端修复、加 dA 尾、连接接头和片段筛选;也可以选择经典 DNA 文库制备法:其中包括末端修复、连接接头、缺口填充和 ssDNA 筛选步骤。每批次试剂盒都经过构建基因组 DNA 文库,再在 454 测序平台测序进行验证。下表列出了用于 454 DNA 测序文库制备的试剂盒,根据文库制备流程,每个步骤所需试剂也列在表中。适用于 SOLiD 的 NEBNext Small RNA 文库制备试剂以试剂盒形式提供。根据文库制备流程,每个步骤所需试剂也列在表中。 

NEBNext DNA 文库制备预混液试剂盒 - 454(停产)            货   号                  #E6070L 

NEBNext Ultra II RNA 第二链合成模块 货 号 #E6111LNEB酶试剂 New England Biolabs

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#E6111L
100 次反应
14,169.00

#E6111S
20 次反应
3,549.00

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应用

 –  RNA Sample Preparation
 –  Second Strand Synthesis of cDNA

概述

The NEBNext Ultra II Non-Directional RNA Second Strand Synthesis Module has been optimized to generate double-stranded cDNA from first-strand cDNA, as part of the NEBNext non-directional RNA library preparation workflow. 

 

The NEBNext Ultra II Non-Directional RNA Second Strand Synthesis Module is Designed for Use with the

Following:

 –  NEBNext Ultra II RNA First Strand Synthesis Module (NEB #E7771)

 –  NEBNext Ultra II End Repair/dA-Tailing Module (NEB #E7546)

 –  NEBNext Ultra II Ligation Module (NEB #E7595)

 –  NEBNext Ultra™ II Q5® Master Mix (NEB #M0544)

 –  NEBNext® Oligos for Illumina® (NEB #E7335#E7500#E7710#E7730#E6609#E7600,

    #E7535 #E7350)

随酶提供的试剂

NEBNext® Second Strand Synthesis Enzyme Mix

NEBNext® Second Strand Synthesis Reaction Buffer

NEBNext RNA 文库制备试剂 — 订购信息

NEBNext Ultra II RNA 第二链合成模块            货   号                  #E6111L

NEBNext Ultra II RNA 第二链合成模块            货   号                  #E6111L

NEBNext RNA Mg++ 片段化模块 货 号 #E6150SNEB酶试剂 New England Biolabs

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NEBNext RNA Mg++ 片段化模块                              收藏

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#E6150S
200 次反应
579.00

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概述

The NEBNext® Magnesium RNA Fragmentation Module has been optimized to fragment RNA into small

pieces by incubation with Magnesium ions at 94˚C. Fragment size is controlled by incubation time (Figure 1), and the reaction is ended by the addition of NEBNext Fragmentation Stop Solution.

 

NEBNext RNA Mg++ 片段化模块            货   号                  #E6150S

随酶提供试剂

  NEBNext® RNA Fragmentation Buffer

  NEBNext RNA Fragmentation Stop Solution

NEBNext RNA 文库制备试剂 — 订购信息

NEBNext RNA Mg++ 片段化模块            货   号                  #E6150S

NEBNext RNA Mg++ 片段化模块            货   号                  #E6150S

NEBNext Ultra II FS DNA 文库制备试剂盒 – 含片段化酶/含纯化磁珠 货 号 #E6177LNEB酶试剂 New England Biolabs

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#E6177L
96次反应
31,499.00

#E6177S
24次反应
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相关产品

NEBNext Ultra II DNA 文库制备试剂盒
NEBNext Ultra II DNA 文库制备试剂盒 – 含纯化磁珠
NEBNext Ultra II FS DNA 文库制备试剂盒 – 含片段化酶

特性

 更高的文库产量,满足更多实验所需
 即使是起始量极低的样本,依然可以制备高质量文库,最低起始量可低至 500 pg
 各种类型的 DNA 样本均可制备文库,包括高 GC 及 FFPE DNA 样本
 提高靶向富集应用的产量及质量
 流程化的操作设计,减少了手动操作时间,与自动化兼容,试剂盒与模块形式,提供了选择的便利
 使用 FS 版本的试剂盒,DNA 分片段化酶被整合到 Ultra II DNA 流程中,可靠并易于使用
 试剂盒中提供实验所需的片段筛选及纯化金标准 SPRIselect 磁珠,为实验提供了极大的灵活性和可靠性

概述

NEBNext  Ultra II DNA 文库制备试剂盒能够用更低起始量的 DNA 构建高质量的文库。文库制备每一个步骤中的试剂都经过优化,能够从  500 pg 至 1 μg 的起始 DNA 高效构建高质量的文库。新一代的 NEBNext  试剂采用了快速、流程化、自动化的工作流程,在降低 PCR 循环数的同时提高了 GC  覆盖度。本试剂盒与 PCR-free  的工作流程兼容,且对于难以建库的样本,如 FFPE  样本,也有很好的效果。
 
Ultra II FS DNA 文库制备试剂盒精简文库制备流程,将 DNA 片段化、末端修复和加 dA 尾优化到一步。
 
Ultra II DNA 和 Ultra II FS DNA 试剂盒均有包含或不含 SPRIselect® 磁珠的包装。
 
NEBNext Ultra II FS DNA 文库制备试剂盒 - 含片段化酶/含纯化磁珠            货   号                  #E6177L
 
NEBNext Ultra II FS DNA 文库制备试剂盒 - 含片段化酶/含纯化磁珠            货   号                  #E6177L
 

用于 Illumina 测序平台的 NEBNext 试剂:DNA 文库制备

 除了每种组份都经过严格的质量监控以外,NEBNext DNA 试剂盒还都经过构建基因组 DNA 文库或 ChIP-Seq 文库,再在 Illumina 测序平台测序进行验证。NEBNext 试剂盒里面,各个组份的批号也都被保留下来。注:接头、引物是单独供应的。

 
NEBNext Ultra II FS DNA 文库制备试剂盒 - 含片段化酶/含纯化磁珠            货   号                  #E6177L
 

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NEBNext ChIP-Seq 文库制备试剂盒(停产) 货 号 #E6200LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/Ultra II DNA & RNA

NEBNext ChIP-Seq 文库制备试剂盒(停产)                              收藏

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#E6200L
60 次反应
19,689.00

#E6200S
12 次反应
4,929.00

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概述

该产品已停产,推荐替代产品为  NEBNext ChIP-Seq  文库制备预混液试剂盒(NEB#6240) 或  NEBNext Ultra II DNA 文库制备试剂盒(NEB#7645)

 

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NEBNext ChIP-Seq 文库制备预混液试剂盒(停产) 货 号 #E6240LNEB酶试剂 New England Biolabs

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#E6240L
60 次反应
13,689.00

#E6240S
12 次反应
3,429.00

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停产通知

 “该产品已停产,推荐替代产品为 NEBNext Ultra II DNA 文库制备试剂盒(NEB #E7645)或 NEBNext Ultra II DNA 文库制备试剂盒-含纯化磁珠(NEB #E7103)或 NEBNext 末端修复模块(NEB #E6050)或 NEBNext 加 dA 尾模块(NEB #E6053)”

概述

The NEBNext ChIP-Seq Library Prep Master Mix Set for Illumina contains reagents for preparation of

libraries for next-generation sequencing on the Illumina platform from 10 ng of ChIP DNA, in a standard workflow. Please note that adaptors and primers are not included in the kit and are available separately.

NEBNext ChIP-Seq 文库制备预混液试剂盒(停产)            货   号                  #E6240L

NEBNext DNA 文库制备试剂——订购信息

NEBNext ChIP-Seq 文库制备预混液试剂盒(停产)            货   号                  #E6240L 

适用于所有平台的试剂

NEBNext ChIP-Seq 文库制备预混液试剂盒(停产)            货   号                  #E6240L

 

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NEBNext DNA 快速文库制备试剂盒 – Ion Torrent 货 号 #E6270LNEB酶试剂 New England Biolabs

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#E6270L
50 次反应
10,909.00

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用于 Ion Torrent 测序平台的DNA 文库制备其它产品

NEBNext DNA 快速片段化 & 文库制备试剂盒 – Ion Torrent

#E6285L   50 次反应 . . . ¥12,009

概述

NEBNext 应用于 Ion Torrent 平台的 DNA 文库制备试剂盒有包含和不包含 DNA 片段化步骤的两种包装。除了每种组份都经过严格的质量监控以外,NEBNext DNA 试剂盒还都经过构建基因组 DNA 文库,再在 Ion Torrent 测序平台测序进行验证。NEBNext 试剂盒里面,各个组份的批号也都被保留下来。大多数的组份都以预混液的形式提供,从而减少了试剂盒里面的管数,也减少了移液操作的步骤。单样本的接头和引物包含在试剂盒中。可以用 Life Technologies 的 Ion XPress™ 检索接头来构建多样本文库。

 NEBNext DNA 快速文库制备试剂盒 - Ion Torrent            货   号                  #E6270L

 

操作流程图

NEBNext DNA 快速文库制备试剂盒 - Ion Torrent            货   号                  #E6270L


适用于所有平台的试剂

NEBNext DNA 快速文库制备试剂盒 - Ion Torrent            货   号                  #E6270L
 

NEBNext DNA 快速片段化 & 文库制备试剂盒-Ion Torrent 货 号 #E6285LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于Ion Torrent或454测序平台

NEBNext DNA 快速片段化 & 文库制备试剂盒-Ion Torrent                              收藏

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#E6285L
50 次反应
12,979.00

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其它产品

NEBNext DNA 快速文库制备试剂盒-Ion Torrent

#E6270L   50 次反应 . . . ¥10,089

 

概述

NEBNext 应用于 Ion Torrent 平台的 DNA 文库制备试剂盒有包含和不包含 DNA 片段化步骤的两种包装。除了每种组份都经过严格的质量监控以外,NEBNext DNA 试剂盒还都经过构建基因组 DNA 文库,再在 Ion Torrent 测序平台测序进行验证。NEBNext 试剂盒里面,各个组份的批号也都被保留下来。大多数的组份都以预混液的形式提供,从而减少了试剂盒里面的管数,也减少了移液操作的步骤。单样本的接头和引物包含在试剂盒中。可以用 Life Technologies 的 Ion XPress™ 检索接头来构建多样本文库。
 
NEBNext DNA 快速片段化 & 文库制备试剂盒-Ion Torrent            货   号                  #E6285L
 

操作流程图

NEBNext DNA 快速片段化 & 文库制备试剂盒-Ion Torrent            货   号                  #E6285L  

适用于所有平台的试剂

NEBNext DNA 快速片段化 & 文库制备试剂盒-Ion Torrent            货   号                  #E6285L

NEBNext® 免疫测序试剂盒(人) 货 号 #E6320LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/免疫测序

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#E6320L
96 次反应
69,119.00

#E6320S
24 次反应
20,159.00

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相关产品

 NEBNext® 免疫测序试剂盒(小鼠)

产品特点

 • 通过对受体序列的深入分析,揭示复杂的免疫系统

对 B 细胞受体(BCR)和 T 细胞受体(TCR)进行富集和测序
制备 B 细胞和 T 细胞的全长免疫基因组库
使用唯一分子标签序列(UMI)准确定量转录本
使用用于生物信息流程(教程)的开源软件工具——pRESTO 分析数据
 

产品说明

 概述

免疫组库测序常常用来分析当下的和过去的免疫应答反应。最常应用领域包括:自身免疫性疾病的表征、肿瘤学、传染病中和抗体的发现、肿瘤浸润淋巴细胞以及用作研究残留病的工具。二代测序(NGS)平台在读长和通量方面的最新进展促进了免疫组库测序的发展。

 
NEBNext® 免疫测序试剂盒(人)通过对 B 细胞和 T 细胞全长免疫组库分析,能获得体细胞的所有突变信息。该试剂盒提供引物模块,可用于分析完整的 V、D、J 区域和 IgM、IgD、IgG、IgA、IgE 亚类,并分析 BCR 轻链、BCR 重链、TCRα 链和 TCRβ 链。该试剂盒还提供唯一分子标签序列(UMI),将来源于同一个分子的 PCR 产物组成共有序列,以便提高测序准确性,消除 PCR 偏差。Galaxy 平台提供一个开源软件工具——pRESTO,用于在本地或云端开展超强生物信息分析。为了确保不熟悉 Galaxy 平台的用户能成功使用分析软件,pRESTO 提供教学教程。
 
抗体和 TCR 结构的简化示意图:
NEBNext® 免疫测序试剂盒(人)            货   号                  #E6320L
 
 
免疫组建库流程:
NEBNext® 免疫测序试剂盒(人)            货   号                  #E6320L
 
产品描述
NEBNext® 免疫测序试剂盒(人)            货   号                  #E6320L
使用唯一分子标签序列(UMI)实现克隆型的精准检测。比较克隆型频率:使用 10 ng 和 100 ng T 细胞总 RNA 制备人类 TCR 文库,在有或没有 UMI 情况下分别建库。根据有 UMI 的测序结果,对前 100 个高表达克隆型进行排序。重复建库,克隆型频率重叠绘制于图中。每个条形或圆点代表一个克隆,该克隆经过总读长分析或使用 UMI 过滤。使用 UMI 可对原始样本中的起始 RNA 分子进行绝对定量。当将克隆按照富集度从高到底进行排序,没有 UMI 的数据会导致 PCR 或测序扩增的偏差,从而误导样本中克隆型频率的分析。UMI 的使用通过对起始样本中 RNA 的绝对定量来校正偏差。使用 UMI 也可以在重复本之间实现更好的相关性,尤其是起始量较低时。各个文库向下抽样 500,000 reads。
 
NEBNext® 免疫测序试剂盒(人)            货   号                  #E6320L
使用 NEBNext 免疫测序试剂盒(人),能够在同一管中制备人 BCR 和 TCR 文库。分别使用 1 μg、100 ng 和 10 ng 人 PBMC 总 RNA(Takara Bio #636592)制备人 BCR+TCR 文库,每个起始量都做有平行实验。所有文库向下抽样 950,000 reads。使用 pRESTO 工具完成 reads 过滤、序列组装和基于 UMIs 组成共有序列。使用 MiGMAP 鉴别 V、D 和 J 区域。图(A)表示每个人类 PBMC 总 RNA 起始样本检测到的克隆型数量。图(B)表示各文库中 B 细胞链和 T 细胞链所占百分比。
 

 

NEBNext® 免疫测序试剂盒(小鼠) 货 号 #E6330LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/免疫测序

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北京库存
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成都库存
苏州库存

#E6330L
96 次反应
69,119.00

#E6330S
24 次反应
20,159.00

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相关产品

NEBNext® 免疫测序试剂盒(人)

产品特点

 • 通过对受体序列的深入分析,揭示复杂的免疫系统

对 B 细胞受体(BCR)和 T 细胞受体(TCR)进行富集和测序
制备 B 细胞和 T 细胞的全长免疫基因组库
使用唯一分子标签序列(UMI)准确定量转录本
使用用于生物信息流程(教程)的开源软件工具——pRESTO 分析数据
 

产品说明

概述:

免疫组库测序常常用来分析当下的和过去的免疫应答反应。最常应用领域包括:自身免疫性疾病的表征、肿瘤学、传染病中和抗体的发现、肿瘤浸润淋巴细胞以及用作研究残留病的工具。二代测序(NGS)平台在读长和通量方面的最新进展促进了免疫组库测序的发展。

 

NEBNext® 免疫测序试剂盒(人)通过对 B 细胞和 T 细胞全长免疫组库分析,能获得体细胞的所有突变信息。该试剂盒提供引物模块,可用于分析完整的 VDJ 区域和 IgMIgDIgGIgAIgE 亚类,并分析 BCR 轻链、BCR 重链、TCRα 链和 TCRβ 链。该试剂盒还提供分子标签序列(UMI,将来源于同一个分子的 PCR 产物组成共有序列,以便提高测序准确性,消除 PCR 偏差。Galaxy 平台提供一个开源软件工具——pRESTO,用于在本地或云端开展超强生物信息分析。为了确保不熟悉 Galaxy 平台的用户能成功使用分析软件,pRESTO 提供教学教程。

 

 抗体和 TCR 结构的简化示意图:

 

 NEBNext® 免疫测序试剂盒(小鼠)            货   号                  #E6330L

 

 免疫组建库流程:

 

 NEBNext® 免疫测序试剂盒(小鼠)            货   号                  #E6330L

产品描述:

NEBNext® 免疫测序试剂盒(小鼠)            货   号                  #E6330L

使用唯一分子标签序列(UMI)实现克隆型的精准检测。在有或没有 UMI 情况下,比较小鼠 TCR 克隆型频率。根据有 UMI 的测序结果,对前 100 个高表达克隆型进行排序。在有或没有 UMI 情况下,重复建库,克隆型频率重叠绘制于图中。每个条形或圆点代表一个克隆,该克隆经过总读长分析或使用 UMI 过滤。使用 UMI 可对原始样本中的起始 RNA 分子进行绝对定量。当将克隆按照富集度从高到底进行排序,没有 UMI 的数据会导致 PCR 或测序扩增的偏差,从而误导样本中克隆型频率的分析。UMI 的使用通过对起始样本中 RNA 的绝对定量来校正偏差。使用 UMI 也可以在重复本之间实现更好的相关性,尤其是起始量较低时。各个文库向下抽样 500,000 reads

NEBNext® 免疫测序试剂盒(小鼠)            货   号                  #E6330L

使用 NEBNext 免疫测序试剂盒(小鼠),能够在同一管中制备小鼠 BCR TCR 文库。分别使用 10 ng100 ng 1,000 ng 小鼠脾脏总 RNATakara Bio #636605)制备小鼠 BCR+TCR 文库,每个起始量都做有平行实验。所有文库向下抽样 1,000,000 reads。使用 pRESTO 工具完成 reads 过滤、序列组装和基于 UMIs 组成共有序列。使用 MiGMAP 鉴别 VD J 区域。图(A)表示每个小鼠脾脏总 RNA 起始样本检测到的克隆型数量。图(B)表示各文库中 B 细胞重链(IGH)和轻链(IGK IGL)以及 链(TRA)、β 链(TRB)、δ 链(TRD)和 γ 链(TRG)所占百分比。

NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒 货 号 #E6420LNEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/Ultra II DNA & RNA

NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒                              收藏

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#E6420L
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48,289.00

#E6420S
24 Rxns
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产品特点

·从单个细胞或 2 pg-200 ng 的总RNA 制备最高产量、最高质量的全长转录本测序文库
·用于极难检测的低丰度转录本
·不同起始量及样本类型,均能保证转录本检测的一致性
·不同起始量及样本类型,均能获得全长转录本和均一的覆盖度
·用于培养细胞、原代细胞和总 RNA 的文库制备
·节省时间:采用快速、精简的工作流程,减少了操作步骤和手动操作时间
·单管完成从细胞裂解到 cDNA 的全部实验流程
·不同 GC 含量的样本,均可使用同一种酶混液、同一种反应条件同时完成 DNA 片段化、末端修复和加 dA 尾三个步骤
·提供包含或不包含文库构建的包装,为实验提供了极大的灵活性
 

概述

NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒可从单个细胞或超低起始量的RNA 构建成全长转录本的高质量文库,优化的工作流程满足了更高灵敏度、更快速的文库构建需求,该试剂盒适用于 Illumina 平台。

优化的 cDNA 合成和扩增步骤包含模板转换,同时采用特有的实验流程和试剂。
该方法可直接从单个细胞或 2 pg-200 ng 的 RNA 合成 cDNA,即使低丰度转录本也可获得高产量的cDNA。后续文库构建采用 NEBNext Ultra II FS DNA 片段化/末端修复/加 dA 尾试剂盒,使建库流程更简单高效
NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒            货   号                  #E6420L
 
使用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒建库,能显著增加转录本检测数量。以 Jurkat 单细胞(6个重复)为样本制备文库,分别采用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒、SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA 试剂盒(Clontech #634891)及Nextera XT DNA Library Prep 试剂盒(Illumina #FC-131-1096)制备文库。文库通过 Illumina NextSeq 500(2 x 76 bp)双端测序。TPM = 每百万个千碱基长度的转录本。每个圆点代表在给定的 TPM 范围内检测到的转录本数量,框代表各个重复和不同方法的中位数、第一四分位数及第三四分位数。使用 Salmon 0.6 完成所有 GENCODE v25 转录本的比对和量化。图中显示了在以下TPM 范围内检测到的转录本数量:1-5、5-10、10-50 和>50 TPM。结果表明:使用NEBNext 文库制备方法能检测到更多的低丰度转录本。
NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒            货   号                  #E6420L
 

使用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒建库,能获得更高的文库产量。以 HeLa 单细胞、Jurkat 单细胞、M1 单细胞和混有推荐量的 ERCC RNA Spike-In 混合物 IThermo Fisher Scientific® #4456740)的 10 pg人通用参考(UHRRNAAgilent #740000)为样本制备文库。分别采用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒、SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA 试剂盒(Clontech #634891)及Nextera® XT DNA 文库制备试剂盒(Illumina #FC-131-1096)制备文库。误差条表示6-11 个重复的标准差使用 NEBNext 试剂盒时,将 80% cDNA 作为起始量,用 8 PCR 循环扩增文库。使用 SMART-Seq v4/Nextera XT 建库时,采用推荐的 125 pgcDNA 作为起始量,用 12 PCR 循环扩增文库。误差条表示6-11 个重复数据的标准差

Whatman10318614定性滤纸-预折叠级995 185MM 100/PK

【简单介绍】

Whatman为客户提供多种多样的特殊实验产品,以满足实验者的不同实验需求。秉承Whatman传统的质量,这些产品集合了易于操作、精确度高、一致性好等优点。

【简单介绍】

Whatman为客户提供多种多样的特殊实验产品,以满足实验者的不同实验需求。秉承Whatman传统的质量,这些产品集合了易于操作、精确度高、一致性好等优点。

【详细说明】

原装进口英国Whatman10318614定性滤纸-预折叠级995 185MM 100/PK

英国Whatman10318614定性滤纸-预折叠级995 185MM 100/PK

产品介绍:

定性滤纸DD预折叠级

Whatman定性滤纸为使用提供了方便,节省了时间,相对

普通平整滤纸,它的优点是:

l 对于重复性或者多重分析,预折叠滤纸节省了折叠成适合

形状的时间。

l 由于更多表面的暴露,可以减少整个过滤时间。一般,过

滤速度的下降是由于颗粒堆积而产生。

l 更多过滤面积使得整体载量也有所上升。

l 折叠后,自我支撑能力的上升,减少同漏斗接触有利于维

持流速。

l 预折叠并不会显著影响技术参数,数值同相应的平整滤纸

一样。

Grade 2V : 8 μm

广泛用于多种目的的过滤。具有非常良好的颗粒保留能力、

过滤速度及载量。平整型号为Grade 2

Grade 5V : 2.5 μm

在定性范围内最大程度的保留细小颗粒。能够保留化学分析

中的沉淀物,流速相对较慢。适合用于浑浊溶液澄清和水、

土壤分析。平整型号为Grade 5

Grade 113V : 30 μm

褶皱表面,非常厚并且坚韧的滤纸,具有极高的载量。在

所有定性级中是流速最快的。适合粗颗粒和胶状沉淀物的

过滤。平整型号为Grade 113

Grade 114V : 25 μm

强韧,非常高流速的滤纸。适合粗颗粒和胶状沉淀物过滤。

表面平滑。平整型号为Grade 114

Grade 287 ?

硅藻土滤纸,中等偏慢的流速。有吸附效应,例如,分离

非常细的半胶体浑浊物、澄清牛奶血清、淀粉溶液、土壤

悬浊液或者含糖溶液在测定旋光性和折射度之前的过滤。

平整型号为Grade 287

Grade 520 a? : 15-18 μm

薄型滤纸,很好的湿强和很高的流速。经常用于过滤高粘

度液体和乳液(例如甜果汁,酒、糖浆,树脂溶液,油或者

植物提取物)。平整型号为Grade 520a

Grade 520 bll ? : 15-19 μm

厚型滤纸,高湿强,提供了很高的流速。平整型号为Grade

520 bⅡ。

Grade 588 ?

快速滤纸。被许多标准方法引用,例如动物饲料中黄曲霉素

的鉴定(BS5766-7)和泥土中水银含量测定(EPA方法105)

平整型号为Grade 588

Grade 591 ? : 87-12 μm

比较厚的滤纸,更高的载量,适合快速过滤培养基和粗颗粒。

有高吸附性能和高湿强度。平整型号为Grade 591

Grade 595 ? : 4-7 μm

非常大众化的薄型滤纸,对中等至细小颗粒有中等快速截

留能力。在不同工业中,常用于日常分析(例如,食品提取

物中颗粒分离或者从可消化环境样品中分离固体物质,用于

ICP/AAS分析)已经折叠好的型号为Grade595?。平整型号为

Grade 595

Grade 597 ? : 4-7 μm

中等流速,中等颗粒保留能力的滤纸。应用于不同工业中大

量日常分析,如食品测试(脂肪含量的测定),或者从饲料中

除去二氧化碳和浑浊物(啤酒分析)。平整型号为Grade 597

Grade 598 ? : 8-10 μm

厚型滤纸,高负载力。中等截留能力,中等偏快速的过滤速

度。平整型号为Grade 598

Grade 602h ? : <2 μm

用于收集细小颗粒、去除细小沉淀物的紧密滤纸。用于样品

制备,例如在饮料行业中测定糖残留、酸性光谱、折射分析

HPLC。平整型号为Grade 602h

Grade 0858 ? : 7-12 μm

带纹理,中等偏快流速、中等保留能力,是一种通用滤纸。

用于提取物、油、啤酒、糖浆等的过滤。也用于正压过滤或

者液体抽提。平整型号为Grade 0858

Grade 0860 ? : 12 μm

Grade 0858类似,但表面光滑,稍微薄一些,流速更快。

平整型号为Grade 0860

Grade 0905 ? : 12-25 μm

皱纹纸,用于粗颗粒过滤,提供非常高的过滤速度。平整型

号为Grade 0905

Grade 1573 ? : 12-25 μm

快速高湿强滤纸。表面非常光滑,非常利于将沉淀洗脱。对

硫酸硝酸溶液(最高到40%50°C)、盐酸(10% 100°C

20% 60°C25% 20°C)和碱金属(最高10% 20°C)耐受。平

整型号为Grade 1573

Grade 1574 ? : 7-12 μm

中等流速高湿强滤纸。化学相容性同Grade 1573(见上面的

Grade 1573)。平整型号为Grade 1574

Grade 2555 ?

中等快速滤纸。用于麦芽提取物中麦芽浆、麦芽汁的过滤以

及从啤酒中去除二氧化碳。

英国Whatman10318614定性滤纸-预折叠级995 185MM 100/PK

英国Whatman10318614定性滤纸-预折叠级995 185MM 100/PK

英国Whatman10318614定性滤纸-预折叠级995 185MM 100/PK

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10316114

3000 185MM 1000/PK

10316619

3459 230MM 1000/PK

10318220

588 240MM 100/PK

10318614

995 185MM 100/PK

10318622

995 320MM 100/PK

10318862

997 12.7MM 500/PK

上海金畔生物科技有限公司

文章号20129860-20129860

NEBNext单细胞/超低起始量 cDNA 合成 &扩增模块 货 号 #E6421LNEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

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#E6421L
96 Rxns
26,919.00

#E6421S
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特性

从单个细胞或 2 pg-200 ng 的总RNA 制备最高产量、最高质量的全长转录本测序文库
用于极难检测的低丰度转录本
不同起始量及样本类型,均能保证转录本检测的一致性
不同起始量及样本类型,均能获得全长转录本和均一的覆盖度
用于培养细胞、原代细胞和总 RNA 的文库制备
节省时间:采用快速、精简的工作流程,减少了操作步骤和手动操作时间
-单管完成从细胞裂解到 cDNA 的全部实验流程
-不同 GC 含量的样本,均可使用同一种酶混液、同一种反应条件同时完成 DNA 片段化、末端修复和加 dA 尾   三个步骤
提供包含或不包含文库构建的包装,为实验提供了极大的灵活性
 

 

概述

NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒可从单个细胞或超低起始量的RNA 构建成全长转录本的高质量文库,优化的工作流程满足了更高灵敏度、更快速的文库构建需求,该试剂盒适用于 Illumina 平台。
 
优化的 cDNA 合成和扩增步骤包含模板转换,同时采用特有的实验流程和试剂。
该方法可直接从单个细胞或 2 pg-200 ng 的 RNA 合成 cDNA,即使低丰度转录本也可获得高产量的cDNA。后续文库构建采用 NEBNext Ultra II FS DNA 片段化/末端修复/加 dA 尾试剂盒,使建库流程更简单高效
NEBNext单细胞/超低起始量 cDNA 合成 &扩增模块            货   号                  #E6421L
 
使用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒建库,能显著增加转录本检测数量。以 Jurkat 单细胞(6个重复)为样本制备文库,分别采用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒、SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA 试剂盒(Clontech #634891)及Nextera XT DNA Library Prep 试剂盒(Illumina #FC-131-1096)制备文库。文库通过 Illumina NextSeq 500(2 x 76 bp)双端测序。TPM = 每百万个千碱基长度的转录本。每个圆点代表在给定的 TPM 范围内检测到的转录本数量,框代表各个重复和不同方法的中位数、第一四分位数及第三四分位数。使用 Salmon 0.6 完成所有 GENCODE v25 转录本的比对和量化。图中显示了在以下TPM 范围内检测到的转录本数量:1-5、5-10、10-50 和>50 TPM。结果表明:使用NEBNext 文库制备方法能检测到更多的低丰度转录本。
NEBNext单细胞/超低起始量 cDNA 合成 &扩增模块            货   号                  #E6421L
 
使用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒建库,能获得更高的文库产量。以 HeLa 单细胞、Jurkat 单细胞、M1 单细胞和混有推荐量的 ERCC RNA Spike-In 混合物 IThermo Fisher Scientific® #4456740)的 10 pg人通用参考(UHRRNAAgilent #740000)为样本制备文库。分别采用 NEBNext单细胞/超低起始量 RNA 文库制备试剂盒、SMART-Seq v4 Ultra Low Input RNA 试剂盒(Clontech #634891)及Nextera® XT DNA 文库制备试剂盒(Illumina #FC-131-1096)制备文库。误差条表示6-11 个重复的标准差使用 NEBNext 试剂盒时,将 80% cDNA 作为起始量,用 8 PCR 循环扩增文库。使用 SMART-Seq v4/Nextera XT 建库时,采用推荐的 125 pgcDNA 作为起始量,用 12 PCR 循环扩增文库。误差条表示6-11 个重复数据的标准差

 
 

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 1(96 种 Unique 双端) 货 号 #E6440LNEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/接头 & 引物

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 1(96 种 Unique 双端)                              收藏

货 号
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#E6440L
384 rxns
23,449.00

#E6440S
96 rxns
6,519.00

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相关产品

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 2(96 种 Unique 双端)

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 3 (96 种 Unique 双端)

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 4 (96 种 Unique 双端)

产品特点

·提高连接效率
·极大降低接头二聚体
·增加文库产量
·增加样品识别特异性(双端检索)
·独特的双端检索引物对可以检测标签跳跃
·大量单端检索/可用检索
·提供检索表和样本示例表
 

概述

NEBNext 接头是为 DNA、ChIP DNA 和 RNA(不包括 Small RNA)文库构建而设计的,能够确保接头的高效连接及文库的高产量,并且最大限度的减少接头二聚体的形成。NEBNext 接头包含一个特殊的发卡环状结构,能够更高效的和经末端修复的带 dA 尾的 DNA 结合。环状结构包含一个 U,当 U 被 USER® 酶(由 UDG 和内切酶 VIII 组合而成)切掉后,环状结构打开,使它可以成为 PCR 的反应底物。检索序列通过 PCR 引入文库,从而实现了多样本的制备。NEBNext 接头引物不仅能够用于 NEBNext 产品,也可以用于其它的兼容 Illumina 标准平台的文库制备方法。
 
提供单端和双端检索引物。双端检索引物可以解决 Illumina 测序仪标签跳跃(Index hopping)的问题。
 
功能验证
每个试剂盒都通过文库构建,并在 Illumina 平台测序进行验证。
 
 
 NEBNext 多样本接头引物试剂盒 1(96 种 Unique 双端)            货   号                  #E6440L

贮存温度

-20°C

 

请登陆 NEBNextSelector.neb.com 可以使用在线产品选择工具进行产品选择。

 

CRISPR全基因组sgRNA文库系统酶试剂盒Takara


CRISPR全基因组sgRNA文库系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632646 Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library System 5 Screens ¥21,144 CRISPR全基因组sgRNA文库系统 CRISPR全基因组sgRNA文库系统 CRISPR全基因组sgRNA文库系统
Clontech 632647 Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library NGS Analysis Kit 10 Rxns ¥7,004 CRISPR全基因组sgRNA文库系统 CRISPR全基因组sgRNA文库系统 CRISPR全基因组sgRNA文库系统
Clontech 632651 Guide-it CRISPR Genome-Wide Library PCR Kit 20 Rxns ¥3,445 CRISPR全基因组sgRNA文库系统 CRISPR全基因组sgRNA文库系统 CRISPR全基因组sgRNA文库系统
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无标题文档

 
 
CRISPR全基因组sgRNA文库系统 CRISPR全基因组sgRNA文库系统 CRISPR全基因组sgRNA文库系统 CRISPR全基因组sgRNA文库系统 CRISPR全基因组sgRNA文库系统
 
 
注意:购买632646产品时,需要填写专利确认书
 
CRISPR全基因组sgRNA文库系统
· 包含超过76,000条基于Brunello文库的sgRNAs,既可以实现更高的靶向特异性和靶向活性,
   同时也可以保持很低的脱靶效应点击下载sgRNA representation data.
· 每一个人类基因对应4条高活性sgRNAs, 可以通过单一模块进行筛选
· 优化后的sgRNA scaffold有助于加强Cas9-sgRNA之间的相互作用,实现高基因编辑效率
· 慢病毒sgRNA文库已与Lenti-X Packaging Single Shots和Xfect Transfection Reagent
   配制在一起,因此只需要加入水就可以获得高效转染混合液,用于转染Lenti-X 293T cells
   制备高滴度慢病毒sgRNA文库
· 自失活慢病毒载体保证慢病毒制备和使用过程中高水平的生物安全性
 
Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library System可以使用CRISPR/Cas9在人细胞中轻松实现全基因组表型敲除筛选。Lenti-X Single Shots包含了全基因组sgRNA文库和Cas9表达系统,可方便制备出稳定表达Cas9和sgRNA文库的细胞系进行每一次筛选。该sgRNA文库是基于Brunello文库 (Doench et al. 2016; Doench, 2018) 所构建的,包含了超过76,000条向导RNA以及非靶向sgRNA对照,每一个人类基因对应4条高效率sgRNAs,可对大约19,000个基因进行有效筛选。文库筛选后,使用Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library NGS Analysis Kit制备NGS样品进行新一代测序分析,此试剂盒包含了以sgRNA文库转导后的细胞来制备NGS样品所必需的引物和试剂。
 
我们精心构建这个sgRNA文库以确保其固有的sgRNA代表性。在文库合成、扩增、病毒制备和靶细胞转导每一步操作过程中,我们都会对sgRNA代表性进行检测。Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library System包含经过验证的构建在慢病毒载体上的sgRNA文库和Lenti-X 293T cells,这个sgRNA文库以脱水形式提供。只需要添加水至冻干的文库混合物中就可以获得高效转染混合液,然后将混合物添加至293T细胞的培养液中进行转染就可以制备获得慢病毒粒子。每一批sgRNA文库都通过NGS进行了检测,确保超过90%的sgRNAs在10倍分布范围以内。我们也优化了pLVXS-sgRNA-mCherry-hyg载体中的sgRNA scaffold序列,有助于加强Cas9-sgRNA之间的相互作用,实现高基因编辑效率。本系统通过使用高滴度的慢病毒包装系统Lenti-X Packaging Single Shots,可以有效维持慢病毒sgRNA文库的代表性。
 
应用:
· 人细胞全基因组表型筛选
· 功能缺失型遗传筛选
 
注意事项:
· Guide-it CRISPR Genome-Wide Library PCR Kit (Code No. 632651) 包含了扩增sgRNA进行
   NGS分析的所有引物和试剂,起始样品为从筛选出的细胞群分离提取的基因组DNA,
   此试剂盒可用于制备10个测序文库(20 PCRs)。
· Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library NGS Analysis Kit (Code No. 632647)包含
   Guide-it CRISPR Genome-Wide Library PCR Kit和基因组DNA纯化试剂以及PCR产物纯化试剂。
 
参考文献:
Doench, J.G. Am I ready for CRISPR? A user’s guide to genetic screens. Nat. Rev. Genet.19, 67 80 (2018).
Doench, J.G. et al. Optimized sgRNA design to maximize activity and minimize off-target effects of CRISPR-Cas9. Nat. Biotechnol. 34, 184 191 (2016).
 
Technical Notes
CRISPR全基因组sgRNA文库系统 Performing a phenotypic screen using the Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library System
 
CRISPR screening webinar
Lentiviral CRISPR/Cas9 knockout screening made simple
 
 
实验例:
CRISPR全基因组sgRNA文库系统
图1 Guide-it CRISPR sgRNA文库所使用的载体和sgRNA scaffold示意图。Panel A. 从pLVXS-EF1a-Cas9-PGK-Puro和pLVXS-sgRNA-mCherry-hyg 载体图谱中我们可以观察到所使用的慢病毒载体骨架。这些慢病毒载体经过了自失活处理,以提高病毒制备和使用过程中的生物安全性。pLVXS-sgRNA-mCherry-hyg载体包含一个IRES连接的双顺反子表达框,可以同时表达mCherry红色荧光标记和潮霉素抗性筛选标记。sgRNAs由人U6启动子表达,包含经过优化的scaffold序列,可以高效招募Cas9,实现更高的基因编辑效率(Panel B)。
 
CRISPR全基因组sgRNA文库系统
图2 通过mCherry红色荧光判断慢病毒sgRNA文库的转导效率。按照用户手册的指导来制备慢病毒sgRNA文库,转染48小时后收集慢病毒粒子,以不同的MOIs转导表达Cas9的A375细胞。接种培养转导后的细胞,转导48小时后通过荧光显微镜和FACS 检测转导效率。
 
CRISPR全基因组sgRNA文库系统
图3 Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library System包含的sgRNA代表性分析。Panel A. 质粒文库中的sgRNA代表性分析。将基于Brunello的sgRNA文库克隆至pLVXS-sgRNA-mCherry-hyg载体并进行扩增,通过NGS验证这个质粒文库中的sgRNAs代表性。检测结果显示,这个文库中超过90%的sgRNAs在10倍分布范围以内。图表中的柱形表示具有特定读段数的sgRNA数量。Panel B. 比较质粒文库和转导细胞中的sgRNA代表性。以潮霉素为筛选标记,筛选出Cas9+/sgRNA+ A375细胞,提取基因组DNA并进行PCR扩增。测序分析PCR产物,检测PCR产物中每一个整合的sgRNA相对于起始质粒DNA文库的读数。Spearman和Pearson相关性分析结果显示这两者都具有强相关性,这说明这个系统无论是在经过转导的细胞中还是筛选后的细胞中都可以有效保持sgRNA的代表性。
 
CRISPR全基因组sgRNA文库系统
图4 使用6-硫鸟嘌呤(6-TG,一种核苷酸类似物癌症治疗药物)作为筛选标记进行sgRNA文库筛选的操作流程示意图。sgRNA文库转导Cas9+ A375细胞后,进行潮霉素筛选、细胞扩培,之后将Cas9+/sgRNA+细胞传代至两个培养皿中。在其中一皿Cas9+/sgRNA+细胞培养液中添加6-TG,另外一皿细胞不添加6-TG使用常规培养条件进行培养。细胞扩培之后,使用Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library NGS Analysis Kit提取基因组DNA并制备测序样品。
 
CRISPR全基因组sgRNA文库系统
图5 从6-thioguanine (6-TG)筛选出的细胞中分离提取sgRNAs进行鉴定分析。Panel A. 比较用于制备慢病毒的原始质粒文库和转导后未经筛选/筛选后细胞中的sgRNA代表性。作用于HPRT(红点)和NUDF5的4条sgRNAs(黑点)均富集在6-TG筛选过的细胞中。在质粒文库(灰色)和转导后未经筛选的细胞(橘色)中,这些sgRNAs的表征也是可以检测到的。Panel B. 在经过6-TG筛选后的细胞中,sgRNA的代表性就发生了转变(蓝色)。在这个相关性分析中,重点标注出了被富集的单个sgRNAs(红点和橘点)。插图显示了与未经筛选的细胞相比,在筛选后的细胞中作用于HPRT的4条sgRNAs的富集倍数。
 
■ 产品组份
Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library System(Code No. 632646)
Guide-it Cas9 Lentiviral Transfection Mix 5 vial
Guide-it Lentiviral sgRNA Library Transfection Mix 5 vial × 2
pLVXS-sgRNA-mCherry-hyg Vector (0.5 μg/μl) 10 μl
Lenti-X 293T Cell Line 1 ml
Lenti-X GoStix Plus  
· Chase Buffer 3 ml
· Lenti-X GoStix Plus 3 testes
· p24 Control 5 testes
   
Guide-it CRISPR Genome-Wide Library PCR Kit(Code No. 632651)
LVXS P5 primer pool with index 1 (10 μM) 100 μl
LVXS P7 primer with index 2 (10 μM) 100 μl
LVXS P7 primer with index 3 (10 μM) 100 μl
LVXS P7 primer with index 4 (10 μM) 100 μl
LVXS P7 primer with index 5 (10 μM) 100 μl
TaKaRa Ex Taq (5 U/μl) 30 μl
10X Ex Taq Buffer (Mg2+ plus) 500 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each) 400 μl
   
Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library NGS Analysis Kit(Code No. 632647)
Guide-it CRISPR Genome-Wide Library PCR Kit(Code No. 632651)
NucleoBond CB 500(Code No. 740509)
NucleoSpin Gel and PCR Clean-up (Code No. 740609.10)
 
 
产品详情请点击:CRISPR全基因组sgRNA文库系统
 

页面更新:2020-04-20 14:11:15

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 2(96 种 Unique 双端) 货 号 #E6442LNEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/接头 & 引物

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 2(96 种 Unique 双端)                              收藏

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#E6442L
384 rxns
23,449.00

#E6442S
96 rxns
6,519.00

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产品特点

·提高连接效率
·极大降低接头二聚体
·增加文库产量
·增加样品识别特异性(双端检索)
·独特的双端检索引物对可以检测标签跳跃
·大量单端检索/可用检索
·提供检索表和样本示例表
 

概述

NEBNext 接头是为 DNA、ChIP DNA 和 RNA(不包括 Small RNA)文库构建而设计的,能够确保接头的高效连接及文库的高产量,并且最大限度的减少接头二聚体的形成。NEBNext 接头包含一个特殊的发卡环状结构,能够更高效的和经末端修复的带 dA 尾的 DNA 结合。环状结构包含一个 U,当 U 被 USER® 酶(由 UDG 和内切酶 VIII 组合而成)切掉后,环状结构打开,使它可以成为 PCR 的反应底物。检索序列通过 PCR 引入文库,从而实现了多样本的制备。NEBNext 接头引物不仅能够用于 NEBNext 产品,也可以用于其它的兼容 Illumina 标准平台的文库制备方法。
 
提供单端和双端检索引物。双端检索引物可以解决 Illumina 测序仪标签跳跃(Index hopping)的问题。
 
功能验证
每个试剂盒都通过文库构建,并在 Illumina 平台测序进行验证。
 
 
 NEBNext 多样本接头引物试剂盒 2(96 种 Unique 双端)            货   号                  #E6442L

贮存温度

-20°C

 

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Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备酶试剂盒Takara


Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632612 Guide-it CRISPR/Cas9 Vector System 1 System ¥4,641 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
Clontech 632613 Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System 1 System ¥9,225 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
Clontech 632616 Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Packaging Set 10 Rxns ¥7,076 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
Clontech 632617 Gesicle Producer 293T Cell Line 1 ml ¥7,650 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
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          基因敲除    
          Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备 Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备            
  基因敲入        
          Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备        
 
 
Guide-itCRISPR/Cas9 Gesicle Production System
· 细胞来源的纳米囊泡(Gesicle),可用于直接导入Cas9-sgRNA
· 转染效率低的哺乳动物细胞(分裂細胞、非分裂細胞、iPS細胞)也可实现有效的基因编辑
· Cas9蛋白质/sgRNA复合物可以快速从细胞内消除,降低脱靶效应
 
■ 产品说明:
Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System用于制备Cas9/sgRNA Gesicle,Cas9/sgRNA Gesicle是可以将Cas9蛋白质/sgRNA复合物导入到哺乳动物细胞的细胞来源的纳米囊泡(Gesicle)。与采用质粒或者病毒载体相比较,采用Cas9/sgRNA Gesicle进行基因编辑实验,可以实现在广泛细胞类型中高效导入Cas9蛋白质/sgRNA复合物,从而提高基因编辑效率。同时,可以严格控制用于细胞的Cas9蛋白质/sgRNA复合物的剂量和持续时间,从而降低脱靶效应。
 
■ CRISPR/Cas9 Gesicle特点:
· 适用于多种细胞类型
   可在分裂细胞、非分裂细胞、原代细胞、细胞株、iPS细胞等多种细胞类型中进行基因编辑(图4)
· 高活性Cas9蛋白质/sgRNA确保有效的细胞导入
   Cas9蛋白质/sgRNA直接导入细胞,无需转录和翻译过程,导入后可以直接开始基因编辑
· 实现在需要的时候进行基因编辑
   可以严格控制Cas9蛋白质/sgRNA复合物的剂量和持续时间,与采用质粒或者病毒载体导入系统进行
   基因编辑相比较,降低了脱靶效应
 
■ CRISPR/Cas9 Gesicle原理:
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
图1. Cas9/sgRNA Gesicle制备和靶细胞导入
 
(Step 1) 将诱导Gesicle形成的质粒预混液,靶特异sgRNA表达载体和Cas9表达载体共转染至Gesicle Producer 293T Cell Line (Code No. 632617)中。(Step 2) 利用Clontech iDimerize系统技术原理,借助与gesicle表面的膜结合红色荧光蛋白质CherryPicker之间的相互作用, iDimerize诱导配体将Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物载入到gesicle中。(Step 3) 携带红色荧光标记的Gesicle装配完成并从制备细胞中释放出来,收集培养基上清液,获得Cas9-sgRNA Gesicle浓缩储液。(Step 4) 收集获得的Gesicle适用于广泛细胞类型,可将靶细胞瞬时标记为红色并将Cas9-sgRNA复合物释放至靶细胞中。由于Cas9蛋白质C端有核定位信号(NLS),同时靶细胞培养液中没有dimerizer诱导配体,因此可以确保Cas9-sgRNA复合物与红色荧光蛋白质分离之后可以转运至细胞核内。
 
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
图2.Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System实验流程
 
■ 实验例
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
图3. 脱靶效应比较
 
比较采用Cas9-sgRNA Gesicle和质粒系统导入sgRNA所带来的脱靶效应。凝胶电泳结果、Guide-it Mutation Detection Kit检测结果以及测序结果均表明,采用Cas9-sgRNA Gesicle导入sgRNA时在潜在脱靶位点检测不到明显的脱靶效应,而采用质粒系统导入sgRNA时在靶基因位点EMX1和潜在脱靶位点均可检测到基因突变。
 
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
图4. 不同细胞类型中基因敲除效率比较
 
建立整合ZsGreen1表达框的不同细胞系,采用Cas9-sgRNA Gesicle(sgRNA以ZsGreen1为靶基因)处理细胞系,流式细胞仪进行结果分析。以添加不同量的ZsGreen1为靶基因的Cas9-sgRNA Gesicle(添加量分别为10 μl、20 μl、30 μl)处理组为实验组、以转染Cas9/sgRNA表达质粒处理组作为对照组,流式细胞仪检测基因敲除效率。
在Jurkat等难转染细胞类型中,Cas9-sgRNA Gesicle的Cas9-sgRNA导入效率和ZsGreen1基因敲除效率要优于Cas9/sgRNA表达质粒。
 
Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
图5.成功敲除hiPS细胞中的CD81基因
 
以人CD81为靶标设计sgRNA,采用Gesicle Producer 293T Cell Line制备产生含有Cas9-sgRNA复合物的细胞纳米囊泡,收集Cas9-sgRNA Gesicle并将其添加至48孔板培养的未分化Cellartis human iPS cell line 18(Code No. Y00305)。Cellartis human iPS cell line 18以Cellartis DEF-CS Culture System(Code No. Y30010)为培养体系,培养6 hr和24 hr后更换为不含有Gesicle的DEF-CS培养基继续培养7天。未添加Gesicle处理并且采用相同培养条件培养的Cellartis human iPS cell line 18作为实验对照组。通过流式细胞仪检测经Gesicle处理和未经Gesicle处理的Cellartis human iPS cell line 18, 采用FITC标记的CD81抗体检测细胞表面CD81的表达情况。
Panel A. 未经处理的Cellartis human iPS cell line 18(左)和FITC标记的CD81抗体检测未经Gesicle处理的Cellartis human iPS cell line 18(右)。 Panel B. FITC标记的CD81抗体检测经Gesicle处理6 hr(左)和24 hr(右)的Cellartis human iPS cell line 18。
流式细胞仪检测结果表明, 经Cas9/sgRNA Gesicle处理6 hr 后,CD81基因敲除效率为43%;经Cas9/sgRNA Gesicle处理24 hr 后,CD81基因敲除效率为49%。
 
■ 产品组份
Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Production System(Code No. 632613)
1. Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Packaging Set( Code No. 632616)
Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Packaging Mix 1 (green cap) 10 vials
Guide-it CRISPR/Cas9 Gesicle Packaging Mix 2 (yellow cap) 10 vials
A/C Heterodimerizer (500 nM in Ethanol) 50 μl
Protamine Sulfate (4 mg/ml) 200 μl
 
2. pGuide-it-sgRNA1 Vector System( Code No. 632612)
a.pGuide-it-sgRNA1 Vector (Linear) (7.5 ng/μl) 20 μl
b.Guide-it Ligation Components v2  
    DNA Ligation Mighty Mix 50 μl
    Guide-it Oligo Annealing Buffer 1.5 ml
    Guide-it Control Annealed Oligos v2 (100 fmol/μl) 10 μl
    Guide-it Sequencing Primer 1 (100 pmol/μl) 10 μl
    PCR-Grade Water 1 ml
c.Stellar Competent Cells( Code No. 636763)  
    Stellar Competent Cells (100 μl/tube) 10 tubes
    SOC Medium (1 ml/tube) 10 tubes
    pUC19 Vector (0.1 ng/μl) 10 μl
 
Gesicle Producer 293T Cell Line(Code No. 632617)
Gesicle Producer 293T Cell Line 1 ml
 
■ 保存
Stellar Competent Cells:-80℃
其它:-20℃

Gesicle Producer 293T Cell Line :液氮保存
· 收到产品后,立即将其保存在液氮中。
· 在液氮保存的情况下,立即复苏细胞进行细胞培养。

 
■ 所需要的其它产品(主要产品)
· 0.45 μm 无菌过滤器(cellulose acetate或者polysulfonate)
· 20 ml 无菌注射器
· 50 ml 离心管 (Corning Falcon Cat. No. 352017等)
· 离心机、摆动转子(50 ml 离心管可以满足8,000X g离心要求)(例如:离心机Beckman J2-HS、摆动转子 JS-7.5 swinging bucket rotor)
· 不含氯化钙和氯化镁的Dulbecco’s PBS(用于细胞培养)(Sigma Cat. No. D8537等)
· 细胞培养液
· 胶原蛋白质预包被培养板
 
产品详情请点击:Cas9-sgRNA细胞纳米囊泡制备
 
 

页面更新:2020-03-05 10:48:39

NEBNext 多样本接头引物试剂盒 3 (96 种 Unique 双端) 货 号 #E6444LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 用于二代测序的 NEBNext® 试剂 – 适用于 Illumina 测序平台/接头 & 引物

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货 号
规 格
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北京库存
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广州库存
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#E6444L
384 rxns
23,449.00

#E6444S
96 rxns
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·提高连接效率
·极大降低接头二聚体
·增加文库产量
·增加样品识别特异性(双端检索)
·独特的双端检索引物对可以检测标签跳跃
·大量单端检索/可用检索
·提供检索表和样本示例表
 

概述

NEBNext 接头是为 DNA、ChIP DNA 和 RNA(不包括 Small RNA)文库构建而设计的,能够确保接头的高效连接及文库的高产量,并且最大限度的减少接头二聚体的形成。NEBNext 接头包含一个特殊的发卡环状结构,能够更高效的和经末端修复的带 dA 尾的 DNA 结合。环状结构包含一个 U,当 U 被 USER® 酶(由 UDG 和内切酶 VIII 组合而成)切掉后,环状结构打开,使它可以成为 PCR 的反应底物。检索序列通过 PCR 引入文库,从而实现了多样本的制备。NEBNext 接头引物不仅能够用于 NEBNext 产品,也可以用于其它的兼容 Illumina 标准平台的文库制备方法。
 
提供单端和双端检索引物。双端检索引物可以解决 Illumina 测序仪标签跳跃(Index hopping)的问题。
 
功能验证
每个试剂盒都通过文库构建,并在 Illumina 平台测序进行验证。
 
 
 NEBNext 多样本接头引物试剂盒 3 (96 种 Unique 双端)            货   号                  #E6444L

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-20°C

 

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