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| ■ 产品简介 |
| Capturem™ His-Tagged Purification Kit是以镍离子为配基，结合Capturem™ 新型膜技术开发的用于His标签蛋白质快速分离纯化的产品。与传统的固定化金属离子树脂相比，Capturem™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造，增加了膜孔表面积，对His标签蛋白质的结合能力≥75 mg/cm3。产品最突出的特点是柱床体积小，可在室温下操作，纯化简单快速，比传统树脂的应用范围更加灵活广泛。有小量（miniprep）、中量（maxiprep）、大量（large volume）以及高通量（24 well和96 well）五种规格可供选择。 |
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| ■ 产品特点 |
· 室温下操作，可应用于哺乳动物细胞和细菌样品
· 操作简单快速，蛋白质小量纯化5 min即可完成，大量纯化也仅需15-30 min
· 操作时间短，有利于蛋白质样品保持活性
· 柱床体积小、带入污染少，与传统的镍离子树脂相比，产物纯度更高
· 一次性使用纯化柱，避免样品之间交叉污染
· 除了部分产品中提供的xTractor Buffer以外，还兼容其他的裂解buffer，通用性强
· 兼容多种添加剂（如β-ME、EDTA、DTT、甘油、TCEP等），可在变性或非变性条件下进行纯化 |
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| ■ Capturem™ 膜原理 |
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| ■ 产品主要参数 |
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| *收量多少取决于样品的类型、物种以及抗体同种型（isotype）。 |
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| 上图A图红色方框部分为Capturem His-Tagged Purification Large Volume Units（白底的瓶顶装置），B图红色方框部分为滤瓶螺纹接头 (可用于33-45 mm直径的瓶口)。图A为纯化装置直接与直径为33 mm的螺纹滤瓶直接连接。图C为纯化装置通过螺纹接头连接了45 mm的滤瓶。图D为纯化装置与50 ml的tube直接连接。 |
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| 上图为使用Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume Unit从细菌裂解液中纯化过表达的6×His-GFPuv的演示示例。图A.将纯化装置与直径为33 mm的螺纹滤瓶直接连接。图B.将含有目的蛋白质的澄清裂解液上样。图C.膜在上样和洗涤操作后结合了目的蛋白质，因此呈现出绿色荧光蛋白（GFP）特征性的黄绿色，在洗脱操作之后恢复为初始的白色。图D.目的蛋白质6×His-GFPuv被洗脱进50 ml的收集tube中。 |
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| ■ 操作流程 |
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| ■ 实验例 |
| 实验例1 |
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| Capturem纯化柱对不同浓度的多种类添加试剂有良好的兼容性。上图为使用miniprep kit对不同种类不同浓度添加剂的检测结果，操作按照产品说明书进行。每项实验的样品、平衡液、洗涤液及洗脱液中均有所要检测的添加试剂，样品最终进行两次300 μl的洗脱操作。 |
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| 兼容试剂一览表 |
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| Reagent |
Compatibility* |
| MOPS |
200 mM |
| HEPES |
200 mM |
| Tris |
200 mM |
| EDTA |
10 mM |
| Beta-mercaptoethanol |
30 mM |
| DTT |
10 mM |
| TCEP |
5 mM |
| Guanidine-HCl |
6 M |
| Urea |
8 M |
| Nonionic detergent (Triton X-100) |
2% |
| Nonionic detergent (Tween 20) |
2% |
| Anionic detergent (SDS) |
1% |
| Arginine |
500 mM |
| Glycine |
100 mM |
| Histidine |
20 mM |
| Sodium chloride |
2 M |
| Imidazole |
40 mM |
| Glycerol |
10% |
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| * 表中数据为本产品经测试能够兼容的试剂的最高浓度。 |
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| 实验例2 |
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| Capturem纯化柱在变性条件下纯化效果良好。使用miniprep kit按照产品说明书进行操作。根据变性和非变性条件添加适当的buffer，每个纯化柱上样均为800 μl表达6×his-GFPuv的细胞裂解上清液，样品中按需要添加8 M尿素或6 M盐酸胍。 |
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| 实验例3 |
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| Capturem纯化柱纯化哺乳动物细胞表达的6×His标签蛋白质。图A和B，将编码6×his-tagged MAPK1或 6×his-tagged ADRB2的质粒转染293T细胞进行培养。细胞裂解后取澄清的上清液上样，然后用400 μl wash buffer洗涤，再使用300 μl elution buffer洗脱。将各步骤组分通过4-20%的聚丙烯凝胶电泳检测，并做硝酸纤维素膜印记检测。图A左图，丽春红染色显示不同组分中的所有蛋白质。图A右图，用MAPK1特异性抗体做免疫印迹实验可检测到对应条带。图B左图，丽春红染色显示不同组分中的所有蛋白质。图B右图，用ADRB2特异性抗体做免疫印迹实验可检测到产物中富集的ADRB2。图C，使用编码DsRed-Express2和6×his-tagged Metridia luciferase的双顺反子质粒转染293T细胞，在10 cm的培养皿中培养。取细胞培养上清液用maxiprep柱纯化，6 ml wash buffer洗涤，1 ml elution buffer洗脱。所有离心操作的参数为2,000×g离心5 min，最后通过Ready-to-Glow™ 对各组分中的荧光素酶的活性进行分析。 |
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| ■ 各种试剂盒组成 |
| · Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep Kit （635710） |
| Capturem His-Tagged Purification Miniprep Column |
20 个 |
| xTractor Buffer |
15 ml × 2 |
| Wash Buffer |
10 ml |
| Elution Buffer |
10 ml |
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| · Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Kit （635713） |
| Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column |
6 个 |
| Capturem Maxiprep Filters |
6 个 |
| xTractor Buffer |
200 ml |
| Wash Buffer |
40 ml |
| Elution Buffer |
15 ml |
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| · Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns（635715）* |
| Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column |
25 个 |
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| · Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns（635719）* |
| Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column |
50 个 |
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| · Capturem™ His-Tagged Purification 96（635714）* |
| Capturem His-Tagged Purification 96-Well Plate |
1 块 |
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| · Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume（635724）* |
| Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit |
4 个（每个盒子中2个） |
| Bottle Thread Adaptor |
1 个 |
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| · Capturem™ His-Tagged Purification 24-Well Plate（635730）* |
| Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate |
1 块 |
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| *注：Capturem™ His-Tagged Purification 24-well、96-well、Maxiprep Columns以及Large Volume中不含buffer，请使用以下组分的buffer： |
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| 缓冲液 |
组成 |
| Lysis Buffer |
推荐使用xTractor Buffer（Code No. 635625），
也可使用其他标准的裂解buffer |
| Wash Buffer |
150 mM NaCl,20 mM Na3PO4,pH7.6 |
| Elution Buffer |
500 mM NaCl,20 mM Na3PO4,500 mM imidazole, pH7.6 |
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| 参考文献 |
[1] Stephanie S. Pavlovich, Sean P. Lovett,Galina Koroleva, et al. The Egyptian Rousette Genome Reveals Unexpected Features of Bat Antiviral Immunity[J]. Cell, 2018, 173(5):1098–1100.
[2] Sandra Luz Martínez-Hernández, Daniel Cervantes-García, Martín Munoz-Ortega, et al. An anti-amoebic vaccine: generation of the recombinant antigen LC3 from Entamoeba histolytica linked to mutated exotoxin A (PEDIII) via the Pichia pastoris system[J]. Biotechnology Letters, 2017, 39 (8):1149-1157.
[3] Min Kong, Fengjuan Wang, Liuying Tian, et al. Functional identification of glutamate cysteine ligase and glutathione synthetase in the marine yeast Rhodosporidium diobovatum[J]. Science of Nature, 2018, 105 (1-2):4.
[4] Ariana Kariminejada, Mohammadreza Barzgarb, Bita Bozorgmehra, et al. Novel mutations and a severe neurological phenotype in Sjogren-Larsson syndrome patients from Iran[J]. European Journal of Medical Genetics, 2018, 61 (3):139.
[5] Naho Mugita, Takayuki Nambu, Kazuya Takahashi, et al. Proteases, actinidin, papain and trypsin reduce oral biofilm on the tongue in elderly subjects and in vitro[J]. Archives of Oral Biology, 2017, 82:233-240.
[6] Xiao-Xiao Cheng, Li-Hong Zhao, Steven J.Klosterman, et al. The endochitinase VDECH from Verticillium dahliae inhibits spore germination and activates plant defense responses[J]. Plant Science, 2017, 259:12. |
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| 实验操作视频： |
| https://www.takarabio.com/learning-centers/protein-research/his-tag-purification/protocols/video-capturem-his-miniprep |
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