日度归档：2024年1月25日

TetR单克隆抗体酶试剂盒Takara

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TetR单克隆抗体
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 631131 TetR Monoclonal Antibody (Clone 9G9) 40 μg ￥3,109 TetR单克隆抗体 TetR单克隆抗体
Clontech 631132 TetR Monoclonal Antibody (Clone 9G9) 200 μg ￥4,956 TetR单克隆抗体 TetR单克隆抗体
Clontech 631111 TetR Polyclonal Antibody 200 μl ￥4,240 TetR单克隆抗体 TetR单克隆抗体
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抗 MBP 单克隆抗体 货 号 #E8032LNEB酶试剂 New England Biolabs

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抗 MBP 单克隆抗体                              收藏

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#E8032S
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概述

抗 MBP 单克隆抗体是鼠抗麦芽糖结合蛋白抗体，属 IgG2a 型抗体。由组织培养上清经 protein A 亲和层析纯化而得。

抗 CBD 单克隆抗体 货 号 #E8034SNEB酶试剂 New England Biolabs

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抗 CBD 单克隆抗体                              收藏

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#E8034S
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相关产品

pTXB1 载体
pTYB21 载体
几丁质树脂
抗 CBD 单克隆抗体

特性

 单柱纯化且无需使用蛋白酶
 目的蛋白质不含来自载体的氨基酸
 可融合到目的蛋白的 N 端或 C 端
 重组蛋白的连接或标记
 可分离有或无 N 端甲硫氨酸的蛋白 

关于产品详细描述和 pTXB1 和 pTYB21 载体图谱，包括 MCS（多克隆酶切位点），请见目录 355-356 页。载体序列文件请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。 

概述

IMPACT（Intein Mediated Purificaiton with an Affinity Chitin-binding Tag）试剂盒利用经改良过的蛋白剪接元件（内含肽）进行一步亲和纯化重组蛋白（图1）。该系统与其它蛋白融合表达系统的主要区别在于：无需蛋白酶作用，即可将重组蛋白与其亲和标签（Tag）分离。

IMPACT 试剂盒能够融合表达含有内含肽及几丁质结合结构域（CBD）的蛋白，融合标签可以融合到目标蛋白的 C 端（pTXB1）或 N 端（pTYB21）（图 2）。在硫醇试剂（如 DTT）的参与下，内含肽进行特异性的自我剪切，释放出目的蛋白。pTXB1 载体还可用于表达和纯化 C 端含硫脂键的蛋白，并用于内含肽介导的蛋白连接（IPL，图 3）。IPL 反应，即表达蛋白连接，可通过一种天然肽键将 N 端为半胱氨酸的多肽或蛋白和一段细菌表达出的 C 端硫脂键蛋白连接起来，此反应可用于蛋白标记或半合成。有关 IMPACT 系统和 IPL 的更多信息请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。

pTYB21 的内含肽标签包含酿酒酵母（Sce）VMA1 内含肽和几丁质结合域融合在目的蛋白的 N 末端。

pTXB1 是大肠杆菌表达载体，携带有一个小的蛋白自剪切元件即来自 Mycobacterium xenopi gyrA 基因的 mini 内含肽［Mxe GyrA 内含肽，22 kDa］。蛋白自剪切元件经修饰后与来自芽孢杆菌（Bacillus circulans）的几丁质结合域（CBD）一起共同形成一个内含肽标签。该标签可与几丁质珠（NEB #S6651）结合。使用硫醇试剂（如 DTT）或 MESNA（2-mercaptoethanesulfonic acid）（后续连接用）诱导内含肽自我剪切并释放出目的蛋白。

抗 CBD 单克隆抗体 货 号 #E8034S 
图 1：单柱亲和纯化麦芽糖结合蛋白。泳道 1：未诱导细胞提取物。泳道 2：诱导表达融合蛋白细胞提取物。泳道 3：4℃ 过夜诱导裂解得到麦芽糖结合蛋白。泳道 4：麦芽糖结合蛋白偶联到含有 N 端半胱氨酸的肽链上。Marker M：蛋白分子量标准（NEB #P7703）。

抗 CBD 单克隆抗体 货 号 #E8034S
图 2：IMPACT 系统流程图

抗 CBD 单克隆抗体 货 号 #E8034S
图 3：内含肽介导的蛋白连接（IPL）流程图。

表 1：IMPACT 载体及其应用。

抗 CBD 单克隆抗体 货 号 #E8034S
a实际切割效率取决于临近的残基和融合蛋白的折叠。b DTT 仅用于蛋白纯化。MESNA 可以使分离的蛋白拥有一个 C-末端的巯酯键，可用于连接、标记和环化。c 半胱氨酸可用来替代 DTT。

iMPACT 试剂盒组成

– 大肠杆菌表达载体：pTXB1、pTYB21 和 pMXB10 对照载体
– 几丁质珠：纯化融合蛋白的亲和基质（结合容量 = 2 mg/ml）
– 抗 CBD 单克隆抗体
– DTT 与 SDS 上样缓冲液  

参考文献

关于本产品特点与应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。  

Tet-On和Tet-Off – 第二代酶试剂盒Takara

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Tet-On和Tet-Off – 第二代
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 631034 pRetroX-Tight-Hyg Vector 20 μg ￥6,625 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
Clontech 631117 pTRE-Cycle3 Vector 20 μg ￥7,079 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
Clontech 631115 pTRE-Cycle1 Vector 20 μg ￥6,827 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
Clontech 631114 pTRE-Dual1 Vector 20 μg ￥6,827 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
Clontech 631113 Tet-Off Advanced IRES Fluorescent Vector Set 20 μg ￥7,546 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
Clontech 631112 Tet-On Advanced IRES Fluorescent Vector Set 20 μg ￥7,546 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
Clontech 632163 Lenti-X Tet-Off Advanced Inducible Expression System Each ￥20,482 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
Clontech 631070 pTet-Off Advanced Vector 20 μg ￥6,764 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
Clontech 631069 pTet-On Advanced Vector 20 μg ￥6,764 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
Clontech 631059 pTRE-Tight Vector 20 μg ￥5,629 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
Clontech 631116 pTRE-Cycle2 Vector 20 μg ￥7,079 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代 Tet-On和Tet-Off - 第二代
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注意：购买以上产品（除631034、631115、631114、631059外），需要填写专利确认书
 
产品详情请点击：Tet-On和Tet-Off - 第二代
 
温馨提示：建议细胞产品接收后立即进行复苏培养，如若不能立即复苏培养则需要保存在液氮中或者
-150℃冰箱中，并尽早进行复苏培养。对于HEK 293细胞，建议采用胶原蛋白包被培养皿辅助细胞贴壁。
 
 

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Amylose 磁珠 货 号 #E8035SNEB酶试剂 New England Biolabs

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Amylose 磁珠                              收藏

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Amylose 磁珠

一种亲和介质，能少量分离纯化与 MBP（麦芽糖结合蛋白）相融合的目的蛋白。本品通过将 Amylose 共价耦联到一种顺磁颗粒上而形成，由于该共价结合可以在很宽的 pH 范围内保持稳定，使得 Amylose 磁珠可以从细胞培养上清液中分离 MBP 融合蛋白。随后，被磁珠结合的融合蛋白可以从细胞裂解液中捕获与之发生相互作用的靶蛋白。 

支持介质

Amylose 磁珠是直径约为 10 μm 的超顺磁微粒。  

结合容量

  1 mg Amylose 磁珠能结合 ≥ 10 μg MBP 融合蛋白。

Matchmaker Gold酵母单杂交系统酶试剂盒Takara

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Matchmaker Gold酵母单杂交系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 630491 Matchmaker Gold Yeast One-Hybrid Library Screening System 5 Rxns ￥21,865
￥17,492 		Matchmaker Gold酵母单杂交系统 Matchmaker Gold酵母单杂交系统 Matchmaker Gold酵母单杂交系统
Clontech 630496 Matchmaker Insert Check PCR Mix 1 100 Rxns ￥2,094
￥1,675 		Matchmaker Gold酵母单杂交系统 Matchmaker Gold酵母单杂交系统 Matchmaker Gold酵母单杂交系统

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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单杂筛选相关试剂 		   
    Matchmaker Gold酵母单杂交系统   Matchmaker Gold酵母单杂交系统    
             
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  Matchmaker Gold酵母单杂交系统   Matchmaker Gold酵母单杂交系统    
             
    Matchmaker Gold酵母单杂交系统        
             
             
           
 
 
■ 制品说明
酵母单杂交系统—Matchmaker Gold
Clontech Matchmaker Gold酵母单杂交（Y1H）文库筛选系统为鉴定蛋白质-DNA相互作用提供了简便高效的方法。所有的Matchmaker Gold系统均采用筛选强度较高的Aureobasidin A（AbAr）抗生素报告基因。这种新型的报告子可以高效杀死非抗性克隆，从而大大降低了背景克隆的生长。
 
Matchmaker Gold酵母单杂交系统
在Matchmaker Gold酵母单杂交系统中，目标/bait DNA序列重复串联后克隆到pAbAi报告载体上。用同源重组的方法将携带bait的pAbAi载体整合到Y1HGold酵母基因组中，用于后续文库的筛选。
 
一步法构建和筛选文库
Matchmaker Gold酵母单杂交系统
 
在文库中，可能与bait DNA序列相互作用的prey蛋白的cDNA与GAL4 AD融合表达，文库通过SMART技术与同源重组技术直接构建于Y1HGold[Bait-AbAi]报告菌株中。当prey蛋白与bait序列结合时，相应的GAL4 AD会激活AbAr的表达，酵母可在添加了AbA的培养基上生长。在文库筛选中，编码prey蛋白的质粒可以较容易地从酵母克隆中分离出来进行后续的验证分析。
 
快速获得结果！
Matchmaker Gold 单杂交文库筛选过程直接、快速、简单！
第一步：将1-3个目标DNA序列（bait）重复串联后克隆到pAbAi中。
第二步：将线性化的pBait-AbAi载体整合到Y1HGold酵母基因组中，获得携带bait的酵母菌株，
                并在SD/-Ura培养基上筛选。
第三步：利用Insert Check PCR Mix 1，通过PCR对整合到酵母基因组的bait DNA序列进行验证分析。
第四步：利用SMART技术合成与线性化的pGADT7-Rec末端具有相同序列的Prey蛋白的cDNA。
第五步：将合成的cDNA和线性化的pGADT7-Rec共转化到上述Y1HGold bait菌株中构建文库，同
                时利用AbA选择培养基进行筛选。
第六步：收集获得的阳性克隆，并用Matchmaker Insert Check PCR Mix 2对文库中的插入片段进行分析。
 
菌落PCR分析
在Y1H及Y2H筛选中，菌落PCR是分析bait菌株并对阳性克隆进行分类的简便、快速的方法。用Matchmaker Insert Check PCR Mix 1可以验证整合到Y1H酵母基因组的bait DNA序列，用Matchmaker Insert Check PCR Mix 2可以快速分析单杂及双杂筛选中阳性克隆子的插入片段。
 
酵母单杂交培养基
我们的酵母单杂交培养基套装里包含有配套于Clontech Matchmaker Gold One-Hybrid操作中所用到的全套的培养基。
 
■ 制品特点
1. 表现较好的酵母单杂交系统
2. AbA抗性筛选大大消除背景克隆
3. 在酵母体内直接完成文库构建和筛选
 
产品详情请点击：Matchmaker Gold酵母单杂交系统
 
 
 

页面更新：2019-12-29 15:03:26

几丁质磁珠 货 号 #E8036SNEB酶试剂 New England Biolabs

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几丁质磁珠                              收藏

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5 ml
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相关产品

几丁质磁珠
Amylose 磁珠
抗 MBP 磁珠

几丁质磁珠

一种亲和介质，能少量分离纯化与 CBD（Chitin Binding Domain）融合的目的蛋白。由于该磁珠有一个磁力核心，因此可以从细胞培养上清液中磁力分离与 CBD 融合的蛋白。再生之后磁珠不会影响结合能力。随后，被磁珠结合的融合蛋白可以从细胞裂解液中捕获与之发生相互作用的靶蛋白。 

Amylose 磁珠

一种亲和介质，能少量分离纯化与 MBP（麦芽糖结合蛋白）相融合的目的蛋白。本品通过将 Amylose 共价耦联到一种顺磁颗粒上而形成，由于该共价结合可以在很宽的 pH 范围内保持稳定，使得 Amylose 磁珠可以从细胞培养上清液中分离 MBP 融合蛋白。随后，被磁珠结合的融合蛋白可以从细胞裂解液中捕获与之发生相互作用的靶蛋白。 

Amylose 磁珠以 25 mg/ml 的浓度悬浮贮存于含 20% 乙醇的水溶液中。

支持介质

几丁质磁珠是直径约为 50-70 μm 的顺磁微粒。
Amylose 磁珠是直径约为 10 μm 的超顺磁微粒。 

结合容量

100 μl 几丁质磁珠能结合 30-50 μg CBD 融合蛋白。
1 mg Amylose 磁珠能结合 10-20 μg MBP 融合蛋白。 

Aureobasidin A酶试剂盒Takara

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Aureobasidin A
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 630466 Aureobasidin A 1 mg ￥2,373
￥1,898 		Aureobasidin A Aureobasidin A Aureobasidin A
Clontech 630499 Aureobasidin A 10 mg ￥6,135
￥4,908 		Aureobasidin A Aureobasidin A Aureobasidin A

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Code No. 产品名称
630466   Aureobasidin A
630499   Aureobasidin A
 
■ 制品说明
Aureobasidin A
Aureobasidin A (AbA)是从丝状真菌Aureobasidium pullulans R106中分离的一种环状缩肽抗生素，在较低浓度下（0.1–0.5 μg/ml）即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、构巢曲霉（Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger）。
AbA抑制酵母中AUR1基因（1,2）编码的肌醇磷脂酰胺（inositol phosphorylceramide ，IPC）合成酶的活性，突变基因AUR1-C的表达使转化酵母对AbA产生了抗性。Matchmaker Gold系统用这个基因作为蛋白质互作研究的报告基因。
AbA筛选大大消除了仅用营养报告基因（如HIS3）进行低严紧度初筛时产生的背景克隆。由于AbA可以直接杀死敏感的酵母菌株，而不是使菌株生长延迟，所以基于AbA的筛选有利于阳性克隆的生长和识别。一般实际操作中，用AbA进行低严紧度初筛时会获得很多克隆，之后再用Matchmaker Gold系统中的4个报告子(AUR1-C,HIS3, ADE2 和MEL1)进行高严紧度的二次筛选以验证阳性克隆。
 
■ 制品特点
1. 用于酵母的严紧药物筛选标记
2. AbA抗性是酵母双杂交研究中理想的报告子
3. 筛选结果适用于Matchmaker Gold酵母单杂交和双杂交系统
 
■ 制品用途
1. 酵母双杂交研究
2. 酵母单杂交研究
 
■ 属性
1. 分子量：1100 Da
2. 不溶于水
 
■ 文献
1. Takesako, K. et al. (1993) J. Antibiot. (Tokyo) 46(9):1414–20.
2. Hashida-Okado, T. et al. (1996) Mol. Gen. Genet. 251(2):236–244.
 
 
产品详情请点击：Aureobasidin A
 
 

页面更新：2019-11-11 13:09:38

抗 MBP 磁珠 货 号 #E8037SNEB酶试剂 New England Biolabs

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抗 MBP 磁珠                              收藏

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10 mg
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相关产品

 几丁质磁珠
Amylose 磁珠
抗 MBP 磁珠

几丁质磁珠

一种亲和介质，能少量分离纯化与 CBD（Chitin Binding Domain）融合的目的蛋白。由于该磁珠有一个磁力核心，因此可以从细胞培养上清液中磁力分离与 CBD 融合的蛋白。再生之后磁珠不会影响结合能力。随后，被磁珠结合的融合蛋白可以从细胞裂解液中捕获与之发生相互作用的靶蛋白。  

Amylose 磁珠

一种亲和介质，能少量分离纯化与 MBP（麦芽糖结合蛋白）相融合的目的蛋白。本品通过将 Amylose 共价耦联到一种顺磁颗粒上而形成，由于该共价结合可以在很宽的 pH 范围内保持稳定，使得 Amylose 磁珠可以从细胞培养上清液中分离 MBP 融合蛋白。随后，被磁珠结合的融合蛋白可以从细胞裂解液中捕获与之发生相互作用的靶蛋白。 
Amylose 磁珠以 25 mg/ml 的浓度悬浮贮存于含 20% 乙醇的水溶液中。 

支持介质

几丁质磁珠是直径约为 50-70 μm 的顺磁微粒。
Amylose 磁珠是直径约为 10 μm 的超顺磁微粒。 

结合容量

100 μl 几丁质磁珠能结合 30-50 μg CBD 融合蛋白。
1 mg Amylose 磁珠能结合 10-20 μg MBP 融合蛋白。  

GAL4抗体酶试剂盒Takara

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GAL4抗体
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 630402 GAL4 AD Monoclonal Antibody 25 μg ￥4,544 GAL4抗体 GAL4抗体 GAL4抗体
Clontech 630403 GAL4 DNA-BD Monoclonal Antibody 25 μg ￥5,867 GAL4抗体 GAL4抗体 GAL4抗体
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        自激活检测    
    GAL4抗体  
        自激活检测    
GAL4抗体       GAL4抗体    
↓   GAL4抗体   自激活检测    
GAL4抗体 → OR → GAL4抗体 → GAL4抗体
↓   GAL4抗体        
GAL4抗体     确认诱饵蛋白质表达    
      GAL4抗体    
 
 
■ 制品说明
GAL4 抗体——用于酵母双杂交研究
GAL4 AD 和 GAL4 DNA-BD 单克隆抗体可以结合或识别酵母双杂交中prey蛋白质GAL4的激活结构域（AD）和bait蛋白质的DNA结合结构域（DNA-BD） 。
若bait载体是pGBKT7，则可用GAL4 DNA-BD Monoclonal Antibody 检测融合蛋白质（也可以用Clontech的 Monoclonal c-Myc Antibody 来检测）。
若prey载体是pGADT7、pGADT7-Rec或pACT2，则可用GAL4 AD Monoclonal Antibody检测prey融合蛋白质（也可以用Clontech的polyclonal HA-Tag Antibody 来检测）。

这些抗体是用于以下研究的理想选择：
1. 确认GAL4融合蛋白质的表达并检测分子量是否与预期相符
2. 鉴定与目的蛋白质假定的互作
3. 免疫共沉淀研究

 
■ 制品特点
1. 确认bait蛋白质的表达
2. 敏感的单克隆抗体
3. 检测GAL4结合结构域和GAL4激活结构域
 
■ 制品用途
1. 酵母双杂交筛选
 
 
产品详情请点击：GAL4抗体
 
 

页面更新：2019-12-30 13:24:28

抗 MBP 单克隆抗体，HRP 标记(停产有替代) 货 号 #E8038SNEB酶试剂 New England Biolabs

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抗 MBP 单克隆抗体，HRP 标记(停产有替代)                              收藏

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停产通知

 该产品已停产，替代产品： 抗 MBP 单克隆抗体（NEB #E8032）

概述

抗 MBP 单克隆抗体（HRP 标记），是鼠抗麦芽糖结合蛋白抗体，属 IgG2a 型抗体。共价耦联辣根过氧化物酶并经纯化而得。 

Matchmaker Gold酵母双杂交系统酶试剂盒Takara

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Matchmaker Gold酵母双杂交系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 630489 Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System Each ￥12,038
￥9,630 		Matchmaker Gold酵母双杂交系统 Matchmaker Gold酵母双杂交系统 Matchmaker Gold酵母双杂交系统

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        自激活检测    
    Matchmaker Gold酵母双杂交系统  
        自激活检测    
Matchmaker Gold酵母双杂交系统       Matchmaker Gold酵母双杂交系统    
↓   Matchmaker Gold酵母双杂交系统   自激活检测    
Matchmaker Gold酵母双杂交系统 → OR → Matchmaker Gold酵母双杂交系统 → Matchmaker Gold酵母双杂交系统
↓   Matchmaker Gold酵母双杂交系统        
Matchmaker Gold酵母双杂交系统     确认诱饵蛋白质表达    
        Matchmaker Gold酵母双杂交系统    
 
■ 制品说明
Matchmaker Gold 酵母双杂交系统
Matchmaker Gold酵母双杂交系统是我们深受欢迎的Matchmaker产品线中研究蛋白—蛋白相互作用的一款产品。这得益于系统中所包含的新的Y2H Gold酵母菌株、更加严密的筛选报告基因、简单易用的文库、高水平表达的载体以及基于SMART技术的文库构建试剂盒。
 
Matchmaker酵母双杂交系统
在基于GAL4的Matchmaker酵母双杂研究中，bait蛋白与GAL4的DNA结合域（BD）融合表达，而作为文库的prey蛋白与GAL4的激活结构域（AD）融合表达。当bait蛋白与库（prey）蛋白有相互作用时，DNA-BD与AD之间相互接近从而激活4个相互独立的报告基因（AUR1-C、 ADE2、HIS3和 MEL1）的表达。
 
Matchmaker酵母双杂交系统的功能

·发现新的与已知蛋白互作的蛋白
·确认两个蛋白之间的相互作用
·鉴定参与蛋白相互作用的区域
 
为什么需要4个报告基因？
酵母双杂系统只采用HIS3营养报告基因筛选蛋白-蛋白互作时，经常会获得大量的背景克隆和假阳性。背景克隆是由于营养报告基因泄露表达引起的，而假阳性是由于prey蛋白无需与bait蛋白互作即可识别和结合报告基因上游序列引起的。
Matchmaker Gold系统是采用4个报告基因/3个不同bait识别序列的双杂交系统。Matchmaker Gold系统采用新型的、稳定的酵母双杂抗生素AbA，可以有效杀死非抗性克隆，从而大大降低了背景克隆的生长。同时，Matchmaker Gold系统有效地缩减了假阳性，这是由于任何prey蛋白单独结合引起假阳性都需要识别3个不同序列，激活4个报告基因的表达。
 
Matchmaker Gold酵母双杂交系统
 
4个报告基因
Matchmaker Gold双杂交系统采用1个AbA抗生素筛选报告基因、2个营养筛选报告基因、1个蓝白斑筛选报告基因。
 
酵母双杂交培养基套装
我们的酵母双杂交培养基套装里包含配套于Clontech Matchmaker Gold Two-Hybrid 操作中所用到的全套的培养基。
 
■ 制品特点
1. 较低的假阳性率
2. 4个报告基因，包括 Aureobasidin A（AbA）抗生素抗性筛选基因
3. 简便的“Mating”，接合方法
4. 具有广泛兼容性的“Mate & Plate”文库
 
产品详情请点击：Matchmaker Gold酵母双杂交系统
 
 

页面更新：2019-12-30 13:16:56

pMAL™ 蛋白融合表达系统（停产，有替代） 货 号 #E8200SNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 ：大肠杆菌

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#E8200S
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停产通知

产品于2020 年 6 月 30 日停产，替代产品为：NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统（E8201）

单独出售的相关产品

Amylose 树脂
#E8021V 10 ml . . . . . . .¥1,179
#E8021S 15 ml . . . . . . .¥1,779
#E8021L 100 ml . . . . . . .¥8,609
 
Xa 因子蛋白酶
#P8010V 25 μg . . . . . . . . ¥379
#P8010S 50 μg . . . . . . . . ¥729
#P8010L 250 μg . . . . . . .¥2,889
 
pMAL-p5X 载体
#N8109S 10 μg . . . . . . .¥1,069
 
pMAL-c5X 载体
#N8108S 10 μg . . . . . . .¥1,069

 

 

特性

 超过 75% 的蛋白可获得高效表达，蛋白产量可达 100 mg/L
 可在细胞质或周质中表达：在周质或SHuffle® 细胞质中表达均可提高二硫键的形成，促进蛋白折叠
 增强可溶性：MBP 融合蛋白增强了蛋白质在大肠杆菌中的可溶性
 采用麦芽糖温和洗脱：无去污剂或变性剂对蛋白活性产生影响 

对于产品详细描述和 pMAL-p5X 载体图谱，包括 MCS（多克隆酶切位点），请见目录 386 页。关于pMAL 载体序列文件，请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。

概述

pMAL 系统是一种高效的蛋白融合表达及纯化系统。pMAL 载体含有编码麦芽糖结合蛋白（maltosebinding protein, MBP）的大肠杆菌 malE 基因，其下游的多克隆位点便于目的基因插入，表达 N 端带有 MBP 的融合蛋白。通过“Ptac”强启动子和 MBP 翻译起始信号使克隆基因获得高效表达，并利用 MBP 对麦芽糖的特异性结合实现融合蛋白的一步亲和纯化（图 1）。

此系统的 pMAL 载体在邻近多克隆位点处含有一段编码特异性蛋白酶识别位点的序列，从而便于纯化后将目的蛋白与 MBP 切割分离，并且目的蛋白不含任何来自载体的氨基酸。为了实现这一目的，多克隆位点中有一限制性内切酶识别位点正好位于特异性蛋白酶识别位点处，同时也是目的基因插入的位点。

pMAL 系列载体可从 1 升的培养液中表达出 100 mg 的融合蛋白。大部分情况下，表达出的融合蛋白是可溶的，因为 MBP 已经被证实可提高大肠杆菌中表达蛋白的可溶性。尽管没有一种表达系统适用于所有克隆基因，但 pMAL 蛋白融合表达和纯化系统经证实：在被检测的已知蛋白中，有超过 75% 能表达出稳定产量。

由于 pMAL-c5X 载体上删除了 malE 信号序列，因此融合蛋白在细胞质中表达。而 pMAL-p5X 载体含有 malE 信号序列，它将引导融合蛋白穿越质膜进入细胞周质。 

pMAL™ 蛋白融合表达系统（停产，有替代） 货 号 #E8200S
图 1：pMAL 系统流程示意图。

pMAL 蛋白融合表达和纯化系统组成

  – pMAL-c5X, pMAL-p5X
– Amylose 树脂（结合容量 ～6-8 mg/ml 体积）
– Xa 因子蛋白酶
– MBP5（SDS-PAGE 电泳用 marker）
– MBP5-paramyosin-ΔSal
（Xa 因子蛋白酶切割的对照蛋白）
– E. coli ER2523（NEB 表达用感受态细胞）

参考文献

关于本产品特点与应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。 

NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统 货 号 #E8201SNEB酶试剂 New England Biolabs

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#E8201S
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产品特点

该产品可直接替换 NEB #E8200，pMAL™ 蛋白融合表达系统

NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统利用 Ptac 超强启动子和麦芽糖结合蛋白（MBP）的翻译起始信号来增强目标蛋白在大肠杆菌中的溶解度和表达水平。所得产物是 MBP 融合蛋白，后续可通过亲和反应进行纯化。
 

特性

·稳定可靠的大肠杆菌表达系统：蛋白产量高（可达 100 mg/L）
·目标蛋白与 MBP 融合表达可增强其在大肠杆菌中的溶解度（1）
·两步纯化：第一步：直链淀粉洗脱后使用 TEV 蛋白酶切割，第二步：经镍柱填料分离可获得高纯度的无标签的靶蛋白
·使用麦芽糖进行温和洗脱；无需洗涤剂或刺激性变性剂
 

概述

 在 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统中，pMAL-c6T 载体提供了一种将克隆基因或开放阅读框编码的蛋白质表达和纯化的方法。首先，将目标克隆基因插入大肠杆菌编码麦芽糖结合蛋白（MBP）的 malE 基因框架下游；这样构建的载体可表达 MBP 融合蛋白（2,3）。pMAL-c6T 载体表达 N 端标记六组氨酸的 malE 基因（缺少分泌信号序列，并且经改造可以与直链淀粉更紧密地结合），其后是 TEV 蛋白酶识别序列、多克隆酶切位点和三位终止密码子。pMAL-c6T 载体在细胞质中表达 MBP 融合蛋白。这种方法使用“tac”强启动子和 malE 翻译起始信号，从而能够使克隆序列进行高水平表达（4,5）。然后，利用 MBP 与麦芽糖的亲和特性，使用直链淀粉树脂对融合蛋白进行一步纯化（6）。


直链淀粉纯化后，可以使用 TEV 蛋白酶将 MBP 标签从目标蛋白上切下来，目标蛋白不残留任何载体衍生基团。MBP 标签和 TEV 蛋白酶均带有 His 标签，因此可轻松从反应中去除。将上述反应产物经 NEBExpress 镍柱填料（NEB＃S1428）分离，可去除 MBP 标签和 TEV 蛋白酶，从而在收集管液中可获得目标蛋白。目标蛋白产量最高可达 100 mg/L，一般产量为 10–40 mg/L。

图 1：NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统的原理图
NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统 货 号 #E8201S
图 2：使用 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统进行蛋白表达
NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统 货 号 #E8201S
亲和纯化的 MBP6-TEV-ParamyosinΔSal 蛋白使用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。泳道 1：蛋白标准品。泳道 2：未处理的细胞。泳道 3：转入目标基因的细胞。泳道 4：使用麦芽糖从直链淀粉柱上洗脱下来的纯化融合蛋白。泳道 5：TEV 蛋白酶切割后的纯化蛋白。泳道 6：NEBExpress 镍柱填料收集管液分离的目标蛋白。
 

试剂盒组分

随产品提供如下试剂

 

名称

储存温度(℃)

浓度

pMAL-c6T DNA

  

200 µg/ml

Amylose Resin

4

  

TEV Protease

-20

10,000 units/ml

TEV Protease Reaction Buffer

-20

10 X

Anti-MBP Monoclonal Antibody

-20

  

MBP6 Protein

-20

40 µg/ml

MBP6-TEV-Paramyosin ΔSal

-20

5 mg/ml

E. coli ER2523 (NEB Express) (Glycerol Stock)

-20

  

储存温度

 -20℃

Prey Rescue by Colony PCR酶试剂盒Takara

发表于由

Prey Rescue by Colony PCR
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 630433 Matchmaker AD LD-Insert Screening Amplimer Set 100 Rxns ￥2,978 Prey Rescue by Colony PCR Prey Rescue by Colony PCR Prey Rescue by Colony PCR
Clontech 630497 Matchmaker Insert Check PCR Mix 2 100 Rxns ￥2,094
￥1,675 		Prey Rescue by Colony PCR Prey Rescue by Colony PCR Prey Rescue by Colony PCR

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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    酵母双杂筛选       互作蛋白质验证
  Prey Rescue by Colony PCR → Prey Rescue by Colony PCR   Prey Rescue by Colony PCR
      ↓
插入片段确认 		   
Prey Rescue by Colony PCR   Prey Rescue by Colony PCR   Prey Rescue by Colony PCR   Prey Rescue by Colony PCR
        ↓    
Prey Rescue by Colony PCR → Prey Rescue by Colony PCR   Prey Rescue by Colony PCR    
        ↓    
  Prey Rescue by Colony PCR   Prey Rescue by Colony PCR    
        ↓    
    Prey Rescue by Colony PCR   Prey Rescue by Colony PCR    
        ↓    
        Prey Rescue by Colony PCR    
           
 
 
■ 制品说明
菌落PCR检测prey质粒
Matchmaker Insert Check PCR Mix 2是2X预混液，可以简便快速地直接以酵母菌落为模板进行PCR扩增。这种完整的混合液专用于 Matchmaker Gold 酵母单杂交和双杂交筛选系统，可以快速地扩增、分选并分析文库筛选所获得的阳性克隆中prey/文库质粒的cDNA插入片段。混合液与用以下载体构建的GAL4 AD文库兼容：pGADT7、 pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2、pGAD424、pACT、 pACT2、pGAD GH、 pGAD GL及pGAD10 。
Matchmaker Insert Check PCR Mix 2 包含PCR聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液，仅仅需要将细胞添加到混合液中，然后进行30个循环PCR操作。
Matchmaker Insert Check PCR Mix 2是完整的混合液。但是若想单独购买引物，也有另外的选择。Matchmaker AD LD-Insert Screening Amplimer Set结合Advantage 2 PCR polymerase使用，可以从Matchmaker GAL4 激活结构域 (AD)载体上扩增插入片段。5'引物可作为测序引物使用。
 
■ 制品特点
1. 简便快速——直接以酵母菌落为模板进行PCR扩增
2. 完整的预混液——包含引物，dNTPs和缓冲液，只需要加入细胞即可
3. 引物也可以单独购买
 
■ 制品用途
1. 酵母双杂交筛选
2. 酵母单杂交筛选
 
 
产品详情请点击：Prey Rescue by Colony PCR
 
 

页面更新：2019-12-29 14:49:39

pMAL-c6T 载体 货 号 #N0378SNEB酶试剂 New England Biolabs

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#N0378S
10 µg
1,739.00
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无
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无

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特性

 ·pMAL-c6T 是 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统（NEB＃E8201）中推荐的载体

 ·目标蛋白与 MBP 融合表达可显著增强其在大肠杆菌中的溶解度和正确折叠（1）
 ·载体包含 His-tag 和 TEV 蛋白酶识别位点，使用 TEV 蛋白酶（NEB＃P8112）可将目标蛋白从 MBP 上切下来
 ·两步纯化：Amylose 树脂洗脱后进行 TEV 蛋白酶切割和 Ni 树脂分离，终产物为高纯度、无标签的靶蛋白
 ·经设计改造，MBP 可更紧密的结合到 Amylose 树脂上。
 ·具有氨苄青霉素抗性
 

概述

 pMAL-c6T 载体提供了一种从克隆基因或开放阅读框到蛋白表达的方法。克隆基因插入到大肠杆菌的 malE 基因下游，malE 基因编码麦芽糖结合蛋白（MBP），从而使 MBP 融合蛋白在细胞质中表达（1，2）。MBP 经设计改造，可更紧密的结合到 Amylose 树脂上。该方法利用 “tac” 强启动子和 malE 翻译起始信号，使克隆序列得到高水平表达（3，4），同时可利用 MBP 对麦芽糖的亲和力，一步纯化融合蛋白（5）。该载体表达 N 端六组氨酸标记的 malE 基因（缺少分泌信号序列），随后是包含 TEV 蛋白酶识别序列的多克隆酶切位点，以及三位终止密码子。从而可在纯化后，使用 TEV 蛋白酶将 MBP 从目标蛋白上切下来。该载体还携带 lacIq 基因，该基因编码 Lac 阻遏蛋白。在没有 IPTG 诱导的情况下，可使 Ptac 低水平表达

pMAL-c6T 载体 货 号 #N0378S

pMAL-c6T 载体的 malE 基因上具有明确的信号序列缺失，箭头指示转录方向，多克隆酶切位点（MCS）中标注了限制性内切酶位点

产品来源
NEB-10 beta competent E. coli （pMAL-c6T）

亲和标记
麦芽糖结合蛋白（MBP）
 
储存温度
-20°C
 
序列信息
Fasta GenBank
 

X-Alpha-Gal酶试剂盒Takara

发表于由

X-Alpha-Gal
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 630462 X-alpha-Gal 100 mg ￥2,694
￥2,021 		X-Alpha-Gal X-Alpha-Gal X-Alpha-Gal
Clontech 630463 X-alpha-Gal 250 mg ￥4,453
￥3,340 		X-Alpha-Gal X-Alpha-Gal X-Alpha-Gal

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 制品说明
X-alpha-Gal
X-alpha-Gal是酵母半乳糖苷酶（MEL1）的显色底物，可在琼脂上直接检测基于GAL4的酵母双杂交互作。
X-alpha-Gal实验检测MEL1基因的激活，该基因受GAL4调控，用于酵母双杂交的筛选。MEL1编码的分泌型的α-半乳糖苷酶可水解无色的X-alpha-Gal成蓝色产物。响应阳性双杂交互作的酵母克隆表达α-半乳糖苷酶，在含有X-alpha-Gal的培养基上呈蓝色。
 
■ 制品特点
1. 有阳性互作的酵母克隆呈蓝色
2. 在培养板上直接显色，无需裂解细胞
 
■ 制品用途
酵母双杂交研究（Matchmaker Gold）
 
■ 文献
1. Aho, S. et al. (1997) Anal. Biochem. 253:270–272.
2. Liljestrom, P. L. (1985) Nucleic Acids Res. 13:7257–7268.
 
■ 携带MEL1基因的酵母菌株
X-Alpha-Gal
注释：响应阳性双杂交互作的酵母克隆表达α-半乳糖苷酶，在含有X-alpha-Gal的培养基上呈蓝色。
 
 
 
产品详情请点击：X-Alpha-Gal
 
 

页面更新：2020-09-04 11:26:57