日度归档：2024年1月9日

PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix酶试剂盒Takara

发表于由

PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6215A PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix 50 Rxns ￥1,500
￥1,050 		PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix
Takara 6215B (A × 4) PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix 50 Rxns x 4 ￥5,400
￥3,780 		PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix → PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix → PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix → PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix → PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix
 
PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix
PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix  
PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix
 
 
■ 制品内容 (20 μl 反应×50次量)PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix
5×PrimeScript IV cDNA Synthesis Mix＊1 200 μl
Random 6 mers (50 μM)＊2 100 μl
RNase Free H2O 1 ml × 2
*1：含有PrimeScript IV RTase、RNase Inhibitor、Oligo dT Primer、dNTP Mixture及反应Buffer
    (含Mg+2)。
*2：不含polyA的 RNA起始cDNA的合成及Real Time PCR用的cDNA的合成，RNA全部区域cDNA的
    均匀合成等情况下添加至反应液中。
 
■ 制品说明
PrimeScript IV 1st strand cDNA Synthesis Mix是从total RNA或polyA+ RNA起始合成1st strand cDNA的试剂盒。合成1st strand cDNA所需的反转录酶PrimeScript IV RTase、RNase Inhibitor、 Oligo dT Primer、dNTP Mixture及反应Buffer已预混成premix型试剂，反应时，只需要添加模板RNA及水即可简单快速开始反应。
本制品通过添加辅助蛋白质改良了Buffer的组成，省去了以往进行反转录反应前的RNA变性操作。此外，PrimeScript IV RTase相比于以往制品，能在更短时间内合成cDNA。
通过提高耐热性使反转录反应可以在高温下进行，在使用Gene Specific Primer合成cDNA的效率和特异性的提升上发挥了重要作用。
本制品合成的1st strand cDNA适用于2nd strand cDNA合成、杂交、PCR法扩增，全长cDNA文库的制备等需要高品质全长cDNA的应用。另外，通过试剂盒中附带的Random 6 mers，可以从不含有polyA+ 的RNA起始合成cDNA，同时也适用于利用Real Time PCR方法进行基因表达分析的cDNA合成。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 关联资料
6215资料： 点击图片下载 PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Mix
 
 

页面更新：2019-12-23 15:18:44

PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit酶试剂盒Takara

发表于由

PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6210A PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit 50 Rxns ￥1,372
￥823 		PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
Takara 6210B (A × 4) PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit 50 Rxns x 4 ￥4,937
￥2,962 		PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit → PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit → PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit → PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit → PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
 
PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit  
PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
 
 
■ 制品内容 (50 次量)PrimeScript™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
PrimeScript II RTase (200 U/μl) 50 μl
5×PrimeScript II Buffer 200 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 25 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 50 μl
Oligo dT Primer (50 μM) 50 μl
Random 6 mers (50 μM) 100 μl
RNase Free H2O 1 ml
 
■ 制品说明
本制品是使用PrimeScript II RTase从Total RNA或Poly (A)+ RNA合成1st Strand cDNA的试剂盒。含有1st Strand cDNA合成所需的全部试剂。
以结构复杂的RNA或长链RNA为模板进行cDNA合成时，cDNA合成受到抑制的主要原因是RNA高级结构与反转录酶的非特异性结合。并且，由于反转录酶的错配引起的非特异性延伸，对RT-PCR或全长cDNA的合成非常不利。PrimeScript II RTase是对PrimeScript RTase进行进一步改良的反转录酶，本反转录酶可以很好地抑制RNA高级结构与反转录酶的非特异性结合。
本制品使用了PrimeScript II RTase，利用Oligo dT从PolyA开始进行延伸反应，使用标准反转录温度42℃，不仅能维持PrimeScript RTase原有的卓越的cDNA合成效率和cDNA合成速度，同时可以合成本底低、纯度高、完整性好的cDNA。另外，反转录反应液配制时所产生的非特异性延伸是抑制cDNA合成的主要原因，本制品能有效控制这一现象。反应液配制后，冰上放置直至反转录反应开始，不会发生抑制cDNA合成的现象。
合成的1st Strand cDNA可广泛应用于2nd Strand cDNA合成、杂交、PCR法扩增等。特别适用于全长cDNA文库制作、高纯度全长cDNA合成等。
 
■ 保存
-20℃。
 
 

页面更新：2019-12-23 15:20:04

PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit酶试剂盒Takara

发表于由

PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6110A PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit 50 Rxns ￥1,261
￥757 		PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
Takara 6110B (A × 4) PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit 50 Rxns x 4 ￥4,546
￥2,728 		PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit → PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit → PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit → PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit → PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
 
PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit  
PrimeScript™ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
 
 
■ 制品内容 (50 次量)
PrimeScript RTase (200 U/ μl) 50 μl
5X PrimeScript Buffer 200 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 25 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 50 μl
Oligo dT Primer (50 μM) 50 μl
Random 6 mers (50 μM) 100 μl
RNase free dH2O 1 ml
 
■ 制品说明
本制品是使用PrimeScript RTase从Total RNA或PolyA+RNA合成1st Strand cDNA的试剂盒，含有1st Strand cDNA合成所需的全部试剂。 PrimeScript Reverse Transcriptase是一种MMLV (Moloney Murine Leukemia virus) 由来的新型反转录酶。本酶能够有效合成长达12 kb的1st Strand cDNA，即使对富含GC的片段或者具有复杂二级结构的RNA，在常规的反转录温度42℃条件下也能得到良好的反转录效果，无需进行高温反转录反应 (高温反转录反应会导致RNA的降解)。合成的1st Strand cDNA 可广泛应用于2nd Strand合成、杂交、PCR扩增、Real Time PCR反应等。
 
■ 各种引物的序列
引物名称 引物序列
       Random 6 mers        pd(N)6
       Oligo dT Primer        Takara特别开发的dT区域的序列*
* 该序列和TaKaRa RNA PCR™ Kit (AMV) Ver.3.0 (Code No. RR019A/B) 的Oligo dT Adaptor Primer不同，不含有M13 Primer M4的序列。
 
■ 保存
-20℃。
 
 

页面更新：2019-10-12 11:49:14

PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit酶试剂盒Takara

发表于由

PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6111A PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit 10 Rxns ￥1,582 PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
收藏产品 加入购物车
 
■ 制品内容 (10 次量)
PrimeScript RTase (200 U/μl) 10 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 10 μl
Oligo(dT)18 Primer (1 μg/μl) 20 μl
Random Primer (9mer) (0.3 μg/μl) 20 μl
5 × 1st Strand Synthesis Buffer 40 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 40 μl
E. coli RNase H/E. coli DNA Ligase Mixture 20 μl
E. coli DNA Polymerase I (20 U/μl) 20 μl
5 × 2nd Strand Synthesis Buffer 300 μl
T4 DNA Polymerase (1 U/μl) 40 μl
RNase free dH2O 600 μl × 2
Control RNA (1 μg/μl)* 5 μl
 
*【Control RNA】
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有poly (A)+尾的RNA。以这种RNA为模板合成的双链cDNA插入到适当的质粒载体中，如果确实为全长的cDNA，那这种质粒便可获得四环素抗性。
 
■ 制品说明
以原核细胞或者真核细胞的mRNA为模板合成cDNA后再进行cDNA的克隆，是分子生物学研究中的一种重要手段。利用这一技术可以容易地进行基因的构造解析和目的蛋白质的表达研究等。
一般来说，cDNA的合成以及cDNA文库的利用方法是：在合成与目的mRNA互补的双链cDNA后，将双链cDNA与细菌或病毒来源的载体进行重组，再将重组体导入细菌或真核细胞内进行复制、扩增cDNA，然后再对cDNA进行解析，或者再进一步进行体外转录或体外翻译等。
本试剂盒主要以来自植物和动物的poly (A)+RNA合成双链DNA 。
本试剂盒主要是以Gubler-Hoffman法为基础构建的，其原理见图1、图2，简要说明如下：
1. 在PrimeScript RTase的作用下，利用Oligo(dT)18 Primer或者Random Primer合成cDNA的第一条链 。
2. 使用E. coli RNase H使DNA-RNA杂合体中的RNA链形成单链切口 (Nick) 。在E. coli DNA Polymerase I 与E. coli DNA Ligase的作用下，RNA链被DNA链置换，合成cDNA的第二条链。
3. 使用T4 DNA Polymerase使双链cDNA片段末端平滑。
 
■ cDNA合成原理图
 
PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
图1 使用Oligo(dT)18 Primer时的cDNA合成
 
 
PrimeScript™ Double Strand cDNA Synthesis Kit
图2 使用Random Primer时的cDNA合成
 
■ 保存
-20℃。
 
■ Troubleshooting
如果实验不能正常进行，请按照说明书内容确认实验操作，检验以下几点：
1. Control RNA的使用
本试剂盒中的Control RNA (pSP Tet3 Poly(A)+ mRNA) 可以用于对照实验，并确认1st Strand cDNA或2nd Strand cDNA的合成反应是否顺利进行。
2. mRNA的纯度检测
为了能够获得更高的cDNA合成效率，尽可能使用完整的mRNA是非常重要的。在进行cDNA合成反应前，可以通过测定260 nm和280 nm的吸光度 (A260/A280在1.8～2.1是理想值) ，或使用琼脂糖凝胶电泳法对RNA的纯度进行检测。
3. RNase的污染
实验时要注意一定不能在mRNA的样品中混入RNase。实验用的器具、试剂等应尽可能进行高温灭菌处理。操作过程要佩戴手套。
 
 

页面更新：2019-03-08 10:35:16

cDNA Library Construction Kit酶试剂盒Takara

发表于由

cDNA Library Construction Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6136 cDNA Library Construction Kit 5 Rxns ￥9,980 cDNA Library Construction Kit cDNA Library Construction Kit cDNA Library Construction Kit
收藏产品 加入购物车
 
■ 制品内容 (5 次量)
PrimeScript RTase(200 U/μl) 5 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 5 μl
Oligo(dT)18 Anchor Primer (1 μg /μl)*1 10 μl
5×1st Strand Synthesis Buffer*2 20 μl
1st Strand dNTP Mixture 6 μl
E.coli RNase H/E.coli DNA Ligase Mixture 10 μl
E.coli DNA Polymerase I (20 U/μl) 10 μl
2nd Strand dNTP Mixture 23 μl
5×2nd Strand Synthesis Buffer*2 150 μl
T4 DNA Polymerase (1 U/μl) 20 μl
10×T4 DNA Ligase Buffer 20 μl
T4 DNA Ligase (350 U/μl) 20 μl
EcoR I-Sma I Adaptor (0.4 μg/μl) 18 μl
Not I Supplement 135 μl
Not I (50 U/μl) 15 μl
tRNA (10 μg/μl) 5 μl
Dr. GenTLE Precipitation Carrier (4℃保存)*3 60 μl
3 M Sodium Acetate (pH5.2) (4℃保存) 1 ml
pAP3neo Predigested Vector (100 ng/μl)*4 5 μl
RNase-free H2O 640 μl
Control RNA (1 μg/μl)*5 5 μl
T7 Promoter Primer (5 pmol/μl)*6 20 μl
T3 Promoter Primer (for pAP3neo) (5 pmol/μl)*6 20 μl
Spin Column (CHROMA SPIN™-1000＋DEPC-H2O Columns*7) (4℃保存) 5 支
 
*1 Oligo(dT)18 Anchor Primer中含有Not I Site及Xho I Site。如果不用Not I 而用Xho I 进行酶切时，也可以制备EcoR I-Xho I 双链cDNA片段构建cDNA文库，利用这些Site的载体 (不可去磷酸化) 也可用来构建cDNA文库。另外，本试剂盒中不含有Xho I 酶，需要时请另外购买。
*2 与PrimeScript Double Strand cDNA Synthesis Kit[Code No.: 6111A] 中所含有的组份不同。
*3 同Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094)。
*4 经EcoR I、Not I 酶切处理。
*5 本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，该DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板，由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的，Control RNA (约1.4 kb )的3’端具有30 个A碱基的Poly(A)+尾。以这种RNA为模板合成的双链cDNA插入到适当的质粒载体中后，如果插入的cDNA确实为全长，那这种质粒便可获得四环素抗性。
*6 可用于Insert Check及DNA测序。
*7 Clontech Laboratories公司产品。 (带下盖)
(注) 本制品不含对电转化法十分重要的大肠杆菌。使用本制品时，需用大肠杆菌的感受态细胞转化甲基化DNA。可采用E. coli HST08 Premium Electro-Cells (Code No.: 9028)、Clontech的Stellar™ Electrocompetent Cells (Clontech Code: 636756)
 
■ 制品说明
利用真核生物的各种组织或细胞中的Poly(A)+RNA合成cDNA，然后进行基因克隆，这在分子生物学实验中被广泛应用。这一技术的使用，使基因的结构解析及目的蛋白的表达等变得更为方便。
一般合成cDNA以及构建cDNA Library的方法为： ① 合成与目的Poly(A)+RNA相互补的双链cDNA；② 将双链cDNA与细菌或病毒来源的载体进行重组； ③ 将重组体导入细菌或真核细胞内进行扩增，构建cDNA Library。构建成的cDNA Library可以用于cDNA的解析，或者进一步进行体外转录或体外翻译等。
本试剂盒原理采用了Gubler-Hoffman法 (Linker Primer法)，是一种可以控制克隆基因方向性的Directional Cloning法，其原理见下图，具体说明如下：
1. 利用反转录酶PrimeScript RTase和Oligo(dT)18 Anchor Primer1,3-5)合成1st Strand cDNA。1st Strand cDNA合成时使用5-methyl dCTP。
2. E.coli RNase H使mRNA-1st Strand cDNA杂合体中的RNA形成Nick，再使用E.coli DNA Ploymerase和E.coli DNA Ligase将RNA链置换成DNA链，合成2nd Strand cDNA。
3. 使用T4 DNA Polymerase将双链cDNA末端平滑化。
4. 与Adaptor连接后，使用Not I 进行酶切。
5. 使用Spin Column除去短链cDNA。
6. 与Vector pAP3neo进行连接 (Directional Cloning)。
7. 利用电刺激转化法导入大肠杆菌。
8. 确认克隆效率及插入片段大小等。
 
■ cDNA Library合成原理图
 
cDNA Library Construction Kit
 
■ 保存
Dr. GenTLE Precipitation Carrier 4℃保存。
3 M Sodium Acetate (pH5.2) 4℃保存。
Spin Column 4℃保存。
其他组份 -20℃保存。
 
 

页面更新：2017-04-07 10:29:07

3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase酶试剂盒Takara

发表于由

3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6106 3′-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase 20 Rxns ￥1,893 3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase 3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase 3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase
收藏产品 加入购物车
 
■ 制品内容 (20 次量)
制品内容1～9项为用于3’RACE实验的反转录用试剂，可用于20次反转录反应 (约100次3’RACE PCR反应)；10～12为Control实验用试剂，可进行5次Control实验。
1. PrimeScript RTase (200 U/μl) 10 μl
2. RNase Inhibitor(40 U/μl) 10 μl
3. 5 × PrimeScript Buffer 40 μl
4. dNTP Mixture (10 mM each) 20 μl
5. 3’RACE Adaptor (5 μM) 20 μl
6. RNase Free dH2O 1 ml
7. 1 × cDNA Dilution Buffer II 1 ml
8. 3’RACE Outer Primer (10 μM ) 200 μl
9. 3’RACE Inner Primer (10 μM ) 200 μl
10. Control HL60 Total RNA (500 ng/μl)* 10 μl
11. 3’RACE Control Outer Primer (10 μM)* 10 μl
12. 3’RACE Control Inner Primer (10 μM)* 10 μl
   
* 用于扩增Human Prohibitin (PHB) 基因。
 
■ 制品说明
本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增cDNA 3’末端全长的试剂盒。对RNA结构进行分析时，一般先通过RT-PCR反应扩增目的区域，然后再对扩增出的目的DNA片段进行克隆、序列分析等。一般的RT-PCR反应很难得到全长的cDNA片段，然而在基因工程研究中，分析遗传基因的全长cDNA序列又是十分重要的。RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) 法能有效地解决这一问题。3’-Full RACE Core Set with PrimeScript RTase能够通过已知的cDNA序列，高灵敏度、高特异性地扩增cDNA的3’末端的全长序列。
本试剂盒中含有完成3’-RACE操作的主要试剂。试剂盒中使用的PrimeScript Reverse Transcriptase经过了本公司的特殊改良，反转录性能良好，无RNase H活性，大大增加了反转录性能。结合使用TaKaRa LA Taq (Code No.: RR002A) 进行PCR扩增时，其3’RACE的扩增性能大大优于其他同类产品。 本试剂盒应用了套式PCR原理，增加了PCR扩增的特异性与灵敏度，可以对少量样品或低丰度的基因进行3’RACE实验，并且对长片段的3’RACE扩增具有明显优势，我们曾经使用本试剂盒成功扩增了8 kb的3’RACE DNA片段。使用TaKaRa LA Taq™ 扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A” 碱基，其产物可直接克隆于T-Vector中。反转录引物3’RACE Adaptor Primer含有由Takara特别设计的dT区域，反转录效率高。3’RACE Inner Primer中含有BamH I酶切位点，为克隆实验提供了方便。制品中的Control RNA及Control Primer可以用于Control实验。
 
■ 各种引物的序列
引物名称 引物序列 (5’→3’)
   3’RACE Adaptor    含有由Takara特别设计的dT区域及Adaptor Primer部分
   3’RACE Outer Primer    TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT
   3’RACE Inner Primer    CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG
   3’RACE Control Outer Primer    GAGTGCAGGACATTGTGGTAGGG
   3’RACE Control Inner Primer    ATCTTTGACTGCCGTTCTCGACC
 
 
■ 试剂盒原理
进行3’RACE 实验时，首先由PrimeScript Reverse Transcriptase将Poly(A)+RNA反转录成cDNA，然后再使用TaKaRa LA Taq (Code No.: RR002A)，以反转录的cDNA为模板，进行套式PCR反应。3’RACE Adaptor Primer作为反转录引物用于cDNA合成 (具体原理见图1)。
 
3’-Full RACE Core Set with PrimeScript™ RTase
图1. 3’-Full RACE Core Set with PrimeScript RTase的实验原理图
 
1. 以Total RNA为模板，使用3’RACE Adaptor引物进行反转录反应，合成1st Strand cDNA。
2. 使用上游外侧特异性引物 (GSP1) 和3’RACE Outer Primer进行1st PCR反应。如果1st PCR反应未能得到目的产物，再使用上游内侧特异性引物 (GSP2) 和3’RACE Inner Primer进行2nd PCR反应。
3. PCR产物可以直接进行DNA测序或TA克隆。如果使用含有BamH I酶切位点的上游内侧特异性引物进行2nd PCR扩增时，可以使用限制酶 (BamH I) 对PCR产物进行酶切反应，然后克隆至相关的载体中。
 
■ 注意事项
1. 同时需要进行数次反转录反应或PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture等)，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用PrimeScript Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor等酶类时，应轻轻混匀，避免起泡，分取之前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 为了防止Control RNA分解，应尽量避免反复冻融。有条件的实验室建议保存于-70℃至-80℃。
5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。
 
 

页面更新：2017-04-07 10:39:54

cDNA文库构建酶试剂盒Takara

发表于由

cDNA文库构建
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 634933 In-Fusion SMARTer Directional cDNA Library Construction Kit 10 Rxns ￥18,158 cDNA文库构建 cDNA文库构建 cDNA文库构建
Clontech 634901 SMART cDNA Library Construction Kit Each ￥13,901 cDNA文库构建 cDNA文库构建 cDNA文库构建
Clontech 635003 pEXP-Lib Vector 20 μg ￥4,518 cDNA文库构建 cDNA文库构建 cDNA文库构建
Clontech 635002 pRetro-Lib Vector 20 μg ￥4,518 cDNA文库构建 cDNA文库构建 cDNA文库构建
收藏产品 加入购物车
 
由于产品升级，从即日起，您订购的In-Fusion SMARTer Directional cDNA Library Construction Kit（634933）中的组分In-Fusion HD Cloning Kit (Code No. 639649)将陆续替换为性能更高的In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code No. 638948)，该组分数量保持不变，请以实际收到的产品为准。如需含HD组分的旧版说明书或产品组分列表文件，请邮件联络zhukx@takarabiomed.com.cn
 
 
Clontech提供利用SMART技术构建全长cDNA的cDNA文库构建试剂盒。
 
创建长插入片段文库
SMART cDNA Library Construction Kit用于向噬菌体TriplEx2载体上克隆全长cDNA。试剂盒结合了RNA模板5’末端转换机制，即SMART技术，用于cDNA扩增，无需adaptor连接，即可定向克隆至TriplEx2载体。试剂盒提供了两种独立的流程，可以根据您的起始材料选择其中一种。起始材料有限可以使用长距离PCR(LD-PCR)方法，起始total RNA的量可以低至50 ng。另一种流程适用于起始材料充足的情况，例如起始材料是多于1 μg的 poly A+ RNA。与传统方法构建的cDNA文库或其他方法合成的全长cDNA比较，SMART文库包含了更大比例的全长克隆。所以，SMART cDNA文库分离出的克隆包含了对应的mRNA全部5’非翻译区的序列。
 
富集全长cDNA
SMART cDNA合成技术保证了cDNA合成连续不间断，得到的cDNA很好地反映了5’端的序列。
 
精简的流程更节省时间
由于高效的cDNA合成和克隆过程，In-Fusion SMARTer Library Construction流程比其他文库构建方法的步骤更少。全过程仅需三个酶，而其他方法需要6-8个酶参与反应。SMART(er) cDNA合成流程是用户友好的且更直接的，无需连接接头或加尾步骤。处理RNA样本的步骤少，从而降低了珍贵的RNA被降解的风险。
 
向任意载体插入您的文库
试剂盒结合In-Fusion克隆方法，仅需一个30分钟的反应即可把您的SMARTer cDNA文库克隆到In-Fusion SMARTer试剂盒附带的pSMART2IF或pSMART2IFD线性载体上。更重要的是，因为In-Fusion克隆是依赖于DNA片段末端15个互补碱基的，可以使用In-Fusion试剂盒准确地将您的SMARTer cDNA转移到任意线性载体上。如果您想把文库克隆到自己的表达载体上做功能分析，只需简单地通过反向PCR来扩增您的载体，生成线性载体时使用的引物需要与SMARTer cDNA末端互补。引物必须有两个特点：引物5’端包含15个碱基，这15个碱基与连接载体的DNA片段末端的15个碱基相互补；引物3’端必须包含与目标载体特异性结合的序列。
 
产品详情请点击：cDNA文库构建
 
 

页面更新：2021-11-30 16:50:19

Whatman1821-021GF系列无粘合剂玻璃微纤维滤纸GF/B 2.1CM 100/PK

发表于由

【简单介绍】

Whatman为客户提供多种多样的特殊实验产品，以满足实验者的不同实验需求。秉承Whatman传统的质量，这些产品集合了易于操作、精确度高、一致性好等优点。

【简单介绍】

Whatman为客户提供多种多样的特殊实验产品，以满足实验者的不同实验需求。秉承Whatman传统的质量，这些产品集合了易于操作、精确度高、一致性好等优点。

【详细说明】

原装进口英国Whatman1821-021GF系列无粘合剂玻璃微纤维滤纸GF/B 2.1CM 100/PK

英国Whatman1821-021GF系列无粘合剂玻璃微纤维滤纸GF/B 2.1CM 100/PK

产品介绍：

Galss Microfiber Filters玻璃微纤维滤纸

Whatman玻璃微纤维滤纸采用100%硼硅酸玻璃纤维制造而

成，包括不含粘合剂呈化学惰性的和含黏合剂的2种类型。

这种深度滤纸流速快、负载力大、保留颗粒极为细小，

可达亚微颗粒范围。玻璃微纤维滤纸能承受高达500℃的温

度，所以能用于需要灼烧的比重分析和高温气体过滤。

Whatman玻璃微纤维滤纸具有毛细纤维结构，能吸附比同

等纤维素滤纸更多的水分，使其能适用于点样分析和液闪计

数方法，并能制成全透明，用于后续的显微检验。

Whatman玻璃微纤维滤纸如GF/B或GF/D具有高流速、低抗

性和高颗粒负载力的特征，是理想的预滤产品，能明显地增

加过滤量。多级GMF 150滤纸特别适合于预滤那些难过滤的

大容量溶液。

英国Whatman1821-021GF系列无粘合剂玻璃微纤维滤纸GF/B 2.1CM 100/PK

玻璃微纤维GF系列

玻璃微纤维GF系列

无黏合剂玻璃微纤维滤纸

Grade GF/A : 1.6 μm

保留细小颗粒、流速快、负载力高，用于高效常规过滤，包

括废水水污染检测，用于过滤水、藻类和细菌培养、食品分

析、蛋白过滤和弱?发射器的放免测定，推荐用于空气污染

监测中的颗粒物重量测定、烟囱取样和吸附等。

此类滤纸也以滤杯和一次性过滤漏斗形式提供。

Grade GF/B : 1.0 μm

厚度是GF/A的3倍，湿强更高，负载力也明显增强。用于保

留细小颗粒，流速快。特别适用于在液体澄清或颗粒定量中

悬浮细颗粒高的样品处理。可用于膜过滤前的细颗粒物预过

滤，用于要求高负载力的LSC技术。

Grade GF/C : 1.2 μm

保留细小颗粒，有很好的流速。在世界许多地方，这是用于

收集饮用水和天然、工业废水中的悬浮物的标准滤纸。

快速而有效地澄清含小到中等细小颗粒的水溶液。当需要更

高负载的时候，广泛地用于细胞培养、液闪计数和结合分析

方面。

此种滤纸也可用于滤杯。

Grade 934-AH : 1.5 μm

用这种普遍的滤纸截流细小颗粒的优越性，在于快流速和高

负载力下有着非常高的保留效率。这是种表面光滑，高保留

力的硼硅酸微纤维滤纸，可耐高温达500℃。指定用于测定

水中悬浮物总数去除浑浊物和细菌培养的过滤。Grade 934-

AH用于很多范围的实验室应用中。推荐用于水污染监测、

细胞培养、液闪计数和空气污染监测。

Grade 934-AH RTUNEW

Grade 934-AH,广泛用于总悬浮颗粒分析，现在为您带来全

新的Ready-To-Use (RTU)规格,帮你节省更多的时间。

934-AH RTU不含有粘合剂，由高纯的硼硅酸玻璃微纤维制成，

完全符合标准方法的要求。预洗脱和预称量的规格，无需您

做预处理，使您的试验流程更流畅。每张RTU滤纸被放置于

一个铝盘中，在铝盘边上贴的抗热标签上清晰标注了滤纸的

重量。

特征和优点

l 快速方便:可直接使用预洗、预称量的滤纸，无需再预处理

l 高效:高流速下超细颗粒保留

l 高载量:可处理非常浑浊的样品

应用

934-AH RTU符合最新版水中总悬浮颗粒的检测标准方法

2540D的要求，被广泛用于水体检测，包括：

l 河流、湖泊和海岸水体监测

l 废水处理厂的废水纯化

l 工厂排水监控

英国Whatman1821-021GF系列无粘合剂玻璃微纤维滤纸GF/B 2.1CM 100/PK

英国Whatman1821-021GF系列无粘合剂玻璃微纤维滤纸GF/B 2.1CM 100/PK

石英滤纸-Grade QM-A : 2.2μm

高纯度石英(SiO2)微纤维滤纸，特别推荐用于烟囱、烟道、

烟雾方面空气污染监测工作，操作温度可达500℃。滤纸经

热处理，无黏合剂，重金属和碱土建树含量特别低。用于

PM-10检测。QM-A根据EPA标准编号，适合大部分应用。订

货信息请参考空气样品滤纸/石英滤纸部分。

Grade GF/D : 2.7 μm

流速相当快，在相同颗粒保留度的条件下，整个过滤速度比

纤维素更快。滤纸较厚，具有较强的负载力，可作为膜的预

滤。由不同大小来适合大多数滤器。GF/D为保留细小颗粒的

膜提供了很好的保护，可以和GF/B一起使用，给膜提供了非

常有效的预滤保护。

GF/F : 0.7 μm

小到0.7μm的细小颗粒的保留率极高，不同于滤膜，它有非

常快的流速，负载力极高。

因具有严格的0.6μm-0.8μm颗粒保留度和纯硼硅酸结构，

EPA TCLP 1311毒性滤取方法是以GF/F为基质创建的。

这种滤纸在今天仍是很好的选择。推荐用于DNA吸附和纯

化，过滤细小沉淀蛋白非常有效，GF/F与GF/D一起可以作

为极其难以澄清的生化溶液、流体和核酸的预滤膜。

这种滤纸同时也提供滤杯和一次性漏斗形式。

Grade EPM 2000 : 2.0 μm

EPM 2000被专门开发用来在高流量空气采样设备来收集大

气中颗粒剂气溶胶。由100%高纯度硼硅玻纤制成，用于痕

迹污染物在最低干扰和背景情况下的化学分析。

Grade GMF 150 : 1μm或2μm

Whatman GMF150是一种多层玻璃微纤维滤膜，最上层是个

粗滤层(10μm)，下层是孔径为1μm或者2μm的有网孔的细

滤层。采用100%硼硅酸玻璃纤维制成，没有任何添加剂，

通过很好的预滤作用来增强对颗粒的负载能力和加快过滤

速度。

英国Whatman1821-021GF系列无粘合剂玻璃微纤维滤纸GF/B 2.1CM 100/PK

英国Whatman1821-021GF系列无粘合剂玻璃微纤维滤纸GF/B 2.1CM 100/PK

英国Whatman1821-021GF系列无粘合剂玻璃微纤维滤纸GF/B 2.1CM 100/PK

上海金畔生物科技有限公司

文章号20536085-20536085

SMART 5’ RACE & 3’ RACE酶试剂盒Takara

发表于由

SMART 5’ RACE & 3’ RACE
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 634913 Marathon cDNA Amplification Kit 5 cDNA & 100 PCR Rxns ￥9,800 SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE
Clontech 634858 SMARTer RACE 5’/3’ Kit 10 Rxns ￥8,143
￥6,514 		SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE
Clontech 634859 SMARTer RACE 5’/3’ Kit 20 Rxns ￥15,472
￥12,378 		SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE
Clontech 634499 SMARTer RACE 5’/3’ Kit (no competent cells) 20 Rxns ￥12,331
￥9,865 		SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE
Clontech 634922 Universal Primer Mix 100 Rxns ￥1,709
￥1,367 		SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
由于产品升级，从即日起，您订购的SMARTer RACE试剂盒（634858/59）中的组分In-Fusion HD Cloning Kit (Code No. 639648)将陆续替换为性能更高的In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code No. 638947)，该组分数量保持不变，请以实际收到的产品为准。如需含HD组分的旧版说明书或产品组分列表文件，请邮件联络zhukx@takarabiomed.com.cn
 
 
■ 制品说明
RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) 是一种获得RNA转录本全长序列的技术。利用RACE技术可以根据转录本中的一小段已知序列获得转录本的5′端 (5′RACE-PCR) 或3′端 (3′RACE-PCR) 序列。
SMARTer RACE 5’/3′ Kit（Code No. 634858/59）是优化升级的试剂盒，具有更高的灵敏、更低的背景和更高的特异性。
采用SMART技术，以poly A+ 或总RNA为起始，合成的第一链cDNA可直接进行5′和3′RACE-PCR，不需要adaptor连接等步骤，整个流程更快、更易操作。SMART RACE 还结合了强有力的抑制性PCR，显著地减少了RACE实验中的弥散现象，是获得全长cDNA的有效方法。
SMARTer RACE 5’/3′ Kit（Code No. 634858/59）包含了除基因特异性引物外的所有组分，流程更精简。使用这一个试剂盒，即可以在8小时内完成第一链cDNA合成到克隆RACE片段的流程，并在第二天就可以挑取克隆进行分析。试剂盒包含了性能优良的SeqAmp DNA Polymerase，对于长片段或高GC含量等高难度片段的扩增也适用；NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up kit用于纯化PCR产物； 高效无缝克隆In-Fusion Snap Assembly Master Mix；高效率感受态细胞Stellar Competent Cells*。
* SMARTer® RACE 5’/3′ Kit (no competent cells) (634499)为不含感受态细胞的包装形式，便于长时间存放，组分的选择空间更大，实验搭配更灵活。另有高转化效率的感受态细胞单品Stellar化学转化感受态细胞供您选择，满足多种实验需求。
SMART RACE具有以下优势：
1. 更便捷的操作
采用SMARTer RACE 技术，可以在一管内完成两步反应。只需很少的操作RNA和新合成cDNA的步骤，整个实验只需4小时。
2. 只需10 ng总RNA
SMARTer RACE 尤其适用于起始材料有限的情况，如活体组织检查样本、组织分离术样本、针吸活检样本、胚胎组织及病变组织样本等。优化的实验操作，显著地降低了非特异性扩增，这对有限的实验材料尤为重要。
3. 富集具有完整5′端序列的cDNA
专门设计的SMARTer Oligo 优先与新合成的cDNA 的5′端结合，可以富集具有完整5′端序列的cDNA，因此，可以获得全长基因序列或上游调控序列。
4. 不需要RNA预处理
SMARTer RACE方法不需要RNA预处理。可以采用总RNA，甚至是含有基因组DNA的RNA材料进行实验。
 
■ 制品特点
1. 低背景的完整RACE试剂盒
2. SMARTer技术合成完整的5′和3′端序列
3. 合成的第一链cDNA直接用于RACE PCR，无需接头连接
4. 只需10 ng总RNA
 
产品详情请点击：SMART 5’ RACE & 3’ RACE
 
 

页面更新：2021-12-25 08:56:33

SeqAmp DNA Polymerase酶试剂盒Takara

发表于由

SeqAmp DNA Polymerase
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 638504 SeqAmp DNA Polymerase 50 Rxns ￥1,446 SeqAmp DNA Polymerase SeqAmp DNA Polymerase SeqAmp DNA Polymerase
Clontech 638509 SeqAmp DNA Polymerase 200 Rxns ￥4,051 SeqAmp DNA Polymerase SeqAmp DNA Polymerase SeqAmp DNA Polymerase
Clontech 638526 SeqAmp CB PCR Buffer 50 Rxns ￥361 SeqAmp DNA Polymerase SeqAmp DNA Polymerase SeqAmp DNA Polymerase
收藏产品 加入购物车
 
SeqAmp DNA Polymerase是hot start型高保真酶，非常适合与各种SMARTer试剂盒一起使用进行下一代测序。该PCR酶已经过优化，即使含有高GC或高AT区域的困难模板，也证实了可以进行很好的扩增。
 
 
产品详情请点击：SeqAmp DNA Polymerase
 
 

页面更新：2020-08-03 10:01:45

ExpressHyb杂交液酶试剂盒Takara

发表于由

ExpressHyb杂交液
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 636833 ExpressHyb Hybridization Solution 1 L ￥9,459 ExpressHyb杂交液 ExpressHyb杂交液 ExpressHyb杂交液
收藏产品 加入购物车
 
■ 制品说明
本制品可以减少杂交次数，同时提高灵敏度（Yang and Kain 1995）。其他杂交溶液通常需要过夜孵育，导致高背景。本制品可以有效地用于放射性或非放射性标记DNA或寡聚核苷酸探针或核糖核酸探针。
ExpressHyb杂交液是一种预配制的水溶液，比其他市售杂交溶液粘度小，可在室温下保存。可用于放射性同位素、比色法和化学发光检测系统中的Northern杂交、Southern杂交和菌落杂交操作流程。
 
■ 制品应用
1. 适用于各种杂交应用——Northern blots、Southern blots、dot blots、癌症和疾病阵列分析和菌落杂交。
2. 优化用于RNA blots和cDNA blots。
 
■ 保存
室温
 
■ 参考文献
Yang, T. T. & Kain, S. R. Fast hybridization solution for the detection of immobilized nucleic acids. Biotechniques 18, 498-503 (1995).
 
 
产品详情请点击：ExpressHyb杂交液
 
 

页面更新：2020-12-28 16:31:40

Oligo modification：Uni-Link AminoModifier酶试剂盒Takara

发表于由

Oligo modification：Uni-Link AminoModifier
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 635703 Uni-Link AminoModifier 100 mg ￥3,613 Oligo modification：Uni-Link AminoModifier Oligo modification：Uni-Link AminoModifier Oligo modification：Uni-Link AminoModifier
收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
Code No. 产品名称
635703   Uni-Link™ AminoModifier
 
Uni-Link AminoModifier is a cyanoethyl phosphoramidite that allows you to directly incorporate a primary amine onto the 5′ end of an oligonucleotide using automated synthesis. Label-ON reagents provide an efficient way to directly label oligonucleotides with various reporter molecules. All Label-On Reagents possess the patented 2-aminobutyl-1,3-propanediol (ABPD) backbone, which offer distinct benefits.
 
 
产品详情请点击：Oligo modification：Uni-Link AminoModifier
 
 

页面更新：2019-11-05 11:25:50

随机突变试剂盒酶试剂盒Takara

发表于由

随机突变试剂盒
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 630703 Diversify PCR Random Mutagenesis Kit 30 Rxns ￥9,178 随机突变试剂盒 随机突变试剂盒 随机突变试剂盒
收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
Code No. 产品名称
630703   Diversify™ PCR Random Mutagenesis Kit
 
Diversify PCR Random Mutagenesis Kit采用无毒方法可突变长度至多4.0 kb的序列。 该试剂盒应用广泛，可用于所有的突变而不产生突变热点。
 
产品特点
· 可控的随机突变。可用于分析蛋白质功能
· 准确的控制突变率
· 无突变热点
· 获取所有的碱基替换
 
 
产品详情请点击：随机突变试剂盒
 
 

页面更新：2019-11-05 11:35:31

TaKaRa MutanBEST Kit酶试剂盒Takara

发表于由

TaKaRa MutanBEST Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara R401 TaKaRa MutanBEST Kit 20 Rxns ￥1,277 TaKaRa MutanBEST Kit TaKaRa MutanBEST Kit TaKaRa MutanBEST Kit
收藏产品 加入购物车
 
■ 制品内容 (20 次量)
Pyrobest DNA Polymerase (5 U/μl) 15 μl
10×Pyrobest Buffer II 200 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each) 180 μl
10×Blunting Kination Buffer 50 μl
Blunting Kination Enzyme Mix 25 μl
Ligation Solution I* 150 μl
 
* Ligation Solution I 即为Ligation Kit Ver.2.1 的一种组份。
 
 
■ 制品说明
本制品是利用PCR技术进行定点突变操作的试剂盒。其原理是利用导入变异点的引物进行PCR反应后，对PCR产物进行末端平滑化及5’磷酸 (P) 化处理，再用高效连接试剂Ligation Solution I进行自身连接 (环化反应)，然后转化、提取突变体DNA。
本试剂盒的原理十分简单，但Taq酶在PCR过程中的错配率限制了这一技术的应用。现在，Takara的Pyrobest DNA Polymerase使这一技术得到了很好的发挥。Pyrobest DNA Polymerase不仅具有很高的保真性（Fidelity），并且和TaKaRa Taq具有同样的扩增效率。与其他突变试剂盒相比，本试剂盒的特点是操作方便、简单，只需一天时间便可完成整个操作，并且不受载体、宿主菌的限制。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ TaKaRa MutanBEST Kit原理
试剂盒原理见下图，全套操作约需5小时，简单说明如下。
1. 设计一对5’端邻接，3’端方向相反的引物用以导入变异点。
2. 进行PCR扩增 (使用高保真DNA聚合酶Pyrobest DNA Polymerase)。
3. PCR片段的末端平滑及5’末端磷酸化反应 (在同一反应体系内进行，反应只需10分钟)。
4. 自身连接反应 (使用本试剂盒中的DNA高效连接液Ligation Solution I，连接反应只需30 分钟至1小时)。
5. 质粒DNA转化，挑选变异体。
 
TaKaRa MutanBEST Kit
 
■ 注意事项
1. 当载体与插入的DNA片段的总长度小于5 kb时，使用本试剂盒较为合适；如果载体与插入DNA 片段长度太长时，不推荐使用本试剂盒。
2. PCR反应后的DNA片段应进行切胶回收纯化，然后再进行自身连接反应，这样可以提高突变成功率。
3. Ligation Solution I请于冰中融解，使用前混匀。应避免多次反复冻融。
4. 连接转化效率低时，请试用下述方法进行改进。
① 确认感受态细胞的转化效率。
② 延长连接反应时间至过夜反应。
 
 

页面更新：2020-01-16 13:49:56

Genome Walking Kit酶试剂盒Takara

发表于由

Genome Walking Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6108 Genome Walking Kit 10 Rxns ￥1,502 Genome Walking Kit Genome Walking Kit Genome Walking Kit
收藏产品 加入购物车
 
■ 制品内容 (10 次量)
AP1 Primer (100 pmol/μl ) 30 μl
AP2 Primer (100 pmol/μl ) 30 μl
AP3 Primer (100 pmol/μl ) 30 μl
AP4 Primer (100 pmol/μl ) 50 μl
Control Template (100 ng/μl )*1 10 μl
Control Specific Primer SP1 (10 pmol/μl )*2 10 μl
Control Specific Primer SP2 (10 pmol/μl )*2 10 μl
Control Specific Primer SP3 (10 pmol/μl )*2 10 μl
TaKaRa LA Taq (5 U/μl ) 25 μl
10 × LA PCR Buffer II (Mg2+plus) 1 ml
dNTP Mixture (2.5 mM each) 400 μl
6 × Loading Buffer 1 ml
 
*1 Control Template 是Human HL60来源的基因组DNA。
*2 Control Specific Primers是根据人基因组中的ALDOA基因设计的特异性引物。
 
■ 制品说明
染色体步移技术 (Genome Walking) 是一种重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效获取与已知序列相邻的未知序列。染色体步移技术主要有以下几方面的应用：
1. 根据已知的基因或分子标记连续步移，获取人、动物和植物的重要调控基因，可以用于研究结构基因的表达调控。如分离克隆启动子并对其功能进行研究；
2. 步查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列；
3. 鉴定T-DNA或转座子的插入位点，鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点等；
4. 用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列；
5. 用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。
对于基因组测序已经完成的少数物种 (如人、小鼠、线虫、水稻、拟南芥等) 来说，可以轻松地从数据库中找到某物种已知序列的侧翼序列。但是，对于大多数生物而言，在不了解它们的基因组序列以前，想要知道一个已知区域两侧的DNA序列，只能采用染色体步移技术。
以PCR技术为基础的染色体步移的主要问题是在预先不了解未知区域序列信息的情况下，如何设计两个特异性引物来扩增未知区域。而传统的染色体步移方法，如：反向PCR法、连接接头法等，都有操作复杂、非特异性扩增、连接效率低等弊端。
本试剂盒是一种根据已知基因组DNA序列，高效获取侧翼未知序列的试剂盒。本试剂盒是在TAIL-PCR (thermal asymmetric interlaced PCR，即交错热不对称PCR）的基础上进行改进的。相对于其它传统方法，本试剂盒具有高效、简便、特异性高、灵敏度高、一次性获得的未知序列较长等特点。其主要原理是根据已知DNA序列，分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物(SP Primer)，与试剂盒中提供的四种经过特别设计的退火温度较低的兼并引物，即AP1、AP2、AP3、AP4进行热不对称PCR反应。通常情况下，其中至少有一种兼并引物可以与特异性引物之间利用退火温度的差异进行热不对称PCR反应，通过三次巢式PCR反应即可获取已知序列的侧翼序列。如果一次实验获取的长度不能满足实验要求时，还可以根据第一次步移获取的序列信息，继续进行侧翼序列获取。此外，本试剂盒中还含有Control DNA及Control Primer，可以方便进行Control实验。
 
■ 试剂盒原理：以使用兼并引物AP1为例。
 
Genome Walking Kit
图1. Genome Walking Kit的实验原理图
 
■ 各种引物的序列
引物名称 引物序列 (5’→3’)
       Control Specific Primer SP1     AAATGCTGCAGCCTCCCTCTCACCC
       Control Specific Primer SP2     AATACCAGAAATGTGCCCTCCCGTG
       Control Specific Primer SP3     TGAGCTGGCAGGTTGTAGTCTCTGT
 
■ 特异性引物的设计
 
Genome Walking Kit
图2. Genome Walking Kit特异性引物设计示意图
特异性引物设计原则：
根据经过验证的已知序列区 (最好不少于500 bp) 设计三个特异性引物 (见上图)：设计方向为需要扩增的未知区域方向，SP2的位置应设计在SP1的内侧，SP3位于SP2的内侧。每两个引物之间的距离没有严格规定，一般以60-100 bp为宜。引物设计原则：引物的长度为22-26 nt，GC含量45-55%，Tm值60-70℃，引物Tm值计算公式：Tm=69.3+0.41(G/C)%×100 – 650/L (引物碱基数)。其他要求和普通PCR反应用引物相同。
 
■ 注意事项
1. 使用本试剂盒时，进行三次PCR反应时使用的AP引物必须是同种AP引物，即：1st PCR反应时使用的是AP1，则2nd和3rd PCR反应都必须使用AP1。对于不同物种，各条AP引物的扩增效率各不相同。
2. 在设计特异性引物时，SP3 Primer不要距离未知序列区域太远，一般以100-200 bp为宜，以增加获取未知序列的有效长度。
 
 

页面更新：2018-12-25 11:39:43

Universal GenomeWalker™ 2.0酶试剂盒Takara

发表于由

Universal GenomeWalker™ 2.0
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 636405 Universal GenomeWalker™ 2.0 Each ￥11,799 Universal GenomeWalker™ 2.0 Universal GenomeWalker™ 2.0 Universal GenomeWalker™ 2.0
收藏产品 加入购物车
 
GenomeWalker试剂盒：鉴定您感兴趣的基因附近的序列
GenomeWalker Kits提供了一种简单的、基于PCR方法的基因发现工具，通过在已知序列的基因组DNA上游或下游步移，寻找与已知序列相邻的新的和未知的序列 [例如，表达序列标签 (EST)]。GenomeWalker允许使用LD PCR在基因组DNA中进行高达6 kb 的独立步骤。可以通过采取多个步骤或使用基于先前步骤中获得的序列的新引物来简单地扩展步移。
 
Universal GenomeWalker 2.0 Kit是一个完整的试剂盒，包含构建基因文库和在任意物种的基因组DNA中执行基于PCR的“步移”所需的所有试剂。除了通用GenomeWalker文库构建组件外，该试剂盒还包括Advantage 2 PCR Kit、NucleoSpin Tissue 以及NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up试剂盒。GenomeWalker Universal 2.0 Kit的包装量足够从三个不同样本制备三个基因文库以及进行80次步移。您需要添加的只是您自己的基因特异性引物 (GSP)。
 
概述
· 基因组DNA中基于PCR的快速步移
· 用于发现外显子-内含子连接区、启动子或其他调控元件的理想选择
· 快速测定新的或未知的序列

 
更多信息
应用
· 基因组DNA步移
· 发现启动子或调控序列
· 内含子/外显子连接区的绘制
· 转座子和病毒整合位点测定
· 基因组修饰（使用锌指核酸酶、TAL效应核酸酶等）
· 基因组DNA克隆
 
 
产品详情请点击：Universal GenomeWalker™ 2.0
 
 

页面更新：2021-08-13 14:33:00

pBackZero-T Vector Cloning Kit酶试剂盒Takara

发表于由

pBackZero-T Vector Cloning Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 3275 pBackZero-T Vector Cloning Kit 20 Rxns ￥631 pBackZero-T Vector Cloning Kit pBackZero-T Vector Cloning Kit pBackZero-T Vector Cloning Kit
收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
pBackZero-T Vector Cloning Kit → pBackZero-T Vector Cloning Kit → pBackZero-T Vector Cloning Kit → pBackZero-T Vector Cloning Kit → pBackZero-T Vector Cloning Kit
 
pBackZero-T Vector Cloning Kit
pBackZero-T Vector Cloning Kit  
pBackZero-T Vector Cloning Kit
 
 
■ 制品内容
pBackZero-T Vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支
Control Insert 4 (50 ng/μl) 10 μl × 1 支
Solution I*1 75 μl × 2 支
Primer Bla M1 (20 μM)*2 50 μl × 1 支
Primer Bla RV (20 μM)*2 50 μl × 1 支
   
*1：使用时请于冰中融解。
*2：Primer Bla M1：5’- AAG CCC TCC CGT ATC GTA GTT ATC -3’ (24 nt)
    Primer Bla RV：5’- ACT CAC GTT AAG GGA TTT TGG TCA -3’ (24 nt)
 
■ 制品说明
pBackZero-T Vector是一种阳性克隆率非常高而背景很低的PCR产物克隆 (TA Cloning) 专用载体。本载体是由pUC19载体改建而成，它消除了pUC19载体上的LacZ基因及多克隆位点，并对β-lactamase (bla) 基因进行了特别的改造，再通过酶切反应，最后在两侧的3’端添加“T”而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3’末端添加一个“A”的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。
本载体对β-lactamase基因进行了特别的改造，使用时需在待插入的DNA片段的上、下游Primer的5’端加上TTTAA 5个碱基。如果需要进行定向克隆，只需在一条引物的5’端加上TTTAA 5个碱基，这样可以保障β-lactamase基因具有活性，菌落可以在Amp抗性平板上生长。而那些由于载体自连、插入非目的片段等原因造成的假阳性克隆不具有β-lactamase基因活性，不能在Amp抗性平板 (工作浓度100 μg/ml) 上生长。因此使用这种载体在Amp抗性平板上生长的菌落基本都是阳性克隆，背景降至很低，保证了非常高的阳性克隆率。使用本试剂盒中的Control Insert 4时，阳性克隆率可以达到99%以上。此外，本载体也无需使用IPTG/X-Gal进行蓝白筛选。值得注意的是由于本载体上消除了多克隆酶切位点，当PCR产物使用本载体进行克隆时，将无法使用载体上的限制酶切位点，需要事先在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。本制品中的高效连接液Solution I可以在短时间内(约30分钟)完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。本制品中的Control Insert 4 (500 bp) 可以用于Control反应。
 
   
■ 保存
-20℃。
 
■ 纯度
Control Insert 4经克隆后，有99%以上含有Insert DNA片段。
 
■ 用途
1. 进行TA克隆，克隆PCR产物。
2. 低背景需求的克隆。
3. 对克隆后的DNA进行测序。
4. 定向克隆。
 
■ pBackZero-T Vector的结构
pBackZero-T Vector Cloning Kit
 
■ 使用事项
1. PCR片段扩增用的2条Primer除了含有扩增目的片段用的序列外，还要在其5’端均加入TTTAA 5个碱基。当进行定向克隆时，可以选择其中1条Primer加入TTTAA 5个碱基。
2. Solution I请于冰中融解。
3. 克隆时使用的Insert DNA片段(PCR产物)建议进行切胶回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA(甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响TA克隆效率 。
4. 按照本实验操作进行连接后，直接进行转化时的连接液不要超过20 μl。当要转化的DNA量较大或准备进行电转化时，需对连接液进行乙醇沉淀，纯化DNA后再进行转化。进行乙醇沉淀时使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No. : 9094) 可以提高DNA的回收率。
5. 连接反应请在25℃以下进行，温度升高 (>26℃) 较难形成环状DNA。连接效率偏低时，可适当延长连接反应时间至数小时。
6. 本制品来源于pUC19载体，因此，适合pUC19载体的感受态细胞都可以使用，如：JM109等。
7. 由于本制品是利用β-lactamase缺失进行筛选，所以对筛选平板使用的氨苄青霉素 (Amp) 的质量要求较高，请使用高品质的氨苄青霉素 (Amp) ，工作浓度为100 μg/ml。不要使用配制时间过长的氨苄青霉素 (Amp) 或平板。
 
 

页面更新：2019-10-12 14:21:24

pMD™18-T Vector Cloning Kit酶试剂盒Takara

发表于由

pMD™18-T Vector Cloning Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6011 pMD™ 18-T Vector Cloning Kit 20 Rxns ￥530
买一送一 		pMD™18-T Vector Cloning Kit pMD™18-T Vector Cloning Kit pMD™18-T Vector Cloning Kit

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
pMD™18-T Vector Cloning Kit → pMD™18-T Vector Cloning Kit → pMD™18-T Vector Cloning Kit → pMD™18-T Vector Cloning Kit → pMD™18-T Vector Cloning Kit
 
pMD™18-T Vector Cloning Kit
pMD™18-T Vector Cloning Kit  
pMD™18-T Vector Cloning Kit
 
 
■ 制品内容
pMD 18-T Vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支
Control Insert (50 ng/μl) 10 μl × 1 支
Solution I* 75 μl × 2 支
   
* 使用时请于冰中融解。  
 
■ 制品说明
pMD 18-T Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体。本载体由pUC18载体改建而成，在pUC18载体的多克隆位点处的Xba I 和Sal I 识别位点之间插入了EcoR V 识别位点，用EcoR V 进行酶切反应后，再在两侧的3′端添加 “T” 而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR 产物的3′末端添加一个 “A” 的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。
由于本载体以pUC18载体为基础构建而成，所以它具有同pUC18载体相同的功能。此外，本制品中的高效连接液Solution I 可以在短时间内 (约30分钟) 完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。本制品中的Control Insert (500 bp) 还可以用于Control反应。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 纯度
Control Insert经克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert DNA片段。
 
■ 用途
1. 进行TA克隆，克隆PCR产物。
2. 对克隆后的PCR产物使用BcaBEST Sequencing Primers、M13 Primers进行DNA测序。
 
■ pMD 18-T Vector的结构
pMD™18-T Vector Cloning Kit
 
■ 注意事项
1. Solution I 请于冰中融解。
2. 克隆时使用的Insert DNA片段 (PCR产物) 建议进行切胶回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA (甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响TA克隆效率。
3. 按照本实验操作进行连接后，直接进行转化时的连接液不要超过20 μl。当要转化的DNA量较大或准备进行电转化时，需对连接液进行乙醇沉淀，纯化DNA后再进行转化。进行乙醇沉淀时使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以提高DNA的回收率。
4. 连接反应请在25℃以下进行，温度升高 (>26℃) 较难形成环状DNA。连接效率偏低时，可适当延长连接反应时间至数小时。
5. 本制品来源于pUC18载体，因此，适合pUC18载体的感受态细胞都可以使用，如：JM109等。
 
 

页面更新：2019-10-12 14:14:02

pMD™19-T Vector Cloning Kit酶试剂盒Takara

发表于由

pMD™19-T Vector Cloning Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 6013 pMD™ 19-T Vector Cloning Kit 20 Rxns ￥530
买一送一 		pMD™19-T Vector Cloning Kit pMD™19-T Vector Cloning Kit pMD™19-T Vector Cloning Kit

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
pMD™19-T Vector Cloning Kit → pMD™19-T Vector Cloning Kit → pMD™19-T Vector Cloning Kit → pMD™19-T Vector Cloning Kit → pMD™19-T Vector Cloning Kit
 
pMD™19-T Vector Cloning Kit
pMD™19-T Vector Cloning Kit  
pMD™19-T Vector Cloning Kit
 
 
■ 制品内容
pMD 19-T Vector (50 ng/μl) 20 μl × 1 支
Control Insert (50 ng/μl) 10 μl × 1 支
Solution I* 75 μl × 2 支
   
* 使用时请于冰中融解。  
 
■ 制品说明
pMD 19-T Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体。本载体由pUC19载体改建而成，在pUC19载体的多克隆位点处的Xba I 和Sal I 识别位点之间插入了EcoR V 识别位点，用EcoR V 进行酶切反应后，再在两侧的3′端添加 “T” 而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR 产物的3′末端添加一个 “A” 的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。
由于本载体以pUC19载体为基础构建而成，所以它具有同pUC19载体相同的功能。此外，本制品中的高效连接液Solution I 可以在短时间内 (约30分钟) 完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。本制品中的Control Insert (500 bp) 还可以用于Control反应。
本载体与pMD 18-T Vector 相比，本制品的β-半乳糖苷酶的表达活性更高，菌落显示蓝色的时间缩短，菌落显示的蓝色更深。因此，克隆后更容易进行克隆体的蓝白筛选。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 纯度
Control Insert经克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert DNA片段。
 
■ 用途
1. 进行TA克隆，克隆PCR产物。
2. 对克隆后的PCR产物使用BcaBEST Sequencing Primers、M13 Primers进行DNA测序。
 
■ pMD 19-T Vector的结构
pMD™19-T Vector Cloning Kit
 
■ 注意事项
1. Solution I 请于冰中融解。
2. 克隆时使用的Insert DNA片段 (PCR产物) 建议进行切胶回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA (甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响TA克隆效率。
3. 按照本实验操作进行连接后，直接进行转化时的连接液不要超过20 μl。当要转化的DNA量较大或准备进行电转化时，需对连接液进行乙醇沉淀，纯化DNA后再进行转化。进行乙醇沉淀时使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以提高DNA的回收率。
4. 连接反应请在25℃以下进行，温度升高 (>26℃) 较难形成环状DNA。连接效率偏低时，可适当延长连接反应时间至数小时。
5. 本制品来源于pUC19载体，因此，适合pUC19载体的感受态细胞都可以使用，如：JM109等。
 
 

页面更新：2019-10-12 14:15:04

T-Vector pMD™19 (Simple)酶试剂盒Takara

发表于由

T-Vector pMD™19 (Simple)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 3271 T-Vector pMD™19 (Simple) 1 μg ￥410 T-Vector pMD™19 (Simple) T-Vector pMD™19 (Simple) T-Vector pMD™19 (Simple)
收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
T-Vector pMD™19 (Simple) → T-Vector pMD™19 (Simple) → T-Vector pMD™19 (Simple) → T-Vector pMD™19 (Simple) → T-Vector pMD™19 (Simple)
 
T-Vector pMD™19 (Simple)
T-Vector pMD™19 (Simple)  
T-Vector pMD™19 (Simple)
 
 
■ 制品内容
T Vector pMD 19 (Simple) (50 ng/μl) 20 μl
Control Insert (50 ng/μl) 10 μl
 
■ 制品说明
T-Vector pMD19 (Simple) 是两侧的3’端添加了“T”的线性化载体，因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR 产物的3’末端添加一个“A”的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。本载体尽管消除了LacZ基因上的多克隆酶切位点，但不影响β-半乳糖苷酶的正常表达，因此，PCR产物克隆后仍可以利用α-互补性进行蓝白菌落的筛选，挑选阳性克隆。由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。本制品中的Control Insert (500 bp) 还可以用于Control反应。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ T Vector pMD 19 (Simple) 的结构
T-Vector pMD™19 (Simple)
 
■ 技术资料
点击下载序列信息： T-Vector pMD™19 (Simple)
 

页面更新：2022-06-06 13:30:25