人原代肝脏细胞维持培养基酶试剂盒Takara


人原代肝脏细胞维持培养基
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Cellartis Y20020 Cellartis® Power Primary HEP Medium 250 ml ¥4,698 人原代肝脏细胞维持培养基 人原代肝脏细胞维持培养基 人原代肝脏细胞维持培养基
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人原代肝脏细胞培养基
人原代肝脏细胞(Human primary hepatocytes, hphep) 是肝脏疾病毒理学研究和相关药物研发的有力工具。对肝脏疾病模型研究和肝毒性检测而言,一个稳健的hphep培养体系至关重要。然而,当前可用的培养体系培养的肝脏细胞在一周内就丧失了功能性和活性,严重限制了原代肝脏细胞的应用。而且,这些培养基维持培养中还需要每天换液。
 
Cellartis Power Primary HEP Medium是专门制定的、用于长期维持培养的人原代肝脏细胞培养基。冻存复苏后接种的hphep,在方便操作的2D培养中,可以存活并维持功能特性4周。此外,这款培养基进一步简化了肝细胞培养,提供一个周末免换液的培养日程。
 
■ 产品特点
· 延长培养时间—原代肝脏细胞可以存活并维持功能特性长达4周,经过CYP 活性、 albumin分泌
   和CYP诱导能力检测验证。
· 形式灵活—冷冻运输,可以被分装和再次冻存。
· 操作简便—周末免换液的培养日程, 使用隔天换液 (周一,周三,周五) 而不是每天换液,
   无需准备复杂的overlays或sandwich培养。
 
■ 产品应用
· Liver disease modeling
· Hepatotoxicity assessment
· Chronic toxicity
 
■ 产品详情请点击:人原代肝脏细胞维持培养基
 
 
 
人原代肝脏细胞维持培养基
使用Cellartis Power Primary HEP Medium分别培养来源于三个不同品牌的、复苏接种的人原代肝脏细胞。
Cryoplateable human primary hepatocytes from three different vendors (1, 2, and 3) cultured in Cellartis Power Primary HEP Medium. Cells were cultured as described and images were taken 1 (Panel A), 7 (Panel B), 14 (Panel C), 21 (Panel D) and 28 (Panel E) days after thawing. For all images, the scale bar is 100 μm.
  (以上图片来源于Takara Bio USA, Inc.)
 
 
 

页面更新:2019-12-25 09:56:04

SMART 5’ RACE & 3’ RACE酶试剂盒Takara


SMART 5’ RACE & 3’ RACE
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634913 Marathon cDNA Amplification Kit 5 cDNA & 100 PCR Rxns ¥9,800 SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE
Clontech 634858 SMARTer RACE 5’/3’ Kit 10 Rxns ¥8,143
¥6,514
SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE
Clontech 634859 SMARTer RACE 5’/3’ Kit 20 Rxns ¥15,472
¥12,378
SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE
Clontech 634499 SMARTer RACE 5’/3’ Kit (no competent cells) 20 Rxns ¥12,331
¥9,865
SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE
Clontech 634922 Universal Primer Mix 100 Rxns ¥1,709
¥1,367
SMART 5’ RACE & 3’ RACE SMART 5’ RACE & 3’ RACE

*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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由于产品升级,从即日起,您订购的SMARTer RACE试剂盒(634858/59)中的组分In-Fusion HD Cloning Kit (Code No. 639648)将陆续替换为性能更高的In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code No. 638947),该组分数量保持不变,请以实际收到的产品为准。如需含HD组分的旧版说明书或产品组分列表文件,请邮件联络zhukx@takarabiomed.com.cn
 
 
■ 制品说明
RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) 是一种获得RNA转录本全长序列的技术。利用RACE技术可以根据转录本中的一小段已知序列获得转录本的5′端 (5′RACE-PCR) 或3′端 (3′RACE-PCR) 序列。
SMARTer RACE 5’/3′ Kit(Code No. 634858/59)是优化升级的试剂盒,具有更高的灵敏、更低的背景和更高的特异性。
采用SMART技术,以poly A+ 或总RNA为起始,合成的第一链cDNA可直接进行5′和3′RACE-PCR,不需要adaptor连接等步骤,整个流程更快、更易操作。SMART RACE 还结合了强有力的抑制性PCR,显著地减少了RACE实验中的弥散现象,是获得全长cDNA的有效方法。
SMARTer RACE 5’/3′ Kit(Code No. 634858/59)包含了除基因特异性引物外的所有组分,流程更精简。使用这一个试剂盒,即可以在8小时内完成第一链cDNA合成到克隆RACE片段的流程,并在第二天就可以挑取克隆进行分析。试剂盒包含了性能优良的SeqAmp DNA Polymerase,对于长片段或高GC含量等高难度片段的扩增也适用;NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up kit用于纯化PCR产物; 高效无缝克隆In-Fusion Snap Assembly Master Mix;高效率感受态细胞Stellar Competent Cells*
* SMARTer® RACE 5’/3′ Kit (no competent cells) (634499)为不含感受态细胞的包装形式,便于长时间存放,组分的选择空间更大,实验搭配更灵活。另有高转化效率的感受态细胞单品Stellar化学转化感受态细胞供您选择,满足多种实验需求。
SMART RACE具有以下优势:
1. 更便捷的操作
采用SMARTer RACE 技术,可以在一管内完成两步反应。只需很少的操作RNA和新合成cDNA的步骤,整个实验只需4小时。
2. 只需10 ng总RNA
SMARTer RACE 尤其适用于起始材料有限的情况,如活体组织检查样本、组织分离术样本、针吸活检样本、胚胎组织及病变组织样本等。优化的实验操作,显著地降低了非特异性扩增,这对有限的实验材料尤为重要。
3. 富集具有完整5′端序列的cDNA
专门设计的SMARTer Oligo 优先与新合成的cDNA 的5′端结合,可以富集具有完整5′端序列的cDNA,因此,可以获得全长基因序列或上游调控序列。
4. 不需要RNA预处理
SMARTer RACE方法不需要RNA预处理。可以采用总RNA,甚至是含有基因组DNA的RNA材料进行实验。
 
■ 制品特点
1. 低背景的完整RACE试剂盒
2. SMARTer技术合成完整的5′和3′端序列
3. 合成的第一链cDNA直接用于RACE PCR,无需接头连接
4. 只需10 ng总RNA
 
产品详情请点击:SMART 5’ RACE & 3’ RACE
 
 

页面更新:2021-12-25 08:56:33

In-Fusion HD Cloning Plus酶试剂盒Takara


In-Fusion HD Cloning Plus
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 638909 In-Fusion HD Cloning Plus 10 Rxns ¥3,788 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638910 In-Fusion HD Cloning Plus 50 Rxns ¥15,839 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638911 In-Fusion HD Cloning Plus 100 Rxns ¥27,272 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638920 In-Fusion HD Cloning Plus 96 Rxns ¥26,029 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638916 In-Fusion HD Cloning Plus CE 10 Rxns ¥4,232 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638917 In-Fusion HD Cloning Plus CE 50 Rxns ¥16,630 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
Clontech 638918 In-Fusion HD Cloning Plus CE 100 Rxns ¥26,058 In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
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In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
 
In-Fusion HD Cloning Plus
In-Fusion HD Cloning Plus  
In-Fusion HD Cloning Plus
 
 
In-Fusion克隆选择
制品名称 Code No. 除In-Fusion酶外,试剂盒中附带的制品
纯化用试剂 纯化用Column 高效感受态 高保真PCR酶
Cloning Enhancer NucleoSpin Stellar Competent Cell CloneAmp HiFi PCR Premix
In-Fusion® HD Cloning Kit 639648/49/50 - - - -
In-Fusion® HD Cloning Kit w/Cloning Enhancer 639633/34/35 - - -
In-Fusion® HD Cloning Kit w/NucleoSpin 639639/40/41 - - -
In-Fusion® HD Cloning Kit w/Competent Cells 639642/43/44 - - -
In-Fusion® HD Cloning Plus 6338909/10/11/20 -
In-Fusion® HD Cloning Plus CE 638916/17/18/19 -
In-Fusion® HD Cloning System 639645/46/47/92 - -
In-Fusion® HD Cloning System CE 639636/37/38/93 - -
 
In-Fusion PCR Cloning Kits可以在15分钟反应内,将任一PCR片段或多个片段方向性地、无缝地克隆到任何线性载体上。无需对PCR片段进行其他的处理,例如限制酶切、连接、磷酸化或末端平滑化。 In-Fusion HD Cloning kits的效率可达95%。
 
In-Fusion PCR Cloning 是如何作用的
利用PCR产物和线性载体末端的15 bp重叠序列,In-Fusion酶可以高效准确地将PCR产物和线性载体融合在一起。可以通过设计引物来扩增得到15 bp重叠序列。该方法无需亚克隆即可将单片段或多片段克隆到单一载体。
 
In-Fusion HD Cloning Plus组分
所有In-Fusion HD Cloning Plus kits包含 In-Fusion HD enzyme premix和control实验的试剂。 In-Fusion HD Cloning Plus kits 还包括:
·CloneAmp HiFi High Fidelity PCR Premix
  CloneAmp HiFi PCR Premix 是方便的2× master mix,实现准确、高效、快速的DNA扩增。Premix
  中包含了dNTP和优化的buffer,PCR反应可以设置为快速反应,更便利地实现成功的克隆。
·Stellar Competent Cells
  Stellar Competent Cells属于E. coli HST08细胞系,具有大于5 × 108 cfu/μg的高转化效率,
  有助于 提高In-Fusion HD Cloning Plus kit的效率。
·Cloning Enhancer 或NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up
  1.Cloning Enhancer (CE) 是易用型的酶premix,消除背景质粒DNA和PCR残留物,在克隆前无需进
  行PCR产物纯化。 In-Fusion HD Cloning Plus CE kits是PCR生成单一产物时的理想选择。
  2.如果PCR生成多于一条带,可以选择NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up用于PCR纯化。
 
■ 点击图片查看相关资料
In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus
In-Fusion
克隆技术指南
克隆产品选择指南 In-Fusion克隆FAQ In-Fusion克隆Tips In-Fusion
简易操作流程
         
In-Fusion HD Cloning Plus In-Fusion HD Cloning Plus      
In-Fusion
多片段克隆protocol
In-Fusion
引物设计工具
     
 
产品详情请点击:In-Fusion HD Cloning Plus
 
 

页面更新:2019-12-23 16:02:25

慢病毒滴度测定 10分钟快速测定酶试剂盒Takara


慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631280 Lenti-X GoStix Plus(20) 20 Tests ¥5,811
¥4,649
慢病毒滴度测定 10分钟快速测定 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
Clontech 631281 Lenti-X GoStix Plus(50) 50 Tests ¥11,811 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定

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慢病毒滴度测定 10分钟快速测定 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定 慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
 
 
10分钟定量慢病毒滴度测试— Lenti-X GoStix Plus
Lenti-X GoStix Plus提供了一种快速、简便、有效的方法,可以在非常短的时间内检测包装细胞上清液中的慢病毒滴度。这种检测方法包括将20 μl上清液添加到GoStix cassette中,等10分钟以等待表明慢病毒p24蛋白质存在的条带出现。我们早期的GoStix提供的是定性检测结果,而升级后的Lenti-X GoStix Plus的检测结果可以使用智能手机免费app进行分析,可以通过该应用程序比较条带强度来量化慢病毒滴度。
Lenti-X GoStix app的定量检测结果(称为GoStix值或GV)可用于比较不同包装系统所产生的病毒量,其方式类似于ELISA方法,但比ELISA要更简便和快捷得多,可借助参考病毒计算出实际的IFU/ml。访问我们的FAQs页面,了解如何下载和使用智能手机app的相关信息。通过简便快速的慢病毒定量方式,Lenti-X GoStix Plus可以使您的转导实验方案差异更小化,确保每次实验可以达到更为一致的转导效果。
 
■ Overview
· 使用简单的智能手机app在10分钟内量化慢病毒滴度*
· 确定收集慢病毒上清液的理想时机
· 确保实验达到一致的转导效果
*最初的Lenti-X GoStix(Code No. 631243和631244)不能使用智能手机app进行慢病毒定量,并且该产品在逐步淘汰过程中。库存销售完毕后,将不再销售这些产品。如果需要的话,Lenti-X GoStix Plus可以使用与原始Lenti-X GoStix相同的方式进行定性分析。
 
■ 应用
· 确定慢病毒包装反应是成功的
· 比较不同包装系统所产生的病毒量
 
■ 观看视频
Applying lentiviral supernatants
了解如何将样品正确添加至Lenti-X GoStix Plus cassette。
慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
 
Calculating lentiviral titer
了解如何使用智能手机免费app扫描Lenti-X GoStix Plus cassette。
 
■ 实验例
慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
图1. 展示了慢病毒载体滴度测定的常用方法及其相关时间表(以小时为单位)。使用Lenti-X GoStix Plus进行滴度测定仅需要十分钟,其测定时间远远短于传统方法。Lenti-X GoStix Plus:一种基于侧向层析技术的检测方法,用于检测上清液中的慢病毒p24衣壳蛋白质。qRT-PCR:通过qRT-PCR方法定量病毒RNA基因组。ELISA:检测p24衣壳蛋白质的量。PCR:通过qPCR测定整合的DNA前病毒。IFU(FACS):通过FACS分析RFP/GFP阳性细胞测定被感染靶细胞的百分比。IFU(筛选):通过检测转导细胞群中抗药细胞克隆的数量来确定感染单位。
 
慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
图2. p24的产生,GoStix值和IFU/ml值都取决于收获病毒的时间。使用Lenti-X Single Shot按照制造商操作指导制备ZsGreen1慢病毒一式两份,并在指定时间收集病毒。在每个时间点,使用Lenti-X GoStix Plus分析样品的GV值,使用HT1080细胞测定病毒稀释液确定IFU/ml。检测结果除了表明GV(i.e., p24积累)和IFU/ml取决于收获时间之外,这些数据还表明GV和IFU/ml之间的比率随时间的变化而变化。
 
慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
图3. 使用Lenti-X GoStix Plus测定的病毒滴度与不同浓度病毒的转导滴度是有相关性的。使用Lenti-X Packaging Single Shots慢病毒包装系统制备Lenti-X ZsGreen1慢病毒。将制备出的病毒样品进行梯度稀释,添加到Lenti-X GoStix Plus cassettes中,进行密度分析测定滴度。另外,将每个梯度稀释液使用HT1080细胞测定实际的IFU/ml。未知样品的IFU/ml使用GV与IFU/ml的比值进行计算,该比值由使用与未知样品相同的包装系统和在相同的时间收集的参考病毒来确定。然后以使用Lenti-X GoStix Plus测定并计算出的IFU/ml与实际IFU/ml作图。
 
慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
图4. Lenti-X GoStix App通过测定测试(T)和对照(C)条带的相对强度来定量病毒滴度。Lenti-X GoStix App使用智能手机相机确定测试(T)和对照(C)条带的相对强度,并使用比率计算滴度。
 
慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
图5. 使用Lenti-X GoStix Plus测定的病毒滴度与不同包装系统的转导滴度是有相关性的。使用市面上销售的三种不同的慢病毒载体和包装系统制备ZsGreen1慢病毒。将所有制备样品稀释并添加到Lenti-X GoStix Plus cassettes中并进行分析。另外,将每个梯度稀释液使用HT1080细胞测定实际的IFU/ml。使用与未知样品相同的包装系统和在相同的时间收集的参考病毒所确定的GV与IFU/ml的比值,计算每个未知样品的IFU/ml。
 
慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
图6. 比较使用Lenti-X GoStix Plus测定的病毒滴度和基于ELISA方法测定的病毒滴度。Lenti-X GoStix Plus测定的病毒滴度可以与基于ELISA方法测定的病毒滴度以相同的方式使用Lenti-X Packaging Single Shots慢病毒包装系统制备Lenti-X ZsGreen1慢病毒。使用HT1080细胞测定转导细胞的百分比(%转导),然后进行FACS分析。此外,使用Lenti-X p24 Rapid Titer Kit测定病毒p24值,使用Lenti-X GoStix Plus确定GoStix值。以一定范围MOIs的病毒转导HT1080细胞,以其转导效率和等同的ELISA和GoStix值作图。转导后48小时拍摄转导细胞的荧光图像。
 
 
 
产品详情请点击:慢病毒滴度测定 10分钟快速测定
 

页面更新:2020-02-28 09:10:44

慢病毒滴度测定 p24 ELISA酶试剂盒Takara


慢病毒滴度测定 p24 ELISA
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632200 Lenti-X p24 Rapid Titer Kit 96 Rxns ¥7,076
¥5,661
慢病毒滴度测定 p24 ELISA 慢病毒滴度测定 p24 ELISA 慢病毒滴度测定 p24 ELISA

*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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慢病毒滴度测定 p24 ELISA 慢病毒滴度测定 p24 ELISA 慢病毒滴度测定 p24 ELISA 慢病毒滴度测定 p24 ELISA 慢病毒滴度测定 p24 ELISA 慢病毒滴度测定 p24 ELISA 慢病毒滴度测定 p24 ELISA
 
 
p24 ELISA法测定慢病毒滴度
 
· ELISA法快速简便测定病毒滴度
· 收集上清、裂解、结合、洗涤、测定
· p24衣壳蛋白质含量关联病毒滴度
 
■ Lenti-X p24 Rapid Titer Kit通过ELISA法检测p24蛋白质快速测定慢病毒滴度。
    目前用于研究的重组慢病毒均包含主要的结构蛋白质,包括包膜蛋白质、基质蛋白质、病毒核心蛋白质。Gag基因编码病毒衣壳蛋白质(p24)、核衣壳蛋白质(p6和p7)和基质蛋白质(p17)。Clontech Lenti-X p24 Rapid Titer Kit特异性检测p24衣壳蛋白质,p24蛋白质含量与病毒滴度相关联。
慢病毒滴度测定 p24 ELISA
 
    Lenti-X p24 Rapid Titer Kit的操作流程是首先裂解培养基上清液中的慢病毒粒子释放p24蛋白质,然后将裂解样品添加至预包被鼠源p24抗体的检测平板中,洗涤移除未结合的裂解液,采用生物素标记的二抗、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素及显色剂检测特异结合的p24蛋白质。本试剂盒包含p24对照用于制定标准曲线。
慢病毒滴度测定 p24 ELISA
 
产品详情请点击:慢病毒滴度测定 p24 ELISA
 
 

页面更新:2019-12-23 16:11:50

慢病毒滴度测定 qRT-PCR酶试剂盒Takara


慢病毒滴度测定 qRT-PCR
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631235 Lenti-X qRT-PCR Titration Kit 200 Rxns ¥6,010 慢病毒滴度测定 qRT-PCR 慢病毒滴度测定 qRT-PCR 慢病毒滴度测定 qRT-PCR
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慢病毒滴度测定 qRT-PCR 慢病毒滴度测定 qRT-PCR 慢病毒滴度测定 qRT-PCR 慢病毒滴度测定 qRT-PCR 慢病毒滴度测定 qRT-PCR 慢病毒滴度测定 qRT-PCR 慢病毒滴度测定 qRT-PCR
 
 
qRT-PCR法快速测定慢病毒滴度
 
· 采用qRT-PCR和TB Green技术测定病毒滴度
· 只需4 h即可完成慢病毒滴度测定
· 适用于大多数HIV-1慢病毒
 
    Lenti-X qRT-PCR Titration Kit从收获病毒上清液到采用qRT-PCR方法完成病毒滴度的测定仅仅需要4 h,缩短了病毒收获和感染靶细胞的时间间隔,可在一天内完成收获病毒和感染靶细胞的实验过程。准确、快速地测定病毒滴度,可以确保在短时间内采用高质量的病毒感染靶细胞,并且获得可靠稳定的实验结果。利用Lenti-X qRT-PCR Titration Kit测定慢病毒滴度需要先将样品和标准品RNA (试剂盒中提供) 进行梯度稀释,然后分别进行qRT-PCR反应后绘制曲线。通过与标准曲线的Ct值比较,就可以获得样品所包含的病毒拷贝数。
慢病毒滴度测定 qRT-PCR
*本试剂盒提供的引物用于扩增HIV-1基因组毗邻包装信号的保守区域序列,因此可以与Clontech销售的所有慢病毒载体和大多数常用慢病毒载体相兼容。
 
产品详情请点击:慢病毒滴度测定 qRT-PCR
 
 

页面更新:2019-12-23 16:13:51

慢病毒纯化酶试剂盒Takara


慢病毒纯化
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631246 Collection Rack L Each ¥1,469 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化
Clontech 631233 Lenti-X Maxi Purification Kit 2 Preps ¥3,287 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化
Clontech 631234 Lenti-X Maxi Purification Kit 5 Preps ¥5,474 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化
Clontech 631245 Lenti-X Maxi Purification Kit (with Rack) Each ¥6,864 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化
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慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化
 
 
慢病毒纯化
Lenti-X Maxi Purification Kit可从原始的培养上清液中纯化出高纯度和高产量的病毒。其基于重力流柱的实验操作,快速、简单、有效并且优于基于过滤器的纯化系统,后者会损坏易于损伤的慢病毒颗粒,从而降低产量。重力流柱会轻柔固定培养上清液中的病毒颗粒,未被结合的物质则会在洗涤步骤穿透柱子流出。
 
为什么要纯化慢病毒?
慢病毒纯化能去除可能对转导实验产生不利影响的细胞污染物。原始的培养上清液中包含残留的质粒DNA,不明感染和转导抑制剂,细胞和血清蛋白质,以及具有高度免疫原性的病毒蛋白质、核酸和病毒片段。在使用慢病毒作用于敏感靶细胞或体内应用之前,有必要通过纯化慢病毒来去除这些污染物。
 
简便的操作流程。
我们的慢病毒纯化柱是即用型预装柱,只需将10X结合缓冲液加入到上清液样品(9-45 ml)中,然后再将混合物添加至纯化柱即可。样品和缓冲液借助重力穿过树脂,就像是基于纯化柱的质粒制备。在两次洗涤纯化柱的过程中,杂质被去除掉了,纯化后的慢病毒回收在3 ml洗脱缓冲液中。
 
防止假转导。
使用纯化后的慢病毒储液还可以防止假转导,因为在感染的过程中,原始病毒上清液中高水平重组蛋白质会被转移至靶细胞中。而靶细胞假转导会掩盖慢病毒转导所预期的de novo表达。
 
更高的产量和纯度。
温和的纯化程序是维持病毒感染性和产生60-80%优良慢病毒产量的关键所在。基于阴离子交换的膜系统回收率要低得多,通常低于20%。而与基于过滤器的系统相比,Lenti-X纯化柱获得的病毒纯度更高。事实上,纯化后的Lenti-X样品中可检测到的蛋白质含量很低,而基于过滤器纯化的病毒液则含有与病毒共同纯化出来的高水平外源蛋白质。
 
■ Overview
· 与其他纯化技术相比,获得的纯度和产量更高
· 浓缩病毒至多10倍
· 简便而温和的重力流操作流程
· 专用收集架可与试剂盒 (Code No. 631245)一同购买,也可单独购买 (Code No. 631246)
· 实现更高效、更一致的慢病毒转导,收获更健康的靶细胞
· 有效去除转导抑制剂和细胞毒性污染物
 
■ 实验例
慢病毒纯化
图1. 收集架L。组装后,这个收集架可安全牢固地容纳三根色谱柱(例如慢病毒纯化柱)和三根收集管(50 ml锥形管)。
 
慢病毒纯化
图2. 使用Clontech慢病毒纯化试剂盒可获得高产量和高纯度。使用我们的高滴度慢病毒包装系统制备并纯化慢病毒。Panel A. 为了确定病毒产量,通过qRT-PCR(RNA拷贝数)或流式细胞仪/荧光(IFU)测定纯化前和纯化后的慢病毒滴度,展示数据为七组实验的平均值。Panel B. 使用Lenti-X或基于过滤器的纯化系统(Vendor M和Vendor S)制备等量的纯化后慢病毒(1×105 IFU)进行SDS-PAGE和银染。与其它两种基于过滤器系统所制备的样品相比,在相同IFU的情况下Lenti-X样品含有明显更少的污染蛋白质。
 
 
 
产品详情请点击:慢病毒纯化
 
 

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sgRNA体外转录和筛选酶试剂盒Takara


sgRNA体外转录和筛选
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632635 Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit 50 Rxns ¥8,771
¥7,017
sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选
Clontech 632636 Guide-it Complete sgRNA Screening System 50 Rxns ¥10,701
¥8,561
sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选
Clontech 632639 Guide-it sgRNA Screening Kit 50 Rxns ¥4,810
¥3,848
sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选
Clontech 632638 Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit 50 Rxns ¥4,439 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选

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          基因敲除    
          sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选
sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选            
  基因敲入        
          sgRNA体外转录和筛选        
 
 
sgRNA的体外转录和筛选试剂盒
In Vitro Transcription and Screening Kits for sgRNA
我们的Guide-it in vitro transcription and screening kits for sgRNA 包括四个试剂盒,用于CRISPR/Cas9 研究中单链向导RNAs(single guide RNAs ,sgRNAs)的简单制备、清理和评价。每个试剂盒提供足够 50次反应的材料。
· Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635) 被用于通过体外转录制备大量的 sgRNAs。这个试剂盒同样包括Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638), 被用于快速纯化参与体外转录(vitro transcription,IVT) 反应的sgRNA。从这个试剂盒纯化后的 sgRNA 可以直接被用于转染、电穿孔以及体外剪切实验。
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639) 可以在Cas9介导的基因编辑相关研究前,先在体外检测不同sgRNAs的效率,这样就不必浪费时间将无效的sgRNAs转入您的细胞了。使用这个试剂盒,首先通过PCR产生包含sgRNA靶点的模板,随后再与您想测试的sgRNA以及重组Cas9核酸酶结合。Cas9 核酸酶剪切模板的效率可以通过使用琼脂糖凝胶电泳检测。
· Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636) 包含以上提到的全部试剂盒组分,可以被用来合成和检测sgRNAs效率。该试剂盒包含了用于体外转录和纯化sgRNAs,以及检测重组Cas9核酸酶对PCR靶向片段剪切效率的所有试剂。
 
■ 产品特点
· 共有4个试剂盒,可用于Cas9介导的基因编辑研究中sgRNA (single guide RNA)的简单制备、清洁以及效率评价。
· Lenti-X Packaging Single Shots易于产生高滴度病毒。
· 使用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 包括Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit, Code No. 632638)体外转录和纯化大量sgRNA,用于转染或体外筛选。
· 使用Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638) 对IVT 反应后sgRNA的快速纯化,直接用于转染、电穿孔以及体外剪切试验。
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)包含高质量的重组Cas9蛋白质。
· Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636)是Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635) 和 Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)的组合,允许您进行sgRNA制备和对预设靶点体外剪切能力的测试。
 
■ 实验例
sgRNA体外转录和筛选
图1. Guide-it sgRNA In Vitro Transcription and Screening System试剂盒组成和操作流程
 
sgRNA体外转录和筛选
图2. 采用Guide-it试剂盒制备高产量single guide RNA (sgRNA)和重组Cas9蛋白质剪切靶位点检测sgRNA剪切效率操作步骤概要
 
sgRNA体外转录和筛选
图3. Guide-it试剂和同类产品所制备的sgRNA品质比较
采用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的所有sgRNAs均为单一条带,而其他公司同类产品制备的sgRNAs均可观察到杂带,因此Guide-it试剂盒所制备的sgRNAs品质更高。
* 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.
 
sgRNA体外转录和筛选
图4. 以不同基因为靶标制备的sgRNA产量和品质比较
采用Guide-it Complete sgRNA Screening System以多个基因为靶基因制备sgRNA。
Panel A. 将20 μl sgRNA体外转录(IVT)反应液置于37°C孵育4 hr,采用NanoDrop分光光度计检测所制备产生的sgRNA产量。
Panel B. 采用安捷伦生物分析仪分析分析每一个sgRNA IVT反应液,检测sgRNA质量。
 
■ 产品组份
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 50 rxns)
· 1 each Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Components v2 (Code No. 632637; 50 rxns; Not sold separately)
    ○ 50 μl Guide-it Scaffold Template (1 ng/μl)
    ○ 350 μl Guide-it In Vitro Transcription Buffer
    ○ 1 ml RNase Free Water
    ○ 500 μl RNase Free Water
    ○ 150 μl Guide-it T7 Polymerase Mix (33 U/μl)
    ○ 625 μl PrimeSTAR Max Premix (2X)
    ○ 100 μl Recombinant DNase I (RNase-Free) (5 U/μl)
· 1 each Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638; 50 rxns)
    ○ 13 ml RNase Free Water
    ○ 3 ml IVT Binding Buffer
    ○ 50 IVT RNA Clean-Up Spin Columns
    ○ 2 x 6 ml IVT Wash Buffer
    ○ 50 Collection Tubes (2 ml)

Guide-it sgRNA Clean-Up Kit (Code No. 632638; 50 rxns)
· 13 ml RNase Free Water
· 3 ml IVT Binding Buffer
· 50 IVT RNA Clean-Up Spin Columns
· 2 x 6 ml IVT Wash Buffer
· 50 Collection Tubes (2 ml)

Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639; 50 rxns)
· 25 μl Guide-it Recombinant Cas9 Nuclease (500 ng/μl)
· 50 μl 15X Cas9 Reaction Buffer
· 50 μl 15X BSA
· 5 μl Control sgRNA (50 ng/μl)
· 25 μl Control Fragment (20 ng/μl)
· 50 μl Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/μl)
· 1.25 ml 2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP)
· 5 ml RNase Free Water
· 5 ml Extraction Buffer 1
· 0.5 ml Extraction Buffer 2

Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636; 50 rxns)
· Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635)
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)

 
 
 
■ 关联资料
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页面更新:2020-03-05 10:01:24

重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)酶试剂盒Takara


重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μ) 3 × 100 μg ¥6,845 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
Clontech 632641 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μ) 100 μg ¥2,701 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
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Guide-it Recombinant Cas9 (Electroporation Ready)(Code No. 632641/632640)产品名称变更为Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) ,产品内容没有发生变化。(2021年5月)
 
 
          基因敲除    
          重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)            
  基因敲入        
          重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)        
 
 
降低脱靶效应,可用于in vivo基因编辑实验
Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl)
· 适用于电穿孔方法的低甘油含量、高浓度的Cas9蛋白质溶液
· 与质粒导入系统相比较,脱靶效应受到明显抑制
· NLS(核定位信号)有助于实现快速高效突变导入
· 与Guide-it Complete sgRNA Screening System组合使用实现高效率的基因编辑
 
■ 产品说明:
Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)是来源于野生型酿脓链球菌Streptococcus pyogenes,适用于CRISPR/Cas9基因编辑实验的重组Cas9蛋白质溶液。
高浓度Cas9蛋白质溶液中甘油浓度比其他公司低,特别适用于电穿孔导入方法。与借助质粒导入Cas9基因序列方法相比较,避免了残留Cas9基因的持续表达,有效抑制了脱靶效应。
无需经过蛋白质转录·翻译·表达过程,C末端的NLS(核定位信号)可以实现快速有效的突变导入。
Cas9导入细胞首先需要形成Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物,sgRNA制备推荐使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit(Code No. 632635)或者Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636)。
 
■ 实验例:
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
图1. AAVS1或者CXCR4基因同源重组修复(HDR)效率
Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)和修复模板复合物通过电穿孔的方式导入至CD34+造血干细胞中检测同源重组修复(HDR)效率。将包含Hind III酶切位点的修复模板插入至AAVS1 基因中,包含Hind III和BamH I酶切位点的修复模板插入至CXCR4基因中。之后通过对细胞内靶基因进行PCR扩增和限制酶剪切分析,确认突变导入效率。基因编辑效率标注在凝胶阳性孔处。在基因编辑前野生型CXCR4基因已包含1处BamH I位点,因此BamH I剪切CXCR4基因后额外多显示一条条带。
 
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
图2. 不同公司Cas9产品在hiPS細胞中基因敲除效率比较
剪切后电泳条带的强弱可以半定量估计发生基因编辑细胞的百分数。Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)与Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的sgRNA相结合,通过电穿孔的方法导入Cellartis hiPSC-18细胞,采用Guide-it Mutation Detection Kit(Code No. 631448)确认突变导入效率,%即表示基因编辑效率。如图所示,Guide-it Recombinant Cas9(3 μg/μl)在多数靶基因位点均显示有效的基因编辑。
  * 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.
 
 
■ 浓度
3 μg/μl
 
■ 保存
-70℃
(注意)避免反复冻融。首次溶解之后,建议按照使用量分装保存。
 
■ 所需要的其它产品(主要产品)
· 电穿孔装置:
Neon Transfection System(Thermo Fisher Scientific)或者 4-D Nucleofector System(Lonza)
*各装置的导入条件请阅读使用说明书。

· sgRNA制备及筛选
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit(Code No. 632635):用于sgRNA制备及纯化
Guide-it Complete sgRNA Screening System(Code No. 632636):用于确认制备的sgRNA的有效性

 
 
产品详情请点击:重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
 
 
■ 关联资料
相关资料:
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重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
 
 

页面更新:2021-07-20 09:32:43

GMP级别重组Cas9蛋白质酶试剂盒Takara


GMP级别重组Cas9蛋白质
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara T230 Recombinant Cas9 Protein GMP grade 0.6 mg 询价 GMP级别重组Cas9蛋白质 GMP级别重组Cas9蛋白质 GMP级别重组Cas9蛋白质
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■ 制品内容
0.2 ml溶液中含有0.6 mg蛋白质,保存在1 ml冻存管中
 
浓度:3 mg/ml
体积:200 μl
 
■ 制品说明
Recombinant Cas9 Protein GMP grade是一种重组的野生型酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)来源的Cas9蛋白质(SpCas9),其C端携带猿猴病毒40(SV40)核定位信号(NLS:nuclear-localization signal)。 SpCas9与来源于同种细菌的特定基因座(CRISPR:Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)所转录的短RNA(gRNA:向导RNA)形成核糖核蛋白(RNP:Ribonucleoprotein)复合物,这种RNP复合物可以序列特异性切断双链DNA(*参考文献1),被广泛用于包括哺乳动物细胞在内的各种细胞的基因组编辑(*参考文献2,3)。
本Cas9蛋白质溶液成分经过了优化,对哺乳动物细胞具有良好的耐受性,可降低导入哺乳动物细胞时所造成的细胞损伤。将此Cas9蛋白质和gRNA制备的RNP复合物,通过电穿孔、显微注射等方式导入至靶细胞进行敲除实验,经验证该Cas9蛋白质溶液对哺乳动物细胞具有良好的耐受性。
本制品生产符合GMP(药品生产质量管理规范)标准,确保了高品质。
※ 本制品的关联制品Guide-it Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready)(Code No. 632641/632640),其缓冲液成分与本制品相同,经确认可以达到相同的基因组编辑效率。
 
Cas9蛋白质产品定制,请通过当地代理商或者以下联系方式联络我们。
TEL:010-80720985/86
 
■ 保存
-70℃及以下
(注意)避免反复冻融。
※一经开封,其制品品质将不在本公司GMP质量标准保证范围内;在没有开封的情况下,至多可以反复冻融5次,制品性能不会明显下降。
 
■ 分子量
159,665(根据氨基酸序列计算,1380个氨基酸)
 
■ 起源
E. coli expressing recombinant wild-type Streptococcus pyogenes Cas9 nuclease with a C-terminal nuclear localization signal(NLS) artificially synthesized based on Simian virus 40.
 
■ 纯度
HPLC纯度≥90%
 
■ 品质
·本制品符合GMP标准,并在该标准下进行制造和品质管理。
·本制品不含人源或动物源成分。
 
 
 
 
 

页面更新:2020-03-19 08:47:17

SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit酶试剂盒Takara


SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 635014 SMARTer® Human TCR a/b Profiling Kit 12 Rxns ¥12,329 SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit
Clontech 635016 SMARTer® Human TCR a/b Profiling Kit 96 Rxns ¥61,300 SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit
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SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit—
获得TCR-α和TCR-β链V(D)J可变区全长序列
· 完整的 V(D)J序列信息—获得TCR mRNA转录本可变区全长序列
· TCR-alpha 和 TCR-beta—分析TCR2个亚基的多样性,无论是同一实验还是单独实验
· 起始样品灵活—可以10 ng-3 μg 外周血RNA或50-10,000个纯化T细胞起始
· 无需多重PCR—每次反应利用一对引物扩增相应的TCR亚基
· Illumina-ready 测序文库—无需接头连接即可添加Illumina接头和index序列
· 灵敏度高—即使是测序深度很低的情况下也可检测低丰度TCR序列
· 出色的重复性—在不同起始量情况下可以获得一致性很好的结果
 
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit给需要开展T细胞受体(TCR)NGS分析的研究者提供了一种新的强大的解决方案。试剂盒采用类似于5’RACE的方法,可以人血液RNA(10 ng-3 μg)或完整淋巴细胞(50-10,000 个纯化T细胞)起始,捕获TCR V(D)J完整可变区域。顾名思义,本试剂可以在同一实验或单独实验中获得TCR-alpha和TCR-beta链多样性数据。与采用多重PCR方法研究TCR多样性不同,每轮文库扩增只使用针对不同TCR亚基的一个引物对扩增。构建的文库添加了index序列可用于Illumina®测序平台测序。
试剂采用了SMART (Switching Mechanism at 5’ End of RNA Template)技术和LNA技术,可以无偏扩增TCR mRNA序列,并具有很高的灵敏度。
 
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit
图1. SMARTer 法文库构建流程及TCR多样性分析PCR策略
 
 
Technote:
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SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit SMART human TCR-Seq:
点击图片下载
SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit
 
产品详情请点击:SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit
 
 

页面更新:2020-07-08 14:20:28

小鼠T细胞受体分析酶试剂盒Takara


小鼠T细胞受体分析
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634402 SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit 12 Rxns ¥12,665 小鼠T细胞受体分析 小鼠T细胞受体分析 小鼠T细胞受体分析
Clontech 634403 SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit 48 Rxns ¥39,921 小鼠T细胞受体分析 小鼠T细胞受体分析 小鼠T细胞受体分析
Clontech 634404 SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit 96 Rxns ¥63,453 小鼠T细胞受体分析 小鼠T细胞受体分析 小鼠T细胞受体分析
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SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit—
获得TCR-α和β链 V(D)J可变区全长序列
· 完整的V(D)J序列信息—获得TCR mRNA转录本可变区的全长序列
· TCR-α和β链—同时或单独分析TCR两个亚基的多样性
· 无需多重PCR—每次反应利用一对引物扩增相应的TCR亚基
· Illumina-ready测序文库—无需接头连接即可添加Illumina接头和index序列
 
SMARTer Mouse TCR a/b Profiling Kit 为那些寻求对T细胞受体(TCR)库进行NGS分析的研究者提供了一种强大的新的解决方案。试剂基于5’-RACE 方法可以捕获TCR转录本完整V(D)J 可变区,可以低至10 ng 至500 ng的来源于小鼠脾脏、胸腺或PBMCs的总RNA起始,也可以1,000 至 10,000个纯化的T细胞起始。顾名思义,本试剂可以在同一实验或单独实验中获得α和β链链多样性数据。
与采用多重PCR方法研究TCR多样性不同,每轮文库扩增只使用针对不同TCR亚基的一对引物扩增,提高了效率,减少了引物二聚体形成的可能性。基于多重PCR的分析方法,众所周知容易形成与引物相关的序列特异性偏差;这些偏差在我们基于RACE的方法中不会存在,因为所有的可变区都由相同的恒定区序列引发。采用本试剂~4 h即可构建indexed文库用于Illumina平台测序。
试剂采用了SMART (Switching Mechanism at 5’ End of RNA Template) 技术和LNA技术,可以无偏扩增TCR mRNA序列,并具有很高的灵敏度。
 
小鼠T细胞受体分析
图1. SMARTer 法文库构建流程及TCR多样性分析PCR策略
 
 
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小鼠T细胞受体分析    
 
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页面更新:2019-12-24 14:22:26

单细胞水平人T细胞受体分析酶试剂盒Takara


单细胞水平人T细胞受体分析
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 634431 SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit 96 Rxns ¥48,426 单细胞水平人T细胞受体分析 单细胞水平人T细胞受体分析 单细胞水平人T细胞受体分析
Clontech 634432 SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit 480 Rxns ¥149,865 单细胞水平人T细胞受体分析 单细胞水平人T细胞受体分析 单细胞水平人T细胞受体分析
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SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit—
阐明单细胞中T细胞受体Alpha-Beta 链配对
· 工作流程灵活—可以利用FACS(流式细胞术)或手动分选细胞构建 Illumina测序文库
· 易于使用—优化的index允许将96个细胞混合制成12个文库,
   并可以进一步混合在一个flow-cell lane中测序
· 灵敏度高—基于RACE方法可以检测低丰度TCR变异体
· 特异性好—完整reads,大部分reads可以比对到目标区域,提供准确链配对信息
 
尽管批量T细胞测序有助于进一步了解T细胞受体库(TCR)多样性,但是批量测序不能确定T细胞群内特定的alpha-beta 受体链配对信息。由于特定的TCR alpha-beta链配对介导抗原特异性,获得配对信息对于深入了解抗原识别,靶向免疫治疗TCR的有效设计至关重要,也有助于确立T细胞群的祖先关系。单个T细胞测序可以确定特定细胞的配对信息,但是价格可能非常昂贵并涉及复杂的分析,因为大部分方法需要对大量的细胞测序。
 
使用SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit可以解决这些问题,在SMART cDNA Synthesis中通过采用一系列indexed oligo可以将手动或FACS分选的96个样品制成12个测序pool,并且这12个pool可以进一步混合,这样所有的96个样品可以在一个flow-cell lane 中测序。与用于大量样品测序的SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit 一样,试剂采用了SMART cDNA synthesis和RACE方法,通过进一步的TCR基因特异性PCR完整捕获和扩增TCR-alpha 和TCR-beta可变区构建Illumina测序文库,为TCR测序提供了一种高灵敏度的方法。
 
如果您需要软件对采用本试剂盒构建文库测序获得的数据进行demultiplex分析,请登录SMARTer Human scTCR Demultiplexer。
 
单细胞水平人T细胞受体分析
图1. 在单细胞水平进行T细胞研究的优势
 
Panel A. T细胞受体alpha链 (TCR-α) 和beta链组成示意图。 Panel B. 示意了难以从批量细胞测序数据中获得alpha链 (TCR-α) 和beta链配对信息。针对稀有克隆型可以分析部分细胞中的配对信息(橙色克隆型),但是对于高表达的克隆型(TCRA V2J1, TCRA V2J2, TCRB V3D1J1, TCRB V2D1J2)可能有4种配对组合。
 
单细胞水平人T细胞受体分析
图2. SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit技术流程及pooling策略
 
Panel A. 第一链cDNA合成由dT引物(RT引物)起始,MMLV型逆转录酶(RT)会在mRNA 5’端添加几个非模板核苷酸。SMART-Seq Indexed Oligos与这几个非模板核苷酸互补结合作为模板,通过RT在第一链cDNA末端添加额外核苷酸序列(也就是模板转换步骤)。试剂盒中提供8种不同的SMART-Seq Indexed Oligo,每一个SMART-Seq Indexed Oligo中内嵌唯一的六碱基index作为细胞barcode,用于下游pooling细胞的识别。通过RT添加到cDNA末端的额外序列-被称为“SMART sequence”-作为接下来几轮PCR扩增的引物结合位点,确保只有来自于全长cDNA的序列才能被扩增。经过pool(Panel B所示)和纯化后,通过连续两轮基因特异性PCR扩增来自于TCR-α 和/或 TCR-β可变区的cDNA序列。第一轮PCR采用扩增过的双链cDNA为模板,正向引物与SMART sequence互补,同时包含Illumina Read 2序列(TCR Primer 1),反向引物与TCR-α和TCR-β的恒定区(即不变区)互补(TCR a/b Human Primer 1)。第二轮PCR以第一轮PCR产物为模板,采用的正向引物与第一轮PCR添加的Read 2 序列互补。反向引物与恒定区结合,位于PCR1 primers内侧 (TCR a/b Human Primer 2 Reverse HT Index),扩增TCR-α和TCR-β cDNA的完整可变区及部分恒定区。正向引物和反向引物包含适用于Illumina测序平台的接头序列和index,可以将多达96个样品混合用于在一个flow-cell lane中测序。Panel B. 按列混合样品,这样每个pool中包含8个细胞,每个细胞带有不同index的SMART-Seq Indexed Oligo 。在PCR 2中通过正向和反向HT indexes的不同组合使用,可以将多样品进一步混合在一个flow-cell lane 中测序(更多信息参见User Manual)。
 
单细胞水平人T细胞受体分析
图3. 96孔板中混合细胞群的分析
 
Panel A. 基于鉴别每孔的克隆型确定细胞种类。遗漏的7个细胞没能通过对高于阈值的TCR-α 或TCR-β的reads数分析确定克隆型。Panel B. 配对信息分析。分析获得了平板中34个细胞的TCR-αβ配对克隆型。Panel C. 以百分比展示了分析细胞的alpha,beta,或alpha-beta配对信息。遗漏的细胞没有包括在分析数据中。
 
 
Technote:
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单细胞水平人T细胞受体分析   SMART human scTCR-seq:
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单细胞水平人T细胞受体分析
 
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视频资料:在单细胞水平对人T细胞受体库分析的解决方案

Takara Bio USA公司Dr. Ankita Das和Dr. Sarah Taylor探讨可以实现分析每个细胞中的TCRα和TCRβ链的可变区全长序列,构建测序文库的SMARTer Human scTCR a/b Profiling Kit。
 

页面更新:2019-12-24 14:23:48

皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)酶试剂盒Takara


皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 635005 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit – Pico Input Mammalian 12 Rxns ¥15,684 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
Clontech 635006 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit – Pico Input Mammalian 48 Rxns ¥46,033 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
Clontech 635007 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit – Pico Input Mammalian 96 Rxns ¥63,435 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
Clontech 634411 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian 12 Rxns ¥12,881 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
Clontech 634412 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian 48 Rxns ¥43,794 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
Clontech 634413 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian 96 Rxns ¥57,613 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
Clontech 634414 SMARTer® Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian 192 Rxns ¥103,664 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
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SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input
Mammalian以皮克级总RNA构建Illumina链特性RNA-seq文库
· 皮克级样品起始—可以250 pg-10 ng人,小鼠或大鼠总RNA起始
· 用途广泛—可以不同品质RNA(包括FFPE/LCM样品及游离RNA)制备文库,获得高重复再现数据
· 性能提升-不增加PhiX也可获得较高的簇通过过滤百分比(FP%),识别更多转录本,重复更少
· 保留链来源信息—转录本链来源信息识别准确度高
· 快速,一体化流程—整体流程只需~6 h ,改良了buffer配方,缩短了文库纯化时间
· 无缝衔接Illumina测序—直接制备多达96种index的 Illumina®-ready文库
 
SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian设计用于从皮克级总RNA(250 pg–10 ng)中高效制备Illumina测序文库。本试剂中采用的技术适用于高品质,部分降解及低品质RNA(如来自于FFPE或LCM样品)。本试剂是一体化操作流程,保留了链来源信息,并且不需要下游文库制备,在反转录和PCR扩增过程中就可以添加indexes和接头。升级产品与原有SMARTer 皮克级产品相比,提升了在所有Illumina测序平台的测序性能,并且文库纯化操作更加方便。
核糖体RNA在总RNA中占有很高的比重(~90%)。在制备文库前从总RNA中去除掉这些大量的RNA,有利于降低测序成本,提高统计数据的比对比率。但是在以微量样品起始时,如果一开始就从总RNA中去除rRNA,会造成纯化后的起始样品太少而不能制备高品质测序文库,本试剂采用专有的特异针对哺乳动物rRNA和部分线粒体RNA的探针去除核糖体cDNA(来源于核糖体RNA的cDNA片段)。采用本试剂制备的文库与前代试剂制备的文库接头配置不同,即使是使用基于双通道SBS技术的Illumina平台如NextSeq®, MiniSeq, 和 HiSeq® 3000/4000测序时,不需要添加大量PhiX也可以获得高比例的簇通过过滤百分比(%PF)。每个run可以获得更多的生物学相关测序reads,这又反过来减少了测序成本。采用Pico v2 Kit同样可以获得更多的特异转录本,更低的rRNA、mtRNA比对率和重复率。此外,Pico v2 Kit包含了一种新的PCR buffer,提高了文库纯化效率。
试剂盒提供12,48,96和192次反应规格。高通量版本试剂 (Code No. 634413,634414) 包含12种反向引物,8种正向引物,最多可以构建96种indexes文库。包括文库构建及纯化的整体流程只需~6 h。
 
不同样品起始量解决方案:
· 10-100 ng 总RNA, 推荐使用 SMARTer Stranded Total RNA Sample Prep Kit – Low Input Mammalian
· 100 ng-1 μg总RNA, 推荐使用SMARTer Stranded Total RNA Sample Prep Kit – HI Mammalian
 
皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
图1. SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian技术流程
 
皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
图2. SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian提高了通过过滤百分比(FP%)。如图所示,分别采用Pico v1 或Pico v2制备文库并使用NextSeq 500 或 MiniSeq平台测序。图中,蓝色图框表示未过滤(原始)reads的簇密度分布,绿色图框表示通过过滤reads的簇密度分布。 图中显示了通过过滤的reads数(以百万计)和每个run的%PF。
 
皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
图3. 新的SeqAmp CB PCR buffer利于磁珠-沉淀物形成。Pico v2中的PCR buffer经过重新设计可以更快、更紧密的形成磁珠-沉淀物。经过磁力分离后,在新的SeqAmp CB buffer(右)中的沉淀物比原来PCR buffer(左)中的沉淀物更紧密。紧密的沉淀物比松散的沉淀物更容易干燥,易于重悬。
 
皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
图4. SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 – Pico Input Mammalian 提升了灵敏度和重复再现性。上图为以1 ng和10 ng人肺FFPE来源的总RNA起始,分别采用Pico v1和Pico v2构建文库,NextSeq 500测序数据。Panel A. 以1 ng和10 ng样品起始,分别采用Pico v1和v2构建文库的测序数据。Panel B. 不同样品起始量之间,转录本表达水平的比较分析。
 
 
Technote:
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皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina) SMARTer Stranded RNA-Seq PICO:
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皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
       
FFPE样本的RNA-Seq文库解决方案 点击图片下载 皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
 
产品详情请点击:皮克级链特异 Total RNA-Seq (for Illumina)
 
 

页面更新:2020-04-10 13:16:48

ThruPLEX® DNA-Seq Kit酶试剂盒Takara


ThruPLEX® DNA-Seq Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech R400674 ThruPLEX® DNA-Seq Kit 24 Rxns ¥6,194 ThruPLEX® DNA-Seq Kit ThruPLEX® DNA-Seq Kit ThruPLEX® DNA-Seq Kit
Clontech R400675 ThruPLEX® DNA-Seq Kit 48 Rxns ¥11,951 ThruPLEX® DNA-Seq Kit ThruPLEX® DNA-Seq Kit ThruPLEX® DNA-Seq Kit
Clontech R400676 ThruPLEX® DNA-Seq Kit 96 Rxns ¥21,884 ThruPLEX® DNA-Seq Kit ThruPLEX® DNA-Seq Kit ThruPLEX® DNA-Seq Kit
Clontech R400677 ThruPLEX® DNA-Seq Kit 480 Rxns ¥96,985 ThruPLEX® DNA-Seq Kit ThruPLEX® DNA-Seq Kit ThruPLEX® DNA-Seq Kit
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ThruPLEX® DNA-Seq Kit 延伸 ThruPLEX® DNA-Seq Kit ThruPLEX® DNA-Seq Kit ThruPLEX® DNA-Seq Kit
 
  ThruPLEX® DNA-Seq Kit
 
 
通用性的DNA建库试剂
ThruPLEX® DNA-Seq Kit
· 高灵敏度的性能 :以50 pg到50 ng DNA起始生成测序文库
· 快速简单的工作流程 :1个反应管、2小时、3步的简单操作过程,无需转移操作
· 兼容主流的靶标富集平台:如Agilent SureSelect,Roche Nimblegen SeqCap EZ
   和IDT xGen Lockdown probes
 
■ 产品说明:
ThruPLEX DNA-Seq Kit 基于ThruPLEX技术,可以低至50 pg的DNA起始构建DNA文库,在提高灵敏度的同时可以构建多达384种index引物文库。本试剂适用于多种样品来源的片段化双链DNA(dsDNA)样品,基因组DNA或体液样品如游离DNA(cfDNA),FFPE样品来源DNA和cDNA。
ThruPLEX DNA-Seq Kit不包含index。兼容的 Index如下所述,需要单独购买。
ThruPLEX DNA-Seq Kit整体流程可在单管或孔中进行,大约两小时内即可完成,无需纯化或样品转移步骤。该试剂盒可用于DNA-seq,RNA-seq或ChIP-seq,并且可以兼容主流平台实现强有力的目标区域富集。
 
DNA HT dual index kits
DNA HT dual index kits是与 ThruPLEX或 PicoPLEX文库制备试剂盒搭配使用,用以构建Illumina测序文库的index引物试剂盒。这些试剂盒包含Illumina Nextera® XT v2 index序列对应的index引物,最多可提供384种不同的双端index,用于样本混合测序时的区分。其中index引物预先分装在4个不同条形码标记的index微孔板中,每个微孔板可提供不同的96种index组合(Code No.R400660-R400663),index微孔板(96N Sets A-D)的每个孔提供的量足够进行一次测序反应;另一种是一套中有24个单独的反应管,每个反应管中包含不同的双端index组合(Code No.R400664),且每个反应管(24N)提供的量足够进行两次测序反应。
 
DNA unique dual index kits
DNA unique dual index kits是与 ThruPLEX或 PicoPLEX文库制备试剂盒搭配使用,用以构建Illumina测序文库的index引物试剂盒。这些试剂盒包含“IDT for Illumina UD”对应的index引物,最多可提供96种不同双端index,用于样本混合测序时的区分。index引物预先分装在不同的4组各24个单独的管中,其中每组可提供24种不同index引物组合(Code No.R400665-R400668)。每个index引物管(24U Sets A-D)提供的量足够进行两次测序反应。
 
DNA single index kits
DNA single index kits是与 ThruPLEX或 PicoPLEX文库制备试剂盒搭配使用,用以构建Illumina测序文库的index引物试剂盒。这些试剂盒包含与“TruSeq LT set A”序列对应的index引物,可提供24种单端index,用于样本混合测序时的区分。index引物预先分装在不同的2组各12个单独的管中,其中每组可提供12种不同index引物组合(Code No.R400695和R400697)。每个index引物管(12U Sets A-B)提供的量足够进行8次测序反应。
 
 
Technote点击查看:
· ThruPLEX® DNA-Seq Kit DNA-seq from FFPE DNA samples
· ThruPLEX® DNA-Seq Kit Low cell number ChIP-seq
· ThruPLEX® DNA-Seq Kit Shearing low-volume DNA samples
· ThruPLEX® DNA-Seq Kit Low-input whole-exome sequencing
 
 
ChIP-seq测序文库解决方案 点击图片下载
ThruPLEX® DNA-Seq Kit

 

FFPE样本的DNA-Seq文库解决方案 点击图片下载
ThruPLEX® DNA-Seq Kit

 

 
产品详情请点击:ThruPLEX® DNA-Seq Kit
 
 

 

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MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3酶试剂盒Takara


MightyAmp DNA Polymerase Ver.3
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara R076A MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3 250 U ¥1,102
¥937
MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3 MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3 MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3
Takara R076B(A×4) MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3 1,000 U ¥3,955 MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3 MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3 MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3

*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3 MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3 MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3 MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3
 
 
■ 制品内容(50 μl反应,200 次量)
MightyAmp DNA Polymerase Ver.3(1.25 U/μl)
200 μl
2×MightyAmp Buffer Ver.3(Mg2+,dNTP plus)* 1 ml × 5
10×Additive for High Specificity 500 μl × 2
 
*:Mg2+浓度是4 mM (2×),dNTP浓度是各600 μM (2×)。
 
Limited Use Label License: [M90]
 
■ 制品说明
MightyAmp DNA Polymerase是追求高反应性能开发的PCR酶,由于本酶具有很强的扩增性能,对于使用普通PCR酶难以扩增的样品,也显示出很好的扩增能力,如含有大量PCR阻害物的生体粗提样品。
MightyAmp DNA Polymerase Ver.3是对MightyAmp DNA Polymerase进行了改良,与Ver.2相比,这种改良后的PCR酶和Buffer组合使用,可进一步增强对PCR阻害物的抵抗性。此外,也提高了血液、动植物组织等生物体样品直接加入到反应液中的Direct PCR的反应性能。
无论是PCR阻害物含量较多的粗提样品,还是GC Rich、AT Rich的模板均可在宽广的模板范围内进行有效扩增,并根据需要将试剂盒中附带的10×Additive for High Specificity添加到PCR反应液中可提高PCR扩增的特异性和检测灵敏度。
本酶是使用单克隆抗体的Hot Start型PCR扩增用DNA聚合酶,98℃高温加热前,抗体与酶结合,有效抑制聚合酶活性。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 注意事项:
1. 先使用不含10×Additive for High Specificity的反应体系进行PCR扩增。想进一步提高扩增特异性和检测灵敏度时再添加10×Additive for High Specificity进行PCR扩增。
2. 动物组织进行Direct PCR的扩增产物电泳时,建议在Loading Buffer中添加Proteinase K。
 
■ 关联资料:
MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3   MightyAmp™ DNA Polymerase Ver.3
请点击查阅   请点击查阅
 
 

页面更新:2019-06-10 14:56:31

microRNA定量(qRT-PCR)酶试剂盒Takara


microRNA定量(qRT-PCR)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 638315 Mir-X miRNA First-Strand Synthesis Kit 60 Rxns ¥4,820
¥3,615
microRNA定量(qRT-PCR) microRNA定量(qRT-PCR) microRNA定量(qRT-PCR)
Clontech 638313 Mir-X miRNA First-Strand Synthesis Kit 20 Rxns ¥3,127
买一赠一
microRNA定量(qRT-PCR) microRNA定量(qRT-PCR) microRNA定量(qRT-PCR)
Clontech 638314 Mir-X miRNA qRT-PCR TB Green® Kit 20 Rxns RT;200 Rxns qPCR ¥4,867
¥3,650
microRNA定量(qRT-PCR) microRNA定量(qRT-PCR) microRNA定量(qRT-PCR)
Clontech 638316 Mir-X miRNA qRT-PCR TB Green® Kit 60 Rxns RT;600 Rxns qPCR ¥10,192
¥7,644
microRNA定量(qRT-PCR) microRNA定量(qRT-PCR) microRNA定量(qRT-PCR)

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microRNA定量(qRT-PCR) microRNA定量(qRT-PCR)   microRNA定量(qRT-PCR) microRNA定量(qRT-PCR)
 
microRNA定量(qRT-PCR)  
 
[通知]
Takara嵌合法Real Time PCR(qPCR)产品的名称从2017年12月下旬开始,将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化,请继续放心使用。
产品名称将随新lot的产品逐步变更,产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更,望知悉!
  →详情请点击此处
 
microRNA是一类被广泛关注的非编码RNA,长度为22 nt左右,对植物和动物的基因表达有着非常重要的调控作用。Clontech提供用于microRNA定量检测的Mir-X 系列产品,性价比较高,能够满足大部分研究人员的实验需要。
 
产品特点
· 通用的加A尾反转录原理,一次反转样品中的不同microRNA
· 简单的一步法cDNA合成系统,无需复杂的操作
· 可使用同一RNA模板进行不同microRNA的定量检测,节省样品用量
· 试剂盒附带通用的PCR下游引物,只需设计特异性的上游引物即可
· 可对低至50 copies的microRNA进行检测,灵敏度高
· 产品有独立的反转录试剂盒和反转定量二合一的试剂盒可供选择,灵活性高
 
产品详情请点击:microRNA定量(qRT-PCR)
 
 
 

页面更新:2022-07-29 15:21:16

ICELL8® cx Single-Cell System酶试剂盒Takara


ICELL8® cx Single-Cell System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 640188 ICELL8® cx Single-Cell System 1 System 询价 ICELL8® cx  Single-Cell System ICELL8® cx  Single-Cell System ICELL8® cx  Single-Cell System
Clontech 650002 ICELL8® cx CellSelect® Software Each 询价 ICELL8® cx  Single-Cell System ICELL8® cx  Single-Cell System ICELL8® cx  Single-Cell System
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高通量、自动化、开放的单细胞分选系统
ICELL8® cx Single-Cell System
· 可在5,184-纳米孔芯片上自动完成单细胞分选过程
· 大口径喷嘴实现无细胞大小偏好的单细胞分选
· 荧光成像技术可区分单细胞、多细胞微孔,并对活细胞/死细胞
   进行分析
· 平台开放,拥有多款SMARTer NGS应用,支持定制应用
ICELL8® cx  Single-Cell System
 
ICELL8 cx Single-Cell System是一款先进的集成自动化平台,它将成像功能与分注功能进行组合,可直接完成5,184-纳米孔芯片分离单细胞的全过程。该系统装配了大口径分配器,可以完成无细胞大小偏好的单细胞分离。成像功能可以对单细胞与多细胞进行区分。此外,通过使用荧光技术并结合细胞染料,还可以完成对活细胞/死细胞的分析。
完整的ICELL8 cx系统还包括ICELL8 cx Thermal Cycler、内置成像系统和ICELL8 cx CellSelect分析软件。只有通过该分析软件选择的微孔,才能进行后续操作,去除了来自多细胞孔与空细胞孔的噪声。开放、高通量的ICELL8 cx单细胞自动化系统拥有多种预验证的SMARTer NGS应用,也可以根据用户自身选择灵活地开发应用。
 
ICELL8® cx  Single-Cell System ICELL8® cx  Single-Cell System ICELL8® cx  Single-Cell System
 
应用领域
· SMART-Seq全长转录组分析
· ATAC-Seq
· T细胞受体分析和5’端差异表达
· 3’端差异表达
 
文献案例
产品文献案例详情请点击:查阅文献
 
ICELL8® cx  Single-Cell System
ICELL8 cx Single-Cell System
 
ICELL8® cx  Single-Cell System ICELL8® cx  Single-Cell System
芯片分注
芯片成像
 
■ ICELL8 cx规格
  类别   规格
  电源   120VAC/60 Hz线路:4条120V,15或20A电路
  220-240VAC/50 Hz线路:4个10A插座
  100VAC/50-60 Hz线路:4个15A插座
  大小   计算机:18 cm×37 cm×44 cm
  ICELL8 cx组件:107 cm×56 cm×57 cm
  工作台空间   ICELL8 cx组件和计算机所需工作台空间:180 cm×75 cm×60 cm
  Note:工作台必须能够承受91 kg的重量
  重量   91 kg
 
 
产品详情请点击:ICELL8® cx  Single-Cell System
 
更多相关制品信息请点击:ICELL8® cx  Single-Cell System
 
 
■ 视频资料
 

页面更新:2021-01-27 10:08:20

自动化高通量的单细胞差异表达分析酶试剂盒Takara


自动化高通量的单细胞差异表达分析
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 640199 ICELL8® cx 3’DE Chip 1 Chip 询价 自动化高通量的单细胞差异表达分析 自动化高通量的单细胞差异表达分析 自动化高通量的单细胞差异表达分析
Clontech 640167 ICELL8 3’DE Reagent Kit 1 Rxn 询价 自动化高通量的单细胞差异表达分析 自动化高通量的单细胞差异表达分析 自动化高通量的单细胞差异表达分析
Clontech 640212 ICELL8® Collection Kit – L 1 Pkg 询价 自动化高通量的单细胞差异表达分析 自动化高通量的单细胞差异表达分析 自动化高通量的单细胞差异表达分析
Clontech 640197 ICELL8® cx Loading Kit 1 Pkg 询价 自动化高通量的单细胞差异表达分析 自动化高通量的单细胞差异表达分析 自动化高通量的单细胞差异表达分析
Clontech 640192 ICELL8® 384-Well Source Plate and Seal (5/pack) Each 询价 自动化高通量的单细胞差异表达分析 自动化高通量的单细胞差异表达分析 自动化高通量的单细胞差异表达分析
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高通量、高品质、更经济的单细胞3’端转录组分析解决方案
· 高通量单细胞分析:同时生成上千单细胞测序数据
· 样品灵活性高:一次实验可同时对8个不同样品进行单细胞分析
· mRNA 3’端捕获测序:mRNA 3’端捕获测序差异表达分析所需reads数更少
· 减少样品处理操作:自动完成文库构建前的细胞分离、挑选及混样,偏差更小
· 兼容illumina平台:构建的文库支持illumina平台测序
 
■ 产品说明
通过结合Takara Bio单细胞RNA-Seq文库构建的技术优势及ICELL8 cx Single-Cell System(Code No. 640188) 单细胞分选的优良性能,ICELL8 3’DE Reagent Kit 实验流程能够一次制备最多八个不同样品的I llumina测序文库,可高通量地分析单细胞基因表达差异。
样品细胞经过染色、稀释,使用ICELL8 cx单细胞分选系统将其分注到微孔芯片ICELL8 cx 3’DE Chip(Code No. 640199)中。微孔芯片表面排布5,184个纳升微孔,并预先固相化了Barcodes。通过单细胞分选系统的成像功能和配套的CellSelect软件,含有活单细胞的微孔将被挑选出来,并添加RT-PCR试剂,在芯片中完成cDNA合成与扩增。从芯片中将DNA产物混合收集,使用基于转座酶的方法富集mRNA 3’ 端来源的cDNA,随后通过PCR扩增整合入Illumina index序列。
通过每个微孔特异的Barcode序列,能从最终的文库测序数据中回溯每个活的单细胞来源的数据,并可基于mRNA 3’ 端计数 ,进行差异基因表达分析。配合ICELL8 cx单细胞分选系统,ICELL8 3’DE Reagent Kit为高通量单细胞差异表达分析提供了高效、经济的解决方案,一次实验即可从上千个活的单细胞获得高质量3’ 端测序数据。
 
■ 产品组分
完整的工作流程需要下列Takara Bio产品。同时,请参考对应的User Manual得到一份完整的试剂耗材清单:
用于ICELL8 cx Single-Cell System
· ICELL8 cx 3’DE Chip (Code No. 640199)
· ICELL8 3’DE Reagent Kit(Code No. 640167)
· ICELL8 Collection Kit-L (Code No. 640212)
· ICELL8 cx Loading Kit (Code No. 640197)
· ICELL8 384-Well Source Plate and Seal (5/pack) (Code No. 640192)
User Manual:ICELL8® cx 3’DE User Manual
 
自动化高通量的单细胞差异表达分析
图1 ICELL8 3’DE Reagent Kit工作流程
 
自动化高通量的单细胞差异表达分析
图2 选取iPS细胞分化至心肌细胞过程中的四个时间点(Day1/3/9/21),用 ICELL8 Single-Cell System进行单细胞高通量3’末端转录组分析,共获得约1,000个活的单细胞,平均每个细胞超过120,000 reads,测得1,200个基因(最大为750,000 reads,测得4,500个基因);tSNE分析结果可以看出不同分化阶段的细胞存在明显的基因表达差异。
 
自动化高通量的单细胞差异表达分析
图3 细胞特异性基因表达变化 随着分化的进行,iPS细胞特异性基因的表达数量减少,而心肌细胞特异性基因的表达数量增加。
 
Technote:
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自动化高通量的单细胞差异表达分析
 
参考文献
1. Ren, Z. et al. Single-Cell Reconstruction of Progression Trajectory Reveals Intervention Principles in Pathological Cardiac Hypertrophy. Circulation, 141, 1704–1719 (2020)
2. Wang, L. et al. Single-cell reconstruction of the adult human heart during heart failure and recovery reveals the cellular landscape underlying cardiac function. Nat. Cell Biol. 22, 108–119 (2020)
3. Krieger, T. G., et al. Modeling Glioblastoma Invasion Using Human Brain Organoids and Single-Cell Transcriptomics. Neuro-Oncology, 22, 1138–1149 (2020)
4. Yekelchyk, M., Guenther, S., Preussner, J. & Braun, T. Mono- and multi-nucleated ventricular cardiomyocytes constitute a transcriptionally homogenous cell population. Basic Res. Cardiol. 114, 36 (2019)
 
产品详情请点击:自动化高通量的单细胞差异表达分析
 
 
 

页面更新:2021-02-02 13:31:22

自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析酶试剂盒Takara


自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 640200 ICELL8® cx TCR Chip 1 Chip 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640179 SMARTer® ICELL8® Human TCR a/b Profiling – Indexing Primer Set 1 Chip 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640180 SMARTer® ICELL8® Human TCR a/b Profiling – Indexing Primer Set 5 Chips 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640181 SMARTer® ICELL8® Human TCR a/b Profiling – Indexing Primer Set 10 Chips 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640182 SMARTer® ICELL8® Human TCR a/b Profiling Reagent Kit Each 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640212 ICELL8® Collection Kit – L 1 Pkg 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640197 ICELL8® cx Loading Kit 1 Pkg 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640192 ICELL8® 384-Well Source Plate and Seal (5/pack) Each 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
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高通量地阐明单细胞中T细胞受体Alpha-Beta链多样性
· 灵敏性更高:基于RACE技术保证低丰度TCR变体的检出
· 特异性更强:获得全长reads,目的reads占比高,更正确的配对信息
· 5’端捕获测序差异表达分析:通过比对5’末端信息,产生所有转录本差异表达数据
· 灵活、高通量的单细胞分析:单次实验同时分析8个样品,生成上千单细胞的测序数据
 
■ 应用领域
· 人单细胞TCR库分析(TCRα和TCRβ克隆型)
· 5’端差异表达分析
 
■ 产品说明
Takara Bio高通量TCR免疫组库解决方案应用SMART技术(Switching Mechanism at 5’End of RNA Template)和基于5’RACE的方法,用于捕获由ICELL8 cx Single-Cell System(Code No. 640188)分选得到的上千“活的单细胞”的TCR转录本完整V(D)J可变区域。产生的文库可同时提供α链和β链的多样性信息。
实验流程中,cDNA扩增阶段整合了Illumina特异的接头序列,产生的文库带有index接头,可直接用于Illumina平台测序。Takara Bio高通量TCR免疫组库解决方案也可以同时支持5’末端差异表达分析。
ICELL8 cx单细胞分选系统上,与单个T细胞一起被分注到TCR芯片(Code No. 640200)上的还有阳性对照和阴性对照。每个TCR芯片含有5,184个纳升级微孔,预制了1,728种Barcode,每个Barcode在芯片上被预制3次。使用CellSelect软件鉴定出具有“活的单细胞”微孔后,SMART RT-PCR试剂将被分注到含“活单细胞”的微孔中,用于后续分析。连接了Barcode序列的cDNA继续在微孔芯片上完成PCR扩增。接下来,从芯片中将连接好Barcode序列的扩增产物集中收集,并进行纯化。纯化后的cDNA作为第一轮TCR特异性PCR的模板,而第一轮TCR特异性PCR的产物作为第二轮TCR特异性PCR的模板,并整合Illumina index序列引物。
 
■ 产品组分
完整的工作流程需要下列Takara Bio产品。请参考User Manual得到一份完整的试剂耗材清单:
用于ICELL8 cx Single-Cell System
· ICELL8 cx TCR Chip (Code No. 640200)
· ICELL8 Human TCR a/b Profiling Reagent Kit (Code No. 640182)
· ICELL8 Human TCR a/b Profiling Indexing Primer Set (Code No. 640179, 640180, 640181)*
· ICELL8 Collection Kit-L (Code No. 640212)
· ICELL8 cx Loading Kit (Code No. 640197)
User Manual:ICELL8® cx Human TCR a/b Profiling user Manual
*NOTE:Code No. 640179包含的Primer量足够1张芯片使用,若实验中需要使用多张芯片,请购买合适的indexing primer set。640180适用于5张芯片的实验,640181适用于10张芯片的实验。
 
自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
图1 ICELL8 Human TCR a/b Profiling技术原理流程图
 
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图2 ICELL8 Human TCR a/b Profiling实验流程图
 
使用ICELL8单细胞分选系统对T细胞和PBMCs样品进行单细胞分选及后续单细胞TCR克隆型分析(图3)和5’端差异表达分析(图4)。
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图3. T细胞与PBMCs的克隆型read计数 使用Excel对MiXCR软件输出结果进行筛选,为大于阴性对照(1X PBS)的TCRa和TCRb克隆类型定义一个read阈值(绿色实线为阈值线,对应read计数值为8)。数据使用统计软件JMP进行分析,并将结果绘制成箱图。图中点代表一个细胞中的TCRa(蓝色)和TCRb(红色)克隆型。阴性对照用于阈值设定,以便对分析样品和NTC(或低read克隆型)进行区分。Negative control 15个,Positive control 15个,T cells 530个,PBMCs 590个。
 
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图4. T细胞与PBMCs的5’端差异表达分析 使用与图3相同来源的cDNA进行单细胞5’端差异表文库构建,评估每个Barcode获得的reads数。箱图中每个点代表一个指定细胞中检测到的reads数。文库测序由NextSeq® 550测序平台完成,每个细胞产生平均30K reads。在PBMCs和T细胞中平均检测到~1,150个基因。Negative control 15个,Positive control 15个,T cells 530个,PBMCs 590个。
 
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■ 参考文献
Litjens, Nicolle H. R., et al. Validation of a combined transcriptome and T cell receptor Alpha/Beta (TRA/TRB) repertoire assay at the single cell level for paucicellular samples. Front. Immunol., 11, (2020)
 
 
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视频资料:《ICELL8系统T细胞受体测序(TCR-Seq)解决方案》
 

页面更新:2021-02-02 13:32:33