骨吸收检测板/试剂盒【常见问题】
Q1： 培养基的使用量？
A1： BONE RESORPTION ASSAY KIT 48×2 (CSR-BRA-48X2KIT)
按照说明书，该试剂盒需要用分化培养基处理板子。1个板子，48孔，
每个孔需用0.5mL分化培养基处理，每个孔加入细胞（细胞含有0.5mL分化培养基）。
1个48孔板合计需要的分化培养基是48mL。2个48孔板，是96mL分化培养基。
Osteoclast Culture Kit V-2 （PMC-OSC12-COS ）这个试剂盒中含有25mL的分化培养基。
所以，Osteoclast Culture Kit V-2 （PMC-OSC12-COS ）里面的分化培养基25mL是远远不够用于BONE
RESORPTION ASSAY KIT 48×2 (CSR-BRA-48X2KIT)的检测。
Osteoclast Culture Kit V-2 （PMC-OSC12-COS ）即便里面的分化培养基不含酚红，也需要另外配置。
Q2： 如何配置不含酚红的培养基？
A2： 不含酚红的分化培养基配方：
1）alpha-MEM（不含酚红），10%胎牛血清，1%双抗，50ng/Ml M-GSF,15ng/mL RANKL。
Osteoclast Culture Kit V-2 中用的也是alpha-MEM。
2）DMEM/F12（不含酚红），10%胎牛血清，1%双抗，50ng/Ml M-GSF,15ng/mL RANKL。
Osteoclast Culture Kit V-2 中用的也是alpha-MEM不同。BONE RESORPTION ASSAY KIT 48×2
(CSR-BRA-48X2KIT)试剂盒中用到的。
Q3： 在细胞孵育（5~6天）后，最佳的荧光检测时间是什么？什么时候荧光强度开始减弱？ 什么时候必须检测荧
光强度？
A3： 最佳荧光检测时间取决于细胞和培养状态。所以我们推荐继续使用少量的条件培养基，研究荧光强度的上升
曲线。
Q4： 板的保质期多久？
A4： 距离发货时间1年。
Q5： 板的荧光强度会随时间而减弱吗？
A5： 避光情况下，结合磷酸钙（CaP）的荧光标记硫酸软骨素（FACS）的荧光强度稳定。然而，部分荧光标记
硫酸软骨素（FACS）在有培养基或者PBS时会被洗脱到培养基内。
Q6： 如果我用胰酶消化细胞做qPCR，磷酸钙（Ca-P）是否影响胰酶消化或者qPCR结果？
A6： 非常抱歉，我们没有实验过，也没有相关数据。
Q7： 我如何检测pit？与TRAP检测类似吗？需要检测pit的深度和宽度吗？（检测pit的面积不等于检测破骨细胞
消化的pit体积）
A7： Pit 检测（骨吸收活性）与TRAP检测不是很相似。按照说明书，pit检测中细胞的面积是在移除细胞后对板
进行拍照测量。实际上，如您所说体积不应该在pit检测中测量。检测体积也比较困难。因此，pit面积或者
pit数目经常检测。
Q8： 我该如何洗涤细胞？用缓冲液？检测荧光强度的pit 实验后。
A8： 用5%的次氯酸钠处理5分钟将细胞从板上移除，然后用水洗涤板，晾干。
Q9： 可用TECAN的活细胞影像仪器对板进行实时检测？
A9： 通常，我们会在新的96孔板内收集条件培养基，检测荧光强度。我们没有在培养过程中检测荧光强度。
Q10： 根据说明书，需要使用非酚红培养基培养细胞，我是否可以用其他不含酚红的培养基（不是说明书上提到
的培养基）？这种培养基是否对细胞有不利影响？能否推荐其他不含酚红的培养基。我比较担心在磷酸钙
（CaP）包被的培养板上培养细胞，不含酚红的DMEM或者其他培养基不能很好的支持细胞培养5天。在
将细胞接种在磷酸钙（CaP）包被的培养板之前，我是否可以用含酚红的培养基培养细胞？我想培养
RAW264.7 细胞和U937细胞。
另外，5%的次氯酸钠是否也包含在试剂盒里？
A10： 在我们培养体系中，不更换培养基可以培养6天。如果客户担心6天培养的问题，我们推荐他试试在正常培
养板中进行同样的培养，确认是否可以诱导破骨细胞。
非常抱歉，我们这边没有用除了DMEM/F-12、αMEM之外的培养基。可以试试，确认是否能诱导破骨细
胞。在最初培养的时候，可以用含酚红的培养基。但在检测时，需要更换成不含有酚红的培养基。
5%的次氯酸钠不包括在试剂盒内。推荐使用Sodium Hypochlorite Solution（197-02206，Wako Pure
Chemical Industries, Ltd.，）
Q11： 是否可用这种板检测正常骨髓破骨细胞分化实验？能否在实验结束时用TRAP染色细胞？
A11： "BONE RESORPTION ASSAY PLATE" 可用于检测破骨细胞的骨吸收活性。破骨细胞的骨吸收活性与破骨
前体细胞（骨髓或者RAW264.7细胞系）的骨吸收活性的差别是可以评估的。请注意在使用骨髓来源的破
骨前体细胞时细胞 的选择。在骨髓实验中，该实验可能由于含有其他杂质导致进展不顺利，还可能在破骨
细胞诱导时，需要检查M-CSF和RANKL的浓度是否足量。
TRAP染色，我们没有这方面的经验，但是可以同时进行骨吸收检测和TRAP染色。破骨细胞吸收后，细胞
仍然在细胞板上贴壁。如果希望结果清晰，我们推荐单一实验。
Q12： 是否可以兼容转染实验？是否会破坏包被？如果兼容的话，推荐什么转染方法？
A12： 在磷酸钙包被的板（CaP）上没有进行转染的实例。
磷酸钙在细胞板上贴壁很牢。所以，如果没有酸或者强的外力，不会发生剥离。
如果客户是做siRNA实验，推荐在转染后使用CaP板。因为核酸会吸收CaP，导致转染效率差。
Q13： 板是保存在室温还是4℃？
A13： 室温和4℃都可以保存。
Q14： 如果不是一次性用完所有的孔，这块板还能再用吗？因为整块板都会放在37℃培养细胞。
A14： 基本上我们不能保证上述使用的效果。但是，如果没有污染的话，未使用的孔都可以再使用。另外看，包
被的CaP会和二氧化碳培养箱的湿气反应，可能会有点影响。
Q15： 是否可用于破骨细胞的检测（说明书是检测的RAW细胞）？如何用影像分析软件测量pit检测吸收？
A15： 非常抱歉，我们没有检测过不同分化的（成熟的）破骨细胞。如果含有其他细胞，会导致操作困难。
TRAP染色试剂盒常见问题
Q16： 该款试剂盒是否可用于石蜡包埋的组织？
A16： 非常抱歉，我们没有用这个做过石蜡包埋的组织。如果样品含有福尔马林的话，也不能用。
Q17： 操作说明书是可以做10×96孔板实验。能否介绍一下使用6孔板的步骤？
A17： 请使用96孔板的30倍试剂。比如显色试剂的量是1.5mL。
Q18： 是否可以染巨噬细胞？
A18： 可以。
Q19： 进行免疫荧光实验时，是否可以一起使用？如果可以，请告知实验流程。
A19： 我们没有用该试剂盒同时进行免疫荧光实验。
Q20： 如果显色底物溶解的话，在4℃可以保存多久？
A20： 非常抱歉，显色底物不能溶解后保存。最好现配现用。显色底物提供3mg/瓶，有10瓶。
Q21： 能够提供小包装？
A21： 目前不行。
