Caspase-1(p10 & p20) 

独特的抗体应用于WB实验中检测活化的小鼠 Caspase-1

　　Caspase-1 是描述炎症的最佳caspase。它能提炼细胞因子interleukin-1β (IL-1β) 和IL-18，并诱导 pyroptotic 细胞死亡。 Caspase-1 由多蛋白复合物激活，由于在不同的炎症中都能检测到，所以被称为针对多种刺激的炎症小体。NLRC4对胞质鞭毛蛋白反应, 鼠源NLRP1b 对炭疽致死毒素反应, AIM2 对细胞质DNA反应，NLRP3则对包括晶体在内各种激动剂反应。

◆特点

●  纯化的小鼠单克隆抗体(mAbs)

●  CASPER-1（p10）检测内源性全长片段&活化的p20片段

●  CASPER-2（p20）检测内源性全长片段&活化的p10片段

●  监控炎症小体活性的最好工具

●  经过炎症领域专家的测试验证

◆案例应用

抗小鼠Caspase-1 (p10) 单抗(Casper-2)

图：抗体anti-Caspase-1 (p10) (mouse), mAb (Casper-2)应用于免疫印迹实验中检测Mouse Caspase-1 (p10)。

方法：从野生型小鼠和Caspase-1基因敲除小鼠中提取骨髓树突状细胞进行分化培养，用5uM(Nigericin)处理30分钟，使用WB方法检测细胞上清中Caspase-1是否活化并表达蛋白。在还原条件下，用SDS-PAGE分离上清液 (30μl) ，转移到硝酸纤维素膜后，用anti-Caspase-1 (p10) (mouse), mAb (Casper-2) (1μg /ml)孵育，最后化学发光进行检测。

抗小鼠Caspase-1 (p20)单抗(Casper-1)

图：抗体anti-Caspase-1 (p20) (mouse), mAb (Casper-1)应用于免疫印迹实验中检测Mouse Caspase-1 (p20)。

方法：对细胞提取物和从野生型小鼠分化骨髓来源树突状细胞(BMDCs)进行分化培养，用 5 μM (Nigericin)处理 30分钟，使用WB方法检测细胞上清中NLRP3-/-和caspase-1-/- 小鼠是否活化并表达蛋白。在还原条件下，用SDS-PAGE分离细胞提取物和上清液，转移到硝酸纤维素膜后，用anti-Caspase-1 (p20) (mouse), mAb (Casper-1) (1μg /ml)孵育，最后化学发光进行检测。

图： 抗体 anti-Caspase-1 (p20) (mouse), mAb (Casper-1) 应用于免疫组化实验中染色小鼠脾的内源性小鼠 Caspase-1。

方法： 通过标准免疫组化(用柠檬酸钠进行抗原修复)，使用anti-Caspase-1 (p20) (mouse), mAb (Casper-1) (Prod. No. AG-20B-0042) (1:500)，使小鼠来源的Caspase-1 KO (左)或者 WT (右)的小鼠脾组织(石蜡切片)染色。

◆产品

实验动物生化检测LabAssay™ 系列试剂盒

　　LabAssay™ 系列产品是以人、小鼠等动物样品为检测对象的生物化学检测用试剂盒。使用微孔板进行检测，因此仅需少量样品即可检测，且一次可进行多样品检测。

　　※LabAssay^™ 系列产品仅供实验研究用，不能用于临床诊断。

◆LabAssay™ 系列产品

　　LabAssay^™ 系列产品是以人、小鼠等动物样品为检测对象的生物化学检测用试剂盒。使用微孔板进行检测，因此仅需少量样品即可检测，且一次可进行多样品检测。

　　本次还新推出了可检测氨中氮元素的“LabAssay^™ Ammonia（氨检测试剂盒）”。

　　※LabAssay^™ 系列产品仅供实验研究用，不能用于临床诊断。

◆LabAssay™ Ammonia（氨检测试剂盒）

　　氨主要在肠内、肾脏中产生。

　　生物体内生成的氨通过肝脏的尿素循环转变成尿素，在尿液中排出体外。

检测原理（藤井・奥田法变法）

　　氨和催化剂苯酚、五氰基亚硝酰基铁（Ⅲ）钠反应 ，转化成二氧二苯胺。强碱条件下，二氧二苯胺和次氯酸钠反应，生成靛酚。

　　本试剂盒通过检测靛酚呈现出的蓝色吸光度，进而检测样品中的氨中氮元素浓度。

试剂盒内容

１．去蛋白液——100mL×1瓶　　

２．显色液——A50mL×1瓶　　

３．显色液——B25mL×1瓶　　

４．显色液——C50mL×1瓶　　

５．氨标准溶液——15mL×1瓶　　

６．标准溶液用稀释液——20mL×1瓶　　　　

性能

●　检量线范围：100～400μg/dL(mg/100mL)
●　检测时间：约70min
●　样品量：70μL
●　测定波长：630nm

◆LabAssay™ ALP（碱性磷酸酯检测试剂盒）

　　碱性磷酸酶的活性检测试剂盒。常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。
　　碱性磷酸酶(ALP)广泛分布于肝脏、骨、小肠之中。特别在骨代谢研究领域方面被用作为骨形成指标之一。

测定原理

　　本品是用p–硝基苯磷酸作为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，根据测量p–硝基苯磷酸分解产物p–硝基酚的吸光值，检测样品中碱性磷酸酶活性。

试剂盒内容

１．基质片——20片　　

２．基质溶解液——100mL×1瓶　　

３．终止液——100mL×1瓶　　

４．标准液——10mL×1瓶　　

性能

●　检量线范围：0.0625～0.5mmol/L
●　检测时间：约20分
●　样品量：20μL
●　测定波长：405nm

试剂的配制

１．底物缓冲液：1片底物溶解于5mL底物溶解液中。

２．反应终止液：直接使用。

３．系列稀释标准液：将标准液用蒸馏水依次稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol/L等2倍率稀释液系列。

标准操作法

　　向96孔微孔板内添加100μL底物缓冲液和20μL样品，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，37℃孵育15分钟。

　　添加80μL反应终止液，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，用酶标仪测量405nm处的吸光值。同样方法进行空白(蒸馏水)对照和标准品的检测。

活性单位的定义
　　在pH9.8，37℃情况下，1分钟内生成1nmol p-硝基酚所需的酶，酶活性为1个活力单位（U）。

　　活性（U/μL）= C/15×a　
　　C：由标准曲线得到的OD值(A实验值减去A空白值)，计算p-硝基酚浓度(mmol/L=nmol/μL) 

　　      15：反应时间(min.)

　　a：样品的稀释倍数

　　当样品为成骨细胞时，本试剂盒使用前需要预处理。

　　在48孔板上进行细胞培养后，除去培养基，用PBS冲洗感光板，各孔添加150μL  0.05%的曲拉通X，进行冻结→融化→冻结→融化操作。4℃，15,000rpm离心15分钟处理，将上清液移到新的辅助管，以此作为样品。

　　(注1)：48孔板：培养时，一般不采用96孔板，多使用48孔板。

　　(注2)：曲拉通X的作用：溶解细胞膜，回收蛋白(细胞内含有ALP蛋白)的试剂。

　　(注3)：反复的冻结融化：原理不明，但这样做似乎可以提高ALP活性。

　　(注4)：也有不使用曲拉通X，用超声波降解法(超声波处理)对细胞造成物理性休克得到溶解产物的方法。

　　(注5)：曲拉通X的添加量：以150μL为例，孔中细胞约为20,000cells。

◆LabAssay^TM Cholesterol（胆固醇检测试剂盒）

　　胆固醇是生物细胞膜的主要成分，是众多动物合成甾族化合物的前体物质。

　　另外，被认为是造成动脉硬化等血管疾病的病因之一。

　　本品是利用N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS)，通过酶浅蓝色显色反应，检测血清等样品中胆固醇量的试剂盒。与微孔板配套使用，可进行多样品检测。

测定原理

　　通过胆固醇氧化酶和胆固醇反应生成的过氧化氢、与N-乙基-N-（2-羟基-3-磺丙基）-3,5-二甲氧基苯胺钠（DAOS）、4 -氨基安替比林进行氧化缩合。

　　本产品是通过检测氧化缩合生成的浅蓝色素吸光度来计算样品中总胆固醇含量的试剂盒。

试剂盒组成

１．缓冲液——150mL×2瓶

２．显色剂※——150mL用×2瓶

３．标准液——10mL×1瓶

　　※溶解时：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、DAOS、4-氨基安替比林、抗坏血酸氧化酶。

性能

●　标准线范围：50～592.2mg/dL(mg/100mL)

●　测定时间：约10分

●　样品量：2μL

●　测定波长：主波长600nm、副波长700nm

试剂的配制
　　将1瓶显色剂(150mL用)溶解于1瓶缓冲液(150mL)中。配制后，以2～10℃保存，可保存3星期。

标准操作法

　　向微孔板内添加2μL样品和300μL显色剂，充分混合，在37℃孵育5分钟。以此作为对照空白值，测量样品及标准液的吸光值。

◆LabAssay^TM Creatinine（肌氨酸酐检测试剂盒）

　　肌氨酸酐是肌肉中肌酸与ATP发生反应后所生成的代谢产物。

　　肌氨酸酐大部分在肾脏循环时被过滤，不再被吸收而被排出体外。肾功能障碍和肌肉中能量代谢变化时，样品中肌氨酸酐的量发生变化。

测定原理（Jaffe法）

　　向样品中加入除蛋白剂，离心分离，回收上清。上清中加入苦味酸及氢氧化钠溶液，在碱性条件下，肌氨酸酐和苦味酸发生缩合，产生橙红色的缩合物。测量这个橙红色缩合物的吸光值，计算样品中的肌氨酸酐浓度。

试剂盒组成

１．去蛋白试剂——150mL×1瓶　　

２．苦味酸试剂——50mL×1瓶　　

３．0.75mol/L氢氧化钠溶液——50mL×1瓶　　

４．肌酐标准溶液——15mL×1瓶　　

性能

●　标准线范围：2.5～10mg/dL(mg/100mL)
●　测定时间：约40分
●　样品量：50μL
●　测定波长：520nm

特点
●　蒸馏水作为样品时，吸光值为0.010～0.020。
●　使用已知浓度的血清进行检测时，在已知浓度的±10%以内。

试剂的制备
●　去蛋白剂・苦味酸・0.75mol/L 氢氧化钠溶液:全部都可以直接使用。
●　标准液：附带的标准液可直接使用，或稀释后作为系列标准液。

标准操作法
　　将300μL去蛋白剂和50μL样品在样品管中混合，室温放置10分钟，离心分离(2,500rpm以上反应10分钟)，回收上清。

　　向酶标板的孔中加入100μL上清，再加入50μL苦味酸和50μL 0.75mol/L氢氧化钠溶液，在25～30℃反应20分钟。

　　作为空白对照，检测样品及标准液的吸光值。

◆LabAssay^TM Glucose（葡萄糖检测试剂盒）

　　糖是生物体重要的能量来源之一，在生物体内以各种因子的形式，起调节作用。溶液中的葡萄糖以α型和β型按一定比例平衡存在。

检测原理（变旋酶・GOD法）

　　通过变旋酶作用，将α-D-葡萄糖转变为β-D-葡萄糖。再通过β-D-葡萄糖和葡萄糖氧化酶（GOD）反应生成的过氧化氢，与苯酚、4 -氨基安替比林氧化缩合。

　　本产品是测定通过氧化缩合生成的红色素的吸光度，来计算样本中葡萄糖浓度的试剂盒。

试剂盒内容

１．缓冲液——150mL×2瓶　

２．显色剂——150mL用×2瓶　　

３．葡萄糖标准溶液Ⅰ——10mL×1瓶　

４．葡萄糖标准溶液Ⅱ——10mL×1瓶　

性能

●　检量线范围：50～500mg/dL(mg/100mL)
●　检测时间：约10分
●　样品量：2μL

●　测定波长：主波长505nm、副波长600nm

◆LabAssay^TM NEFA（游离脂肪酸检测试剂盒）

　　血清中NEFA(Non-esterified Fatty Acid：游离脂肪酸)与白蛋白结合，被搬运至末梢组织，成为末梢组织重要的能源来源。检测游离脂肪酸的含量，可用于调节由脂肪组织释放到肝脏的物质，有利于掌握类脂化合物代谢的动态。

测定原理

　　样品中的游离脂肪酸(NEFA)在辅酶A与(CoA)腺嘌呤核苷-5'-三磷酸二钠(ATP)的存在下，受酰基-CoA合成酶(ACS)作用，生成酰基-CoA、AMP及焦磷酸(PPi)。生成的酰基-CoA在酰基-CoA氧化酶(ACOD)的作用下被氧化，同时生成2,3-反式-烯酰-CoA及过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶(POD)的作用下，与3-甲基-N-乙基-N- (β-羟乙基甲基)-苯胺(MEHA)及4-氨基安替比林发生定量性氧化缩合，生成青紫色色素。测量这个青紫色色素吸光值，即可计算出样品中的NEFA浓度。

试剂盒组成

１．显色剂A——10mL用×6瓶

２．显色剂A 溶解液——65mL×1瓶

３．显色剂B——20mL用×6瓶

４．显色剂B 溶解液——130mL×1瓶

５．基质液（油酸1mEq/L）——10mL×1瓶

　　※油酸1mEq=1mmol

性能

●　检量线范围：0.5～1.97mEq/L
●　检测时间：约20分
●　样品量：4μL

●　测定波长：550nm(进行双波长检测时，主波长为546nm,副波长为660nm)

特点
●　以实验动物为对象的生物化学检测试剂
●　用微孔板检测，可用少量样品一次检测多个样品

●　蒸馏水作为样品时，吸光值在0.07以下。
●　检测已知浓度血清样品时，浓度为已知浓度±15%以内。

　　※本品为研究试剂，不可用于诊断。

使用方法

试剂的配制：
●　显色试剂A：

      1瓶显色剂A(10mL用)溶解于10mL显色剂A溶解液中，得到显色试剂A。
●　显色试剂B：

      1瓶显色剂B(20mL用) 溶解于20mL显色剂B溶解液中，得到显色试剂B。
●　标准液：

      附带的标准液可直接使用，也可经稀释作为标准系列使用。
  
 标准操作法

　　向微孔板内添加4μL样品和80μL显色试剂A，充分混合，在37℃加热10分钟。加入160μL显色试剂B，在37℃加热10分钟。以此作为对照空白值，测量样品及标准液的吸光值。

◆LabAssay^TM Phospholipid（磷脂检测试剂盒）

　　磷脂是生物内细胞膜的主要构成成分，与脂肪的乳化、吸收和血液凝固等重要功能密切相关，本品由胆碱氧化酶和过氧化物酶等酶和显色底物组成，根据测量氧化缩合生成的浅蓝色色素的吸光值，检测样品中磷脂浓度。

检测原理（胆碱氧化酶・DAOS法）

　　磷脂经磷脂酶加水分解后，产生过氧化氢。生成的过氧化氢与N-乙基-N-（2-羟基-3-磺丙基）-3,5-二甲氧基苯胺钠和（DAOS）、4-氨基安替比缩合氧化。

试剂盒组成

１．缓冲液——50mL×8瓶

２．显色剂——50mL用×8瓶

３．磷脂基质液——10mL×2瓶

性能

●　检量线范围：150～596.1mg/dL(mg/100mL)
●　检测时间：约10min
●　样品量：2μL

●　测定波长：主波长600nm、 副波长700nm

◆LabAssay^TM Triglyceride（甘油三酯检测试剂盒）

　　甘油三脂是有1分子的甘油和3分子脂肪酸酯结合形成的中性脂肪。作为脂溶性物质，存在于血液中的甘油三酯、胆固醇、磷脂、游离脂肪酸和脂溶性维生素中。

检测原理

　　甘油三脂是脂蛋白脂肪酶（LPL）、甘油激酶作用下转变而成的甘油醛-3-磷酸。甘油醛-3-磷酸和甘油-3-磷酸氧化酶反应生成的过氧化氢与N-乙基-N-（2-羟基-3-磺丙基）-3,5-二甲氧基苯胺钠（DAOS）、4-氨基安氧化缩合。本品是检测N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐进行酶促反应生成蓝色色素的吸光值，定量测定小鼠血清中的甘油三酯。使用微孔板检测，仅需少量样品，可同时进行多样品检测，也可以使用试管。

试剂盒组成

１．缓冲液——105mL×3瓶

２．显色剂——105mL用×3瓶

３．基准液——10mL×1瓶

性能

●　检量线范围——100～888mg/dL(mg/100mL)
●　检测时间——约10分
●　样品量——2μL
●　测定波长——主波长600nm、 副波长700nm

◆肥胖·糖尿病相关试剂

◆LabAssay™ ALP（碱性磷酸酯检测试剂盒）
[１]　Ito, S. et al.: J. Pharmacol. Exp. Ther., 333, 341 (2010).　※小鼠肾脏组织提取液
[１]　Iwakura, T. et al.: J. Orthop. Res., 27, 208 (2009).　※人培养细胞提取液
[１]　Furuya, Y. et al.: J. Biol. Chem., 286, 37023 (2011).　※小鼠血清
[１]　Itoh, T. et al.: J. Biol. Chem., 284, 19272 (2009).　※小鼠培养细胞提取液

◆LabAssay^™ Cholesterol（胆固醇检测试剂盒）

[１]　Wu, S. Y. et al.: Acta. Pharmacol. Sin., 30,   202 (2009).　※小鼠血浆
[１]　Uchida, K. et al.: Exp. Anim., 58,   181 (2009).　※小鼠组织提取液
[１]　Ushio, M. et   al.: Am. J. Physiol.   Endocrinol. Metab., 305, E293 (2013).　※小鼠组织提取液
[１]　Kobayashi, Y. et al.: Biosci. Biotechnol. Biochem., 74,   2385 (2010). ※大鼠至提取液

◆LabAssay^™ Creatinine（肌氨酸酐检测试剂盒）

[１]　Aranami, F. et al.: J. Med. Invest., 57, 95 (2010).　※小鼠血浆及尿液
[２]　Toyama, K. et al.: Br. J. Pharmacol., 166, 1183 (2012). 　※小鼠
[３]　Matsumoto, A. et al.: Environ. Health Prev. Med., 15, 211 (2010).　※人尿　
[４]　Nasrin, S. et al.: J. Pharmacol. Sci., 122, 270 (2013).　※大鼠尿

LabAssay^™ Glucose（葡萄糖检测试剂盒）
[１]　Yamashita, Y. et al.: Biosci. Biotechnol.Biochem.,77, 888 (2013).　※小鼠血浆
[２]　Yamashita, Y. et al.: J. Nutr. Sci., 1, e2 (2012).　※小鼠血浆
[３]　Wang, W. et al.: J. Renin Angiotensin Aldosterone Syst., 15, 384 (2014).　※小鼠血清
[４]　Maesako, M. et al.: Neurobiol. Aging.,33, 1011 (2012).　※小鼠血清

LabAssay^™ NEFA（游离脂肪酸检测试剂盒）
[１]　Wang, F. et al.: J. Mol. Endocrinol., 52, 133 (2014).　※小鼠血浆
[２]　Kobayashi, Y. et al.: Biosci. Biotechnol.Biochem., 74, 2385 (2010).　※大鼠血浆
[３]　Chang, Y. C. et al.: EMBO Mol. Med., 5, 1165 (2013).　※小鼠血浆
[４]　Uchida, K. et al.: Exp. Anim., 58, 181 (2009).　※小鼠血清

◆LabAssay^™ Phospholipid（磷脂检测试剂盒）
[１]　Xu, Q. et al.: Biosci. Biotechnol, Biochem., 77, 1390 (2013).　※小鼠肝脏组织裂解液
[２]　Kuge, H. et al.: J. Biol. Chem., 289, 26783 (2014).　※脂质体
[３]　Kessler, E. C. et al.: J. Dairy. Sci., 97, 5481 (2014).　※牛
[４]　Cheng, L. et al.: Transplantation, 90, 127 (2010).　※大鼠

◆LabAssay^™ Triglyceride（甘油三酯检测试剂盒）
[１]　Saito, M. et al.: Biosci. Biotechnol.Biochem.,76, 2049 (2012).　※小鼠血清
[２]　Fujimori, K. et al.: Prostaglandins. Other.lipid. Mediat.,94, 96 (2011).　※小鼠培养细胞提取液
[３]　Zhou, L. et al.: Am. J. Physiol. Renal. Physiol., 305, F1491 (2013).　※大鼠血浆
[４]　Wu, S. Y. et al.: Acta. Pharmacol.Sin.,30, 202 (2009).　※大鼠血浆
[５]　Wang, F. et al.: J. Mol. Endocrinol., 52, 133 (2014).　※大鼠血浆
[６]　Kato, H. et al.: J. Hepatol., 60, 1032 (2014).　※小鼠肝脏提取液

Screen-Well^® 天然产物化合物库

Screen-Well^®  Natural Product library

◆原理

SCREEN-WELL^® 化合物库系列产品提供了简单，方便的方法进行化合物筛选。每个化合物库包括：某一类化合物归为一个化合物库，包括抑制剂，激动剂或者诱导剂。每一个化合物库提供相关文件，介绍化合物的活性，在板上的位置，物理信息还有一份结构数据（SD）文件。可单独大量提供某种化合物。

●   广泛的生产线：提供的化合物库包括FDA批准的化合物，天然产物，受体 de-orphaning化合物，化学基因组

     学，信号通道相关。合计超过2500种化合物，包括天然产物，酶抑制剂，受体的配体，药物，脂类&脂肪酸

     等。

●   新颖性，化学物库是有相关的小分子组成，Enzo申请专利的

     化合物。

●   简单低成本， 化合物全都溶在相应溶剂中、无需额外溶解

      步骤，即可进行筛选。

   ●   包含无毒对照品，大量毒性明确且毒性不同的化合物

   ●   96孔板包装，溶于DMSO中，即可进行筛选

◆案例・应用

Ÿ  

     天然产物是化学多样性的卓越来源，是活性小分子筛选的首选。历史经验来讲，天然产物是新药筛选最成功来源。该化合物库提供已知结构的500多种提取自天然产物的化合物，包括很多传统药方中的化合物。化合物溶解在DMSO中。每种化合物可以提供克包装的产品。

运用：高通量筛选。

试剂盒组分：502种化合物。包括萜类，黄酮类，香豆素，生物碱，大环内酯物，异黄酮等。

规格：100uL/孔或500uL/孔。

浓度：2mg/ml （DMSO溶液）

保存温度：-80℃。

血蓝蛋白（KLH）（T细胞依赖性抗原）

大鼠免疫球蛋白G（IgG）ELISA试剂盒

　　药品的免疫毒性实验相关方针ICH S8中推荐在无特定免疫毒性标靶情况下进行的T细胞依赖性抗体生产实验（TDAR、T cell Dependent Antibody Reaction）。TDAR被称为T细胞依赖性抗原。例如：通过KLH（Keyhole limpet hemocyanin）的投放对一次抗原刺激而生产IgM性状抗体。接下来进行二次抗原刺激后通过类别转换作用可观察到产生IgG性状抗体。由于本试剂盒可简便测定大鼠血液中IgM性状的抗KLH浓度，所以最适合上文所述的目的。可与大鼠抗KLH-IgG检测试剂盒配套使用。

◆特点

●　测定时间短（总反应时间：2小时20分钟）

●　微量样本即可测定。

●　使用无害的防腐剂。

●　全部试剂为溶液即用类型。

●　高测定精度和高重复性。

◆试剂盒组成

◆物种交叉性

3000ng/mL时数据—：无交叉性

◆样本信息

●　大鼠血清·血浆

●　50μL/well（稀释样本）

※　用附带的缓冲液将样品稀释至标准曲线范围内。

※　为了避免非特异反应发生，请将样本稀释500倍以上。

◆测定范围

0.47~30ng/mL（标准曲线范围）

◆实验数据

精密度实验（实验内变化）

单位：ng/mL

重复性实验（实验间变化）

单位：ng/mL，n=4

添加回收实验

样本C

单位：ng/mL，n=2

样本D

单位：ng/mL，n=2

稀释直线性实验

2个血清样本连续用稀释缓冲液稀释3个梯度测定结果，直线回归值R2=0.9992~0.9998