细胞周期的调控系统与细胞增殖密切相关。一个细胞产生两个子细胞的细胞分裂是细胞周期的一部分。细胞周期可以通过流式细胞术测量细胞DNA染色，然后分析染色细胞核在细胞周期阶段的比例来分析。细胞周期分为两个主要阶段：间期和有丝分裂（M）期。间期由G1期（发生在细胞分裂之前的DNA合成准备）、S期（DNA合成和复制）和G2期（具有重复染色体的单个细胞）组成。M期包括有丝分裂和胞质分裂。细胞周期的进展受细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的调控。分析细胞周期检查点的作用机制，对确定抗癌药物及其他药物的作用具有重要意义

产品特点：检测时间短

碘化丙啶（PI）通常用于使用流式细胞仪进行细胞周期分析。与这种分析方法相比，深红色细胞周期测定溶液具有良好的膜渗透性，并使用对DNA具有高特异性的染料，因此仅需将试剂添加到细胞悬液中就可以分析细胞周期。此外，深红色细胞周期测定解决方案中还提供了633 nm激光器，使您可以同时使用高度通用的488 nm激光器。

对比实验：准确的判段活细胞的细胞周期

用细胞周期流式检测试剂（蓝色和深红色）染色的活CHO细胞，同时使用广泛应用的PI染色产品和同仁已有的细胞周期检测试剂盒，进行了类似的实验。结果，通过细胞周期流式检测试剂获得的结果与PI染色结果相同（如下所示）。与四种不同的产品相比，我们的产品在活细胞中获得了清晰的直方图峰。

示例：抗癌剂引起的细胞功能的变化

阿霉素（DOX）在细胞周期的G2 / M期抑制细胞增殖，并诱导细胞衰老。将DOX加入A549细胞后，G2 / M期的峰值增高（Cell Cycle Assay Solution Deep Red、Blue;C548C549），诱导细胞衰老（Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal；SG03）和线粒体膜电位发生变化（JC-1 MitoMP Detection Kit；MT09)

1)細胞（HCAECs）

N. Sasaki, Y. Itakura and M. Toyoda, “Rapamycin promotes endothelial-mesenchymal transition during stress-induced premature senescence through the activation of autophagy”, Cell Commun. Signal, 2020, 18(1), 43

2)細胞（ARPE-19）

T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, “Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091

2)細胞（MIA PaCa-2）

N. Sasaki, F. Gomi, F. Hasegawa, K. Hirano, M. Fujiwara, M. Toyoda　and T. Ishiwata, “Characterization of the metastatic potential of the floating cell component of MIA PaCa-2, a human pancreatic cancer cell line”, Biochem. biophys. res. commun, 2020, 522(4), 881-888

订购满5000元，200元礼品等你拿

凑单关联产品TOP5

NO.1.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.2.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.3.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

NO.4.    Cellular Senescence Detection Kit    细胞衰老检测

NO.5.    Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

  DNA含量分析在流式细胞检测中，占有相当大的比例。通过这种方法，研究者可以进行抗癌药物的毒性评估，并对恶性肿瘤细胞的预后效果及进展程度进行分析。在细胞周期检测中，DNA含量也同样作为重要的分析手段而被广泛应用。通过细胞DNA含量的测定，可计算各细胞周期的百分率，也可通过DNA片段化检测、DNA双染标记等方法检测细胞凋亡。

Cell Cycle Assay Kit-PI/RNase Staining试剂盒，可快速完成细胞周期的分析，操作简便。本产品使用碘化丙啶 (PI) 作为DNA荧光染料，通过流式细胞术得到细胞周期中G0/G1，G2和S期细胞的比例。

– 流式细胞仪（碘化丙啶PI:λex=535 nm，λem=617 nm）

– 37℃培养箱

– PBS缓冲液

– 1.5 ml微量管

– 100-1000 μl、20-200 μl、2-20 μl移液器

本产品在固定细胞及不细胞固定的情况下皆可使用。

配置Working solution (1 sample)

取500 μl Assay Buffer 后，分别加入25 μl PI Solution和2.5 μl RNase Solution。

＊工作液易遇光分解，请在使用前立即配置并用铝箔纸包裹避光保存。

配置好的工作液1天内用完。

非固定细胞

1. 将细胞密度调整为1-5×10⁶cells/ml ^a)。

2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中，在1,000×g离心3 min ^b)。

3. 去除上清液后加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞，在1,000×g离心3 min。

4. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。

5. 在4℃避光培养30 min。

6. 涡旋振荡使细胞分散，在37℃避光培养30 min。

7. 涡旋振荡使细胞分散，用尼龙筛网过滤，以去除样品中的细胞团块 ^c)。

8. 用流式细胞仪检测。

a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后，用PBS洗涤并离心收集细胞。

b) 根据不同的细胞种类，需适当调整转速与离心时间。

c) 样品处理后，剩余部分无法继续保存并使用。

固定细胞

1. 将细胞密度调整为1-5×10⁶cells/ml ^a)。

2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中，在1,000×g 离心3 min。

3. 去除上清，并在细胞团中加入1 ml的-20℃保存的70%乙醇。

4. 涡旋振荡使细胞分散，在4℃下静置2 h ^b)。

5. 在1,000×g 离心3 min后，去除乙醇 ^c)。

6. 加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞，在1,000×g 离心3 min。

7. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。

8. 涡旋振荡使细胞分散，在37℃避光培养30 min。

9. 涡旋振荡使细胞分散，在4℃避光培养30 min。

10. 涡旋振荡使细胞分散，用尼龙筛网过滤，以去除样品中的细胞团块 ^d)。

11. 用流式细胞仪检测。

a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后，用PBS洗涤并离心收集细胞。

b) 根据不同的细胞种类，需适当调整固定时间。

c) 根据不同的细胞种类，需适当调整转速与离心时间。

d) 样品处理后可以在4℃以下保存并继续使用，但是保存时间长短与细胞种类有关。

订购满5000元，200元礼品等你拿

凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3.    Fura2-AM    细胞内钙离子检测

NO.4.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测

NO.5.    Lactate Assay Kit-WST    乳酸检测

Nucleolus Bright是一种选择性与RNA结合并产生荧光的小分子荧光染料，只需在固定细胞中加入试剂即可成像。虽然Nucleolus Bright也会和在核仁以外存在的RNA反应，不过核仁作为细胞内RNA最多存在rRNA的产生场所，荧光尤为强烈。

成像时，通过与核染色试剂DAPI[产品货号：D523]共染色，可以更清楚地确认核仁。有关详细信息，请参阅使用说明书中的实验例。

核仁是不带膜的核内结构体，也是核糖体生物合成的起点。核仁中存在许多核糖体RNA(rRNA)，并且是 rRNA基因转录以及合成加工的场所。由于蛋白质合成的早期阶段在核仁中进行，因此核仁的变化被认为与多种细胞活动有关。核仁的形态变化已被公认为判断癌症的指标之一，近年来也有一系列的报道论述了核仁应激与DNA损伤、自噬、病毒感染和细胞衰老的关系，因此核仁在这些方面的研究也受到越来越多的关注。

※希望通过活细胞进行评价时，请咨询公司技术支持。

特点1：清晰地观察核仁

用4％ PFA或MeOH固定HeLa细胞后，用PBS洗净后用1％ Triton X-100进行破膜处理，加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色

试剂 (DAPI) 并培养，然后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。

<染色条件>

・PFA 固定

细胞在4％PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

・MeOH 固定

细胞在冷的MeOH中浸泡1 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

特点2：核仁定位

用4％PFA固定WI-38细胞后，用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色，并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂

(DAPI) ，培养后，用落射式荧光显微镜 (Keyence，BZ-X710) 观察。

结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。

＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green：Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm

Nucleolus Bright Red：Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm

DAPI：Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm

Anti-Fibrillarin 抗体：Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm

特点:3：与核仁相关的领域的报告示例

将不同传代数的WI-38细胞用4％ PFA固定后，用PBS洗净并用1％ Triton X-100进行破膜处理，然后加入Nucleolus Bright Green或

Red和核染色试剂 (DAPI)，培养后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实第3代细胞 (P3) 中的一个细胞核内存在多个核仁，而第18代细胞 (P18) 中核仁变大并成为一体。

<染色条件>

细胞在4％ PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

实验例：通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

使用共聚焦定量细胞成像仪 (横河电机株式会社 CQ1)对衰老细胞的定量分析。

将传代数不同的WI-38细胞固定后，分别用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁，并用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

通过图像对核仁进行分析

用共聚焦定量细胞成像仪在405nm处拍摄细胞核图像，在488nm处拍摄核仁体像，通过分析软件Cell Pathfinder识别各个细胞核内的核仁，并计算出其数量。

横河电机CQ1拍摄条件

使用板：96孔板

物镜：40倍

激发波长：

405nm（DAPI）：蓝色

488nm（Nucleolus Bright Green）：绿色

视野：16视野

<解析图像>

蓝框线：核

红框线：核仁

在传代数较多的细胞中，得到了1个细胞核中只有1个核仁的比例增加，而2个及以上核仁的比例减少的结果。该结果与下述论文中衰老的WI-38细胞中核仁数的减少(论文中的Table3)^*1，以及通过SETD8敲低诱导衰老的细胞核仁的变化(论文中的Figure4D)^*2得到了相同的结果。

*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.

*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.

Nucleolus Bright是一种选择性与RNA结合并产生荧光的小分子荧光染料，只需在固定细胞中加入试剂即可成像。虽然Nucleolus Bright也会和在核仁以外存在的RNA反应，不过核仁作为细胞内RNA最多存在rRNA的产生场所，荧光尤为强烈。

成像时，通过与核染色试剂DAPI[产品货号：D523]共染色，可以更清楚地确认核仁。有关详细信息，请参阅使用说明书中的实验例。

核仁是不带膜的核内结构体，也是核糖体生物合成的起点。核仁中存在许多核糖体RNA(rRNA)，并且是 rRNA基因转录以及合成加工的场所。由于蛋白质合成的早期阶段在核仁中进行，因此核仁的变化被认为与多种细胞活动有关。核仁的形态变化已被公认为判断癌症的指标之一，近年来也有一系列的报道论述了核仁应激与DNA损伤、自噬、病毒感染和细胞衰老的关系，因此核仁在这些方面的研究也受到越来越多的关注。

※希望通过活细胞进行评价时，请咨询公司技术支持。

特点1：清晰地观察核仁

用4％ PFA或MeOH固定HeLa细胞后，用PBS洗净后用1％ Triton X-100进行破膜处理，加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色

试剂 (DAPI) 并培养，然后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。

<染色条件>

・PFA 固定

细胞在4％PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

・MeOH 固定

细胞在冷的MeOH中浸泡1 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

特点2：核仁定位

用4％PFA固定WI-38细胞后，用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色，并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂

(DAPI) ，培养后，用落射式荧光显微镜 (Keyence，BZ-X710) 观察。

结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。

＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green：Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm

Nucleolus Bright Red：Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm

DAPI：Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm

Anti-Fibrillarin 抗体：Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm

特点:3：与核仁相关的领域的报告示例

将不同传代数的WI-38细胞用4％ PFA固定后，用PBS洗净并用1％ Triton X-100进行破膜处理，然后加入Nucleolus Bright Green或

Red和核染色试剂 (DAPI)，培养后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实第3代细胞 (P3) 中的一个细胞核内存在多个核仁，而第18代细胞 (P18) 中核仁变大并成为一体。

<染色条件>

细胞在4％ PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

实验例：通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

使用共聚焦定量细胞成像仪 (横河电机株式会社 CQ1)对衰老细胞的定量分析。

将传代数不同的WI-38细胞固定后，分别用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁，并用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

通过图像对核仁进行分析

用共聚焦定量细胞成像仪在405nm处拍摄细胞核图像，在488nm处拍摄核仁体像，通过分析软件Cell Pathfinder识别各个细胞核内的核仁，并计算出其数量。

横河电机CQ1拍摄条件

使用板：96孔板

物镜：40倍

激发波长：

405nm（DAPI）：蓝色

488nm（Nucleolus Bright Green）：绿色

视野：16视野

<解析图像>

蓝框线：核

红框线：核仁

在传代数较多的细胞中，得到了一个细胞核中只有一个核仁的比例增加，而两个及以上核仁的比例减少的结果。该结果与下述论文中衰老的WI-38细胞中核仁数的减少(论文中的Table3)^*1，以及通过SETD8敲低诱导衰老的细胞核仁的变化(论文中的Figure4D)^*2得到了相同的结果。

*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.

*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.

该试剂盒，可通过二抗的方法轻松检测出作为DNA损伤的指标γH2AX。 本试剂盒内包含了实验所需的所有试剂，即使是第一次使用的人操作起来也很方便，并且我们还将介绍使用γH2AX作为指标的文献及实验例以供参考。

DNA损伤中经常会出现DNA双链断裂，H2AX（一种组蛋白H2X的亚种），当出现DNA双链断裂时，会迅速而大量地被磷酸化。 这种磷酸化的H2AX（γH2AX），作为DNA损伤的标志物，有望被用来作为评估化学物质，活性氧，紫外线，辐射等的遗传毒性和致癌性。 近年来，γH2AX的检测也被用来作为评价细胞衰老的一种指标。

该产品使用单克隆抗体实验室生产的抗γH2AX抗体。

<试剂盒内已包含所有需要试剂>

所有试剂均已包含在试剂盒内，您可以马上检测并获得数据。

*对于多次染色和组织染色，请先查看常见问题中的“多次染色的注意事项”和“组织染色的注意事项”。

<操作简便>

细胞固定和膜渗透处理后，只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

<3色可选>

细胞固定和膜渗透处理后，只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

在评估细胞衰老时，应使用多种衰老指标进行分析。

<细胞衰老实验例>

<结合其他指标的细胞实验例>

<染色条件>

将不同代数的WI-38细胞固定后，用细胞衰老检测试剂盒-SPiDER-βGal对其进行染色。

使用0.1％Triton-X / PBS进行膜渗透处理后，用该试剂盒对γH2AX进行染色。

<检测条件>

H2AX（深红色）：Ex.590-650 nm / Em.663-738 nm

SA-β-gal：Ex.533-557 nm / Em.570-640 nm

DAPI：Ex.340-380 nm /  Em.435-485 nm