细胞内葡萄糖吸收检测试剂盒

◆原理

胰岛素是降血糖的激素，它能够以脂肪细胞或者骨骼肌等为中心促进糖输送活性，将糖从细胞外吸收到细胞内。

测定糖的吸收量一般是使用³H标记的3-O-甲基-D-葡萄糖和2-脱氧葡萄糖（2DG）的方法。这种方法需要用同位素，所以只能在RI管理区域内使用，在一般的实验室也无法使用。

本试剂盒使用安全，操作简单，用non-RI法能够简便地测定细胞内糖吸收量。

试剂盒测定

细胞吸收的2DG会在己糖激酶的催化下会被2-脱氧葡萄糖-6磷酸（DG6P）氧化，不继续进行酶反应而是留在细胞内。

本试剂盒是在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）的酶反应下，生成2DG6P成比例地生成NADPH，然后NADPH发生氧化生成荧光基质后就可以测定荧光物质的荧光强度。

◆优点・特色

●　检测2-deoxyglucose (2DG) (葡萄糖类似物) 摄入的总量 

●　葡萄糖，2DG被细胞摄取后，在己糖激酶作用下，迅速磷酸化为2-脱氧葡萄糖-6-磷酸（2DG6P）。

●　而2DG6P在细胞内聚集，不会发生进行代谢。

●　细胞裂解物中的2DG6P在耦合酶作用下，产生荧光信号，其强度与2DG6P的量正相关。

●　利用已知2DG6P的标准曲线，对照检测的荧光强度计算样品2DG水平

相关产品比较

◆案例・应用

试剂盒组成

该试剂盒可进行100次反应

需要准备：

●　超纯水（蒸馏水）

●　2-deoxyglucose 建议产品

●　牛血清白蛋白建议产品

●　96-well黑色多孔板 

●　96-well荧光酶标仪 （激发波长540nm 荧光波长590nm）

●　超声波细胞裂解装置

胰岛素刺激3T3-L1细胞分化后2DG的摄取情况

※具体操作见“相关资料”

胰岛素刺激3T3-L1细胞分化及样品制备

       对于您实验的细胞，需要根据细胞本身的情况优化培养基和各项条件，如实际浓度、培养时间及其他实验相关参数。
       以下是标准12孔培养板的3T3-L1细胞操作步骤。

试剂和培养基
･Serum-free culture medium
･Krebs Ringer Phosphate HEPES (KRPH) buffer at 37°C
(1.2mM KH2PO4, 1.2mM MgSO4, 1.3mM CaCl2, 118mM NaCl, 5mM KCl, 30mM Hepes, pH7.5)
･BSA (essentially fatty acid free and globulin free grade, use Sigma Ca. No. A0281 or equivalent)
･2-Deoxy-D-glucose (2DG) solution
･ Insulin solution
･ PBS(-)
･Phloretin or Cytochalasin B (or other glucose uptake inhibitor)

细胞样品制备

1) Differentiate 3T3-L1 cells to adipocytes in a 12-well culture plate.

2) Replace culture media with serum-free medium. Return to incubator for 6 hours.

3) Gently wash cells 3 times with 1.5mL of warm KRPH buffer without BSA?.

4) Gently add 3mL of warm KRPH buffer containing 2% BSA.

加入胰岛素

5) For this example, insulin is added to a final concentration of 1μM .

6) Incubate cells for 18 min at 37°C.

加入2DG

7) For this example, 2DG is added to a final concentration of 1mM.

8) Incubate cells at 37 C for 20 minutes.

9) Wash cells gently 3x with cooled PBS containing 200μM Phloretin to inhibit further 2DG uptake.

细胞裂解及样品制备

10) Add 1.5mL of 1x Sample Diluent Buffer.and lyse cells by sonication with a microtip sonicator.

11) Collect cell lysate to tube, and apply heat treatment at 80°C for 15 minutes.
　　　　Note: Do not add protease inhibitors to cell lysates.
　　　　Note: If an alternate method for cell lysis will be used, do not use NaOH as NaOH degrades 2DG6P.

12) Centrifuge lysates at 15000 x g for 20minutes at 4°C

13) Transfer cell lysate supernatants to a fresh tube. These cell lysate supernatants are your experimental samples.
　　　　Note: Supernatants can be stored at -20°C for later analysis.

检测细胞裂解液中的2 DG
 　　14) Follow the procedure of [Section III-1] “2DG Measurement Protocol” above.

【参考文献】

[1];Yamamoto N, et al ,(2006). A nonradioisotope, enzymatic assay for 2-deoxyglucose uptake in L6 skeletal muscle cells cultured in a 96-well microplate. Anal. Biochem. 351: 139-145.

蛋白胨

多聚蛋白胨

HIPOLYPEPTON

◆概要

　　本品是牛奶酪蛋白经过酶降解后纯化、烘干而成的粉末，易溶于水，不溶于乙醇或乙醚。

◆标准值

◆应用

1） 本产品是收录于日本药典和生物制品标准，是无菌实验培养基的氮源的最佳选择。另外可用于卫生检验方法中饮用水和食品卫生检查指标中的微生物检测用培养基

2） 因其含有大量色氨酸，用于吲哚生成实验能得到良好的实验结果。

3） 还可用于对酪蛋白酶降解产生蛋白胨来说必不可少的Dubos &Middlebrook的结核菌培养基，以及其他微生物的大量培养基

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多聚蛋白胨 S

HIPOLYPEPTON S

◆概要

　　本产品是脱脂大豆经过酶降解后纯化、烘干而成的植物性蛋白胨粉末，易溶于水，不溶于乙醇或乙醚。

◆标准值

◆应用

1） 补充多聚蛋白胨（适用于日本药典酪蛋白制造的蛋白胨）性能时使用；

2） 广泛应用于微生物的培养，也适用于药用真菌、植物病原真菌、沙门氏菌、奈瑟氏菌、梭状芽孢杆菌等生长困难的细菌培养。

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多聚蛋白胨 N

HIPOLYPEPTON N

◆概要

　　本产品是大豆提纯产品经过微生物来源的酶降解后纯化、烘干而成的植物性蛋白胨粉末，其性能与多聚蛋白胨相同。

◆标准值

◆应用

非动物性蛋白胨，用途和多聚蛋白胨相同。

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多聚蛋白胨 NS

HIPOLYPEPTON NS

◆概要

　　本产品是使用微生物酶降解大豆提纯产品后纯化、烘干而成的植物性蛋白胨粉末。性能和多聚蛋白胨S相同。

◆标准值

◆应用

非动物性蛋白胨的用途和多聚蛋白胨S相同。

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高酪蛋白酸“DAIGO”

HICASAMONO ACIDS DAIGO

◆概要

　　本产品是牛奶酪蛋白的酸降解物。其中，蛋白质几乎均被分解成氨基酸，而且几乎不含蛋白质以外的营养源和生长因子。它可用作细菌生理学、遗传学等基础领域里使用的培养基的纯氮源，或作为定量维生素（特别是Ｂ12）培养基里的氮源。还可以像MH琼脂培养基等不适合酶消化蛋白胨使用的培养基作为营养源来使用。

◆标准值

蛋白胨和酵母粉

多聚蛋白胨

HIPOLYPEPTON

参考文献：

1） 坂崎利一等：新细菌培养基学讲座 · 上（第2版）， 培养基素材 P115，1986. 近代出版

2） 生物制品标准：一般试验法、2004

3） 日本食品卫生协会：食品卫生检查方针、微生物篇、2004.

4） 水野伝一等：药局10（8），921,1959   

蛋白胨、肉类提取物、琼脂

5） 水野伝一等：日本细菌学杂质15（1），114,1960

培养基素材成分的各问题

6） R.J.Dubos et al：Am.Rev.Tuber.，56,334,1947

Media for tubercle bacilli.

7） 外村健三等：日本发酵协会会刊21（4），129,1963

米曲菌内的α-Amylase.（II）磷肽对α-Amylase脱离的促进作用

8） 山本昭夫等：日本细菌学杂质24（8），359,1969

关于破伤风类毒素副作用的相关研究（I）

培养基材料生成毒素的促进效果和过敏原性

多聚蛋白胨 S

HIPOLYPEPTON S

参考文献：

1） 坂崎利一他：新细菌培养基学讲座 · 上（第2版），  培养基素材 P115，1986. 近代出版

高酪蛋白酸“DAIGO”

HICASAMONO ACIDS DAIGO

参考文献

1） 坂崎利一等：新细菌培养基学讲座 · 上（第2版），  培养基素材 P115，1986. 近代出版

自然免疫研究、生物防御功能研究

LPS（细菌脂多糖）

　　LPS（细菌脂多糖、内毒素）是存在于革兰氏阴性菌外膜的成分。在各个生物活性表达和细胞间通讯承担着重要功能。近年来关于运用LPS进行自然免疫研究、生物防御功能研究的话题比较热烈。LPS被利用于各种炎症反应的诱发实验。

　　大肠杆菌LPS可作为肠道出血性大肠杆菌感染症状诊断的抗原。空肠弯曲杆菌被认为是神经系统疾病格林巴利综合征的发病因子。此细菌LPS是从上述综合征病人的空肠弯曲杆菌中提取而来的。立克次氏体及变形杆菌的LPS上的O抗原具有通用构造。从变形杆菌三种类型得到的LPS可作为立克次氏体感染症（疹病，斑疹伤寒，恙虫病）诊断法Weil-Felix反应的抗原。

　　幽门螺杆菌与胃炎、胃溃疡以及胃癌的诱发与恶化有关联。此LPS是从胃溃疡患者体内幽门螺杆菌提取而来。牙龈卟啉单胞菌是牙周病菌的一种。有报道称通过TLR2和TLR4来进行信号传导。铜绿假单胞菌对抗生素具有相对抗性，是医院感染和机会感染的病原菌。

　　百日咳菌是呼吸道感染症中百日咳的病原菌。百日咳菌的LPS与大肠杆菌的LPS不同，不具有O抗原，具有LAL活性，有丝分裂原活性、发热、巨噬细胞活性化、TNF诱导等多种生物活性。

<LPS委托生产>

　　Wako推出对下文未记载的革兰氏阴性菌LPS提取·纯化的委托生产项目。另外包括革兰氏阴性菌的获取，菌体培养等。

　　有需要请联系我们。

◆特点

　　利用不同的制作方法分别制备两种类型的产品。

●　【苯酚提取产品】Westphal法（苯酚提取法）提取产品。

●　【超离心产品】苯酚提取法和超离心2次纯化产品。

◆产品列表

●　E. coli　　O26、O55、O86a、O103、O111、O113、O127、O128、O150、O157

●　Campylobacter jejuni　　Penner O:19

●　Salmonella typhimurium、Salmonella typhimurium G30/C21

●　Salmonella minnesota　　1114、R595

●　Proteus vulgaris　　OX2、OX19

●　Proteus mirabillis　　OXK

●　Helicobacter pylori 　　GU2、CA2

●　Porphyromonasgingivalis

●　Pseudomonas aeruginosa　　PAO1

●　Bordetella pertussis　　Tohama

使用文献

1. Desaki, Y. et al.. : Plant Cell Physiol., 47(11), 1530(2006).

2. Ueda, Y. et al. :Anticancer Res., 26, 4063(2006).

3. Kamachi, F. et al. :J. Pharmacol. Exp. Ther., 321(1), 345(2007).

4. Soliman, M. M. et al. :Asian J. Biochem., 4(2), 60(2009).

5. Kono, K. et al. :Am. J. Physiol. Renal Physiol., 296, F328(2009).

6. Sritularak, B. et al. :J. Med. Plant. Res., 4(5), 387(2010).

7. Kobayashi, H. et al. :Microbiol. Res., 167, 48(2011).

8. Sato, K. et al. :Glycative Stress Research, 1(1), 1(2014).

9. Miyashita, A. et al. :J. Biol. chem., 289, 14412(2014).

10. Shin, M. et al. :Food Chem., 155, 50(2014).

11. Mori, R. et al. :Am. J. Pathol., 184, 2465(2014).

12. Nagasaki, T. et al. :Br. J. Cancer, 110, 469(2014).

13. Shintani, M. et al. :Food Nutr. Sci., 6, 1115(2015).

14. Koshimoto, M. et al. :Biosci. Microbiota Food Health, 34, 11(2015).

◆日立氨基酸分析仪配套试剂-氨基酸混标-适用于氨基酸分析仪或HPLC检测

◆混标成分

查看相关资料，请点击：http://www.boppard.cn/product/show/63.html

过敏原ELISA试剂盒Ⅲ-鸡蛋

　　特定原材料（食物过敏原）检测试剂盒FASTKIT系列，变更提取液后新发售了第三代「FASTKIT ELISA Ver.Ⅲ」。

　　原提取液含有医药用外毒物成分，现提取液不含该成分，因此无需特别的毒物管理。

◆特点

● 　使用不含医药用外毒物的新抽提液

　　　　新提取液不含剧毒成分，无需毒物管理。

●　 性能与实验步骤与旧产品相同

　　　　与FASTKIT ELISA Ver.Ⅱ具有同等性能，且操作方法不变。

● 　适用于原材料、加工食品等广范围

　　　　可高精度定量检测。

◆与旧产品（FASTKIT ELISA Ver.Ⅱ）的相关性（项目：鸡蛋）

　　使用旧产品（FASTKIT ELISA Ver.Ⅱ鸡蛋）和FASTKIT ELISA Ver.Ⅲ鸡蛋（以下称本试剂盒）分别定量多个食品中的鸡蛋蛋白质。旧产品的定量值为X轴，本试剂盒的定量值为Y轴，比较其相关性。

　　结果，得到的显示相关性的斜率以及相关系数分别为0.75－1.25（倾斜度）、R＝0.9以上（相关系数）。

【食品检测一览表】

◆产品列表

◆相关产品

SNT 1961 3-2012 食品中过敏原成分检测方法 第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分