Controllable NOdonor<NO-Rosa5>

在任意范围、时间通过可视光照射释放NO的试剂

Controllable NOdonor<NO-Rosa5>是通过黄绿色可视光（530~590 nm）的照射释放出一氧化氮（Nitric oxide，NO）的Photo-controllable NO donor。利用光毒性低的可视光照射可以在时间空间上控制NO的释放，有利于各种细胞内信号传输相关的NO生理现象研究。

※本产品仅供科研使用。

※本产品基于名古屋市立大学的中川秀彦教授的研究成果商品化而成。

◆Memo

关于NO研究中Photo-controllable NO donor的意义及问题点

虽然一氧化氮是分子量仅有30的气体分子，但是在生物体内作为信号传输物质而发挥作用，因此阐明其生理意义是一项重要的课题。下文阐述了一些与NO研究相关的生理现象。

●　血管舒张（vasodilation）

●　神经传输（neurotransmission）

●　血小板黏附（platelet adhesion）

●　炎症反应（inflammation）

NO的气体分子是通过生物体内的NO合成酶产生，但在生理条件下极其不稳定，半衰期约为几秒左右。因此，NO被认为是在生物体内产生后，仅在非常狭小的范围（<100 μm）内起作用的局部信号传输物质，因此，期待能够阐明NO作为媒介参与的局部信号传输的意义。然而，由于NO是不稳定的气体分子，难以用于实验中，于是NO donor便被用于验证NO生理效果。

NO donor是在水溶液中分解，并缓慢释放NO的化合物群的总称。不同NO释放效率以及半衰期各异的化合物被开发成各种产品。然而，使用以前的NO释放剂，会使实验溶液全部均一地释放出NO，导致很难观察到原来的NO作用于局部的瞬时效果。为了解决该问题，近年来已开发出几种光反应性的NO donor如“Photo-controllable NO donor”，1） 需要UV光的试剂类，或2） 主要使用金属络合物的试剂类，但无论哪种都有难以适用于活细胞实验的缺点（参照表格）。

名古屋市立大学的中川秀彦教授等人克服了至今的问题，成功开发出不含金属络合物，毒性低且能在时间空间上控制NO释放，并通过可视光控制的Photo-controllable NO donor——NO-Rosa5（Controllable NOdonor）。使用本产品，可以在任意时间以及任意局部控制NO释放，作为研究NO的新工具而备受期待。

◆参考文献

◆原理

本试剂将Rosamine色素骨架用作光吸收天线，在吸收黄绿色光（530~590 nm）时，诱导光致电子转移(PeT: Photoinduced electron Transfer)，释放出NO。

◆特点

●　通过黄绿色光（530~590 nm；最大吸收λmax～560 nm）引发NO释放。

●　非光照射时，NO释放量被抑制在极其微小的程度^*1 。

●　推荐使用浓度10 μM，未发现细胞毒性。

●　已验证了在培养细胞系，ex vivo主动脉血管舒张实验中的生物活性。

●　已证实显微镜的543 nm射线（He- Ne射线）以及氙灯可作为光源使用。

*1 请务必注意实验中的环境光线。

◆操作方法概要

※以下实验步骤仅供参考。请根据具体实验目的进行探讨。

1.　制备含有Controllable NOdonor的培养基

2.　去除培养基

3.　更换含有Controllable NOdonor的培养基^*2

4.　培养30分钟以上

5.　在任意时间、部位进行光照，然后进行各种成像^*3 或生化学分析

*2 也可不更换培养基，直接添加Controllable NOdonor。

*3 各种成像中使用荧光物质作为检测系统时，需要注意荧光物质的选择。详见下文中的“实验指导”。

实验注意

本产品有可能因实验环境的光线（室内荧光灯或阳光）分解，释放出NO。在制备溶液以及进行实验时尽量保持避光。

◆应用实例

 ■　通过NO电极定量NO释放活性

作为in vivo NO释放模型，用黄绿色光（530~590 nm带通滤波器）照射含10 μM Controllable NOdonor、100 mM HEPES（pH7.3）、0.1% DMSO的溶液，通过NO电极定量释放的游离NO浓度。连续300秒照射时，最大可观察到4 μM的NO（左）。照射时间每20秒脉冲一次时，则可观察到阶段性的NO释放。随着试剂消耗，NO的释放量也逐渐减少（右）。

 ■　使用NO检测试剂实现NO释放活性可视化

用绿色荧光NO检测试剂DAF-FM（10 μM）前处理HEK293T细胞30分钟后，用PBS清洗细胞，在添加Controllable NOdonor的条件下培养30分钟。使用NO检测试剂DAF-FM的荧光强度观察氙气光源（带通滤波器 530~590 nm）照射前后细胞内的NO量。由于光照后DAF-FM的荧光强度显著增强，可以看出通过光照促使NO释放。

 ■　通过局部的光照使特定部位释放NO

用荧光NO检测试剂DAF-FM DA（10 μM）前处理HEK293T细胞30分钟后，用PBS清洗细胞，在添加Controllable NOdonor的条件下培养60分钟。使用共聚焦显微镜的543 nm射线光照白圈部分（直径31 μm），通过DAF-FM检测NO的释放。可以确认仅白圈部分释放出NO。使用本试剂，可通过光在时间空间上控制NO的释放。

 ■　ex vivo 血管舒张实验

将分离的大鼠主动脉切片浸于填满Krebs缓冲液的Magnus 试管中，并添加抑制内源性NO产生的NO合成酶抑制剂L-NAME（100 μM）。接着，添加去甲肾上腺素（10 μM）使血管进入收缩状态。即使用绿光（530~590 nm）照射3分钟，也未发现光自身对血管收缩有效果（图中①）。但添加Controllable NOdonor（10 μM）后照射绿光则可观察到明显的血管舒张（图中②④）。停止光照后，再次发现血管收缩（图中③⑤）。虽然sGC（soluble guanylyl cyclase）-cGMP路径参与NO引起的血管舒张，但在该状态下添加sGC抑制剂ODQ（10 μM）的话，绿光照射也能抑制血管扩张（图中⑥）。实验结果可以看出使用Controllable NOdonor通过光照能够控制血管舒张。

 ■　评价细胞毒性

向HEK293T细胞中分别添加10（推荐浓度）、30、100 μM的Controllable NOdonor并培养48小时后，使用WST-8分析评价细胞存活率。30 μM以下的细胞存活率得以维持，但在高浓度的100 μM中发现了细胞毒性。本试剂推荐使用10 μM。

◆实验指导

光谱信息

Controllable NOdonor拥有下图所示的吸收和荧光光谱。530~590 nm的光照可以有效地释放出NO。另外，由于含有Rosamine骨架，请注意在500~600 nm的光照下激发，会观察到红色荧光。

荧光染料选择指导

由于Controllable NOdonor在500~600 nm光照下会释放NO，在实验中同时使用荧光物质（荧光色素，荧光检测试剂，荧光蛋白等）时，请务必注意以下几点。建议提前探讨Controllable NOdonor的荧光特性是否会影响目的荧光物质的观察。

（1）避免使用红色荧光物质

原因如下，在500~600 nm范围内不推荐使用含有激发波长的红色荧光物质。

1.　通过激发光的照射，诱导Controllable NOdonor的NO释放。

2.　观察到Controllable NOdonor的Rosamine骨架来源的荧光。

（2）可同时使用的荧光物质

以下波长范围的荧光物质可以与Controllable NOdonor同时使用。

激发波长<500 nm的荧光物质（蓝色荧光物质或绿色荧光物质等）

激发波长>600 nm的近红外荧光物质

※确认NO的释放推荐使用绿色荧光NO检测试剂DAF-FM DA

超价碘氧化

◆Dess-Martin氧化

●超价碘的乙醇氧化试剂

●可进行第一级、第二级乙醇氧化

●乙醇第一级酸化可用乙醇选择性停止

●官能团忍受性很高，广泛用于天然物的合成

反应例子^{【a】【b】}

◆Pre-MIBK

●　超价碘的乙醇氧化催化剂

●　与DESS-MARTIN/IBX氧化剂相比安全、便宜实惠

●　可用OxoneⓇ的添加量来控制甲醛/羧酸的选择性氧化

●　反应后将OxoneⓇ过滤

反应例子^{【c】【d】}

Pesticide Mixture Standard Solution PL-9-2 (each 20μg/ml Acetone Solution)

农药混合标准溶液 PL-9-2 (各20μg/ml丙酮溶液中)

日本肯定列表制度中的同时实验法农残混标

共17种成分，各20μg/ml，溶剂：丙酮

◆成分表

◆产品信息

◆相关产品

抗Atg7单克隆抗体（克隆号：ATG7-2）

Anti Atg7 (Clone: ATG7-2) Monoclonal antibody

◆背景

　　自噬是进化保守的一种细胞机制，自噬体和溶酶体融合并且降解细胞质内物质再利用的过程。自噬参与了许多生理过程，如发育、感染、癌症和神经退行性疾病。ATG（自噬相关）基因通过酵母的基因筛选被鉴定出来。Atg7作为E1样酶在Atg12和 Atg8两个类泛素结合系统中发挥作用。Atg7转移Atg12到E2样酶Atg10，并且使Atg12 结合到Atg5。另一方面，Atg7转移Atg8到另一个E2样酶Atg3，并且使Atg8结合到磷脂酰乙醇胺。在哺乳动物中这些Atg基因大部分都是保守的。Atg7缺陷的新生儿由于无法耐受围产期饥饿，会在产后很快死亡。在神经系统中Atg7的条件缺失会导致含泛素聚集体的神经退行性疾病。

◆应用

　　样本：Hela细胞裂解物

[1]   Klionsky and Emr, Autophagy as a regulated pathway of cellular degradation. 2000,

       Science, 290, 1717-21 PMID: 11099404

[2]   Mizushima et al., Autophagy fights disease through cellular self-digestion. 2008, Nature,

        451, 1069-75 PMID: 18305538

[3]   Tsukada and Ohsumi, Isolation and characterization of autophagy-defective mutants of 

       Saccharomyces cerevisiae. 1993, FEBS Lett, 333, 169-74 PMID: 8224160

[4]   Komatsu et al., Impairment of starvation-induced and constitutive autophagy in Atg7-deficient 

       mice. 2005, J Cell Biol, 169, 425-34 PMID: 15866887

[5]   Komatsu et al., Loss of autophagy in the central nervous system causes neurodegeneration in mice.

        2006, Nature, 441, 880-4 PMID: 16625205

冷藏运输试剂盒 

安全运输小鼠附睾尾和胚胎的装置

窗体底端

◆背景简介

       CARD 冷藏运输试剂盒是为了能经济安全地低温运输小鼠的附睾尾而专门研发的产品。使用CARD冷冻运输试剂盒能降低活鼠运输成本，同时降低小鼠在输送中死亡和逃跑的风险，使用者也能防止病菌传播。

◆优点・特色

●　CARD冷藏运输试剂盒通过3重防护 (冰袋,保温瓶,泡沫运输箱)来确保内置物品的温度。

●　CARD冷藏运输试剂盒的设计能刚好容纳制冷剂・保温瓶・外箱及输送的样品，不留多余空隙，防止

运输过程中摇晃，保障运输的安全性。

制剂盒的组成

CARD冷藏运输试剂盒安全运送附睾尾和胚胎。

◆案例・应用

用法1: 不需要雄性活鼠，只需要雄性小鼠的附睾尾就能轻易地繁殖幼鼠。用我们的冷藏运输试剂盒运送小鼠的附睾尾，安全又经济。在FERTIUP^®小鼠精子预孵培养基里预孵从附睾尾中取出的精子，然后把预孵后的精子加入到CARD MEDIUM^®里进行体外受精，最后移植所得的胚胎至代育小鼠体内。

用法2: 通过使用CARD 冷藏运输试剂盒运送小鼠胚胎。低温运送胚胎而不是活鼠，胚胎将会移植到代育小鼠的体内，就能简单地繁殖幼鼠。

我们推荐“CARD 冷藏运输试剂盒"用于冻存运输附睾尾。(Cat#. KYD-007-EX)" .

<小鼠生殖工程技术指南> 

冻存小鼠精子
(使用FERTIUP^®Cryoprotectant冻存液、mHTF培养基、精子吸管、吸管接头和冷冻罐)
使用复苏精子进行体外受精
(使用FERTIUP^® Preincubation medium预孵培养基、CARD MEDIUM^®体外受精培养基、mHTF 培养基和吸管接头)
低温采集运输附睾尾

(使用Cold Transport Kit冷藏运输试剂盒)
使用低温运输的附睾尾精子进行体外受精
(使用FERTIUP^®Preincubation medium预孵培养基： PM 和mHTF培养基)
低温运输2-细胞期胚胎
(使用Cold Transport Kit冷藏运输试剂盒M2 和 KSOM)
体外受精
(使用FERTIUP^® Preincubation medium预孵培养基、CARD MEDIUM^® 体外受精培养基和mHTF培养基)
简易的玻璃化冷冻保存小鼠胚胎
(使用DAP213 和 DMSO)
胚胎移植入输卵管
用以前保存的冻存精子进行体外受精
(使用FERTIUP^®Preincubation medium预孵培养基: PM, CARD MEDIUM^® 体外受精培养基和mHTF培养基)
复苏玻璃化冷冻后的胚胎的步骤
(使用0.25M 蔗糖and KSOM)
在氮气安瓿瓶里存储试剂和相关处理方法

玻璃化冷冻小鼠卵母细胞

(使用mHTF培养基)
试剂的组成

1M DMSO, DAP213, 0.25M蔗糖, mHTF培养基和 KSOM

相关资料

FERTIUP^®和CARD MEDIUM^®系列

ARK and KYD-宣传页	CARD&FERTIUP-宣传页	HyperOva-宣传页

使用方法

请按照以下指南，低温运输附睾尾及胚胎。

请利用快递（冷藏）运输样品。

另外推荐用温度数据记录器（KM实验室研发的超小型温度记录仪）来调节温度；

■在线指南

用冷藏运输的小鼠附睾尾进行体外受精方法

用冷藏运输试剂盒运输附睾尾

用冷藏运输的附睾尾进行体外受精

（使用FERTIUP^®（小鼠精子预孵育培养液）和CARD MEDIUM^®）

小鼠2细胞期胚胎的冷藏运输

2细胞期胚胎的冻存・输送

复苏冷藏运输的2细胞期胚胎

【参考文献】

[1]Takeo T., Kaneko T., Haruguchi Y., Fukumoto K., Machida H., Koga M., Nakagawa Y., Takeshita Y., Matsuguma T., Tsuchiyama S., Shimizu N., Hasegawa T., Goto M., Miyachi H., Anzai M., Nakatsukasa E., Nomaru K., and Nakagata N. 2009. Birth of mice from vitrified/warmed 2-cell embryos transported at a cold temperature. Cryobiology. 58(2): 196-202

[2]Takeo T., Kondo T., Haruguchi Y., Fukumoto K., Nakagawa Y., Takeshita Y., Nakamuta Y., Tsuchiyama S., Shimizu N., Hasegawa T., Goto M., Miyachi H., Anzai M., Fujikawa R., Nomaru K., Kaneko T., Itagaki Y., and Nakagata N. 2010. Short-term storage and transport at cold temperatures of 2-cell mouse embryos produced by cryopreserved sperm. J Am Assoc Lab Anim Sci. 49(4): 415-419.

显色法检测组胺试剂盒

　　组胺多数产生于金枪鱼，鲣鱼，鲭鱼此类海鲜的腐败过程中。

　　对于以生鱼（鲜鱼、冷冻鱼肉）为原料的食品来说，为了防止组胺过量而导致过敏性中毒，对于食品组胺浓度测定的管理是很重要的。

　　但是，以前的组胺检测需要耗时一天，检测费用高，需要使用大型检测设备。如果用显色法组胺检测系统，生鱼（鲜鱼、冷冻鱼肉）的组胺含量检测可以快捷地完成。

获奖情况：

　　2007年日本水产学会的水产技术奖

　　2014年日本酱油协会的日本酱油技术奖（应用部门）

◆特点

　　●　简单： 前处理操作简单，可以省略荧光光谱法和高效液相色谱法那样测定障碍物质复杂的前处理操作。由于酶的特异性高，无需使用强酸或有机溶剂，任何对象均可简单、安全地分析

　　●　迅速： 利用具有高组胺特异性的组胺脱氢酶的酶法来检测。如果是生鱼，检测和提取过程仅需要1个小时即可得到结果。

　　●　廉价： 用廉价的试剂和检测器就可检测，免除了仪器成本。

◆测定原理

　　组胺含有1－Methoxy PMS的情况下，添加组胺脱氢酶会被特异性分解。此时因产生的电子转移会通过四唑盐显色，便可以在470nm上下测量吸光度，计算组胺浓度。

◆性能

　　●　特异性：即使样本中含有尸胺和腐胺等其他的胺类也不影响检测结果。

　　●　测定范围：0.4-6ppm生鱼样本换算10-150ppm（稀释25倍）。

　　●　测定时间：各试剂注入后约20分钟。

◆试剂盒内容

（60次测定：10次×6）（2-8℃保存）

注意：

　　●　测定仪器请使用分光光度计（可检测到470nm左右） 。 *如需仪器推荐：分光光度计B

　　●　此试剂除了自主卫生检查和研究用途以外不用。

◆宣传彩页

显色法检测组胺试剂盒

◆操作视频

请点击链接观看视频：http://www.boppard.cn/resources/show/43.html

其他组织样品的组胺检测试剂盒（欲了解详情请点击文字）

Q&A导读：

◆关于组胺

◆关于龟甲万的组胺检测法

◆关于显色法组胺检测试剂盒

◆关于从样本中提取组胺

◆关于检测值有误的问题

◆关于组胺

Q1：　什么是组胺？

A1：　一种由组氨酸（氨基酸）合成的胺。如果红身鱼（金枪鱼，秋刀鱼，鲣鱼，竹荚鱼，青花鱼等）等含有大量

　　　 组氨酸的食物，被组胺菌污染的话，会产生组胺。

　　　 另外，一般来说，人的喉咙和鼻粘膜上皮都存在着很多肥大细胞、嗜碱性粒细胞等。一旦数量过多，也会引

　　　 起过敏症状。

Q2：　什么是过敏性食物中毒（组胺中毒）？

A2：　红身鱼被组胺菌污染的原因是，食品在制造加工、运输时，在家庭等地方的保存温度管理不当时，组胺菌繁

　　　 殖增多，产生大量组胺。（参照：Q1.什么是组胺？）

　　　 组胺非常耐热，一旦生成，普通的加热处理无法使它分解，还是会残留在鱼肉里。因此，人们食用了被组胺

　　　 污染的鱼或其加工食品，可能会出现过敏症状。在食品安全学上，这种症状被称为过敏性食物中毒（组胺中

　　　 毒）。

Q3：　食物中含有多少组胺时，会引起食物中毒？

A3：　一般来说，食物的组胺含量超过100mg/100g＝1000ppm以上的话，会引起食物中毒。

　　　 组胺是会引起过敏反应，胃酸分泌，血压等各种生理反应的化学物质。因此，摄取高浓度组胺的话，约30分

　　　 钟~60分钟后，会出现面部、特别是嘴巴周围以及耳垂的泛红症状，还会出现头痛，荨麻疹，发热等。一般

　　　 经过6~10小时后会恢复正常。

Q4：　对于食物中含有的组胺量标准，是否有相关规定？

A4：　日本：没有相关法制规定。

　　　 欧美：有相关规定。因此，出口到欧美国家的食品，必须要严格遵守规定。

Q5：　有什么方法可以检测组胺量？

A5：　检测鱼肉中的组胺量方法：生物检测技术，比色法，荧光法，高速色谱法（HPLC），抗原 – 抗体反应和毛

　　　 细管电泳等。

　　　 一般来说，日本是使用卫生检测法的HPLC法；美国则是使用荧光光度法（被记载于国际标准—-AOAC法

　　　 内）。

◆关于龟甲万的组胺检测法

Q1：　龟甲万的组胺检测法与其他检测法相比有什么优点？

A1：　・提取组胺的方法简单，无需进行除去阻碍检测物质的前处理。

　　　 ・与HPLC法、其他公司的同类产品相比，操作更简单。

　　　 ・可以快速、精准度高地检测组胺。

　　　 ・与HPLC法有着很高的相关性。

Q2：　需要什么仪器或器具？

A2：　必需：组胺检测试剂盒（显色法检测组胺），分光光度计。

　　　 其他：请阅读说明书的第一页右下角（试剂盒所需的器具）。

　　　 注意：请使用塑料器具。因为组胺会附着在玻璃上。

Q3：　一般的分光光度计也可以检测吗？

A3：　可以。但需要是可以检测460nm上下的吸光度的分光光度计。

　　　 注意：推荐使用的分光光度计（分光光度计BABS-B470，共立理化学研究所公司所制）的光路是2cm。

　　　 如果使用光路是1cm的分光光度计，一旦超出组胺的检测界限，标准溶液的检测值也会变化。

　　　 详情请阅读说明书：第一页左方— [试剂盒性能] 和 第2页右方—5）标准值的检测。

◆关于显色法组胺检测试剂盒

Q1：　显色法检测组胺试剂盒的检测浓度范围？

A1：　使用推荐的分光光度计B：可以检测的组胺浓度是0.4-6ppm。如果是检测生鱼，罐头鱼等，将样品稀

　　　 释25倍，再换算样品的浓度，可以检测组胺的范围是10-150ppm。

　　　 光路长1cm的分光光度计：可以检测的组胺浓度是0.8-12ppm。

　　　 如果是检测生鱼，罐头鱼等，将样品稀释25倍，再换算样品的浓度，可以检测组胺的范围是

　　　 20-300ppm。

　　　 此外，若样本的组胺浓度超过检测范围的话，可以稀释样本后，再检测。

Q2：　1盒显色法组胺检测试剂盒可以检测多少个样本？

A2：　本试剂盒可以检测60次。但是，在实际的检测中，每进行一次连续的检测，就需要检测一次标准值。因

　　　 此根据每次连续检测的样本数的不同，一个试剂盒可以检测的样本数也不同。

　　　 例如：

　　　 如果一次的检测就把试剂盒用完的话，除去检测一次标准值之外，实际可以的样本数为59个。

　　　 如果每次检测的样本数为5个的话，再加上每次都需要检测一次标准值。实际可以检测的次数为10次，即

　　　 可以检测的样本数为50个。

　　　 注意：在一次连续的检测中，将没用完的冷冻、冷藏后的试剂替换成新的试剂时候，请再次重新检测标准

　　　 值。

Q3：　如果没有可以调制组胺提取溶液的设备，可以买其他的代替吗？

A3：　不好意思，无法提供组胺提取液的购买。若调制溶液时遇到问题，可以使用其他替代品，详情请咨询金畔。

Q4：　如何保存溶解后剩下的显色试剂？

A4：　最好可以一次性用完溶解后的显色试剂。

　　　 如果真的用剩了，请在按以下方法进行保存：

　　　 冷藏：2～8℃，可保存一周

　　　 冷冻：-10℃以下，可保存一个月。

　　　 在以上保存的情况下，冻结溶解操作只可进行3次。

　　　 （详情请阅读说明书第二页左方 “2.试剂的调制（显色试剂）”）

　　　 解冻时，请在流水中快速进行。解冻完请一定要冷却后再使用。

Q5：　如何保存溶解后剩下的酶试剂？

A5：　最好可以一次性用完溶解后的酶试剂。

　　　 如果真的用剩了，请在按以下方法进行保存：

　　　 冷冻：-10℃以下，可保存一个月。冻结溶解操作只可进行3次。（详情请阅读说明书第二页左方 “2.试剂

　　　 的调制（酶试剂）”）

　　　 还有，当用完冷冻溶解后的酶试剂后，换成新的酶试剂时，请重新检测标准值。

◆关于从样本中提取组胺

Q1：　为什么从活鱼提取组胺时，需要进行煮沸处理？

A1：　因为组胺是存在于鱼肉成分(肌肉蛋白、油等)中，所以加热后再提取，效率更高。而罐头类食品本身已经过

　　　 加热处理了，提取时不需要再煮沸。

Q2：　如果不能立刻检测样本，或者是已提取了组胺的样本的话，应该怎样做？

A2：　活鱼：请冷冻保存。保存方法没有什么需要注意的点，不过为避免解冻时的酶反应发生得太快，请尽快完

　　　 成解冻。

　　　 ・经过煮沸提取组胺，再过滤后的样本，可以进行放入冷藏、冷冻格里保存。

　　　 ・组胺提取没有经过煮沸的样本，以及对样本进行前处理的时候，由于样本中含有酶，需要进行冷冻。解

　　　 冻的时候，如果有沉淀物出现的话请用滤纸等进行除去。

Q3：　听说样本中含有杂质时，是不能进行检测的。那么杂质是什么物质？

A3：　影响组胺检测试剂盒反应的杂质是氧化还原物质。

　　　 鱼粉：饲料不新鲜时，由此而增殖的微生物形成的氧化还原物质就是杂质。

　　　 罐头：调味料可能具有氧化还原能力。

Q4：　如果样本有杂质，检测值是偏高还是偏低？

A4：　如果还原物质多的话，检测值会偏高，如果氧化物质多的话，检测值会偏低。因此检测值是偏高还是偏低，

　　　 是根据两种物质的比例来决定的。氧化还原物质是抗氧化物质（维生素和细胞色素等）或者是氧化物质，在

　　　 食品中以多种类的方式存在，因此无法确认是哪个种类物质造成的影响。

Q5：　如何知道样本中是否含有杂质？

A5：　对新的食品进行组胺检测时，可以在样本添加定量的组胺，然后进行检测（添加回收实验）。由此可以知道

　　　 是否有杂质的影响，以及是否需要进行前处理。

Q6：　是否有排除杂质影响的方法？

A6：　鱼肉、金枪鱼罐头、鱼酱油等食品，只要按照说明书操作（一般的操作的提取、检测），是可以除去杂质的

　　　 影响。

　　　 但是，如果使用一般方法，也不能排除杂质影响的话，可以通过稀释样品或固相萃取柱将氧化还原物质进行

　　　 前处理。（详情请咨询金畔）

◆关于检测值有误的问题

Q1：　标准溶液的数值偏低。

A1：　如果使用了溶解后再保存的酶溶液，因为在保存情况下酶活性降低，标准值可能也会降低。但只要达到正常

　　　 数值（0.85）的80%以上，检测就没有问题。

　　　 注意：使用光路为1cm的光度计的时候，检测值达到一半以上即可（0.5左右）。（详情请阅读说明书：第

　　　 二页右方检测5）

Q2：　样本的组胺量比实际要低。

A2：　・样本的均化没有很好地进行。

　　　 （如果样本的均化没有很好地进行，将无法完全地提取组胺）

　　　 ・样本中含有杂质（参考Q.如果样本有杂质，检测值是偏高还是偏低？）

Q3：　样本的组胺浓度超出检测界限。

A3：　稀释组胺提取液后，再次检测。计算出组胺浓度时，注意要考虑稀释倍数，再进行计算。

Q4：　计算样本的组胺量后，得到负数。

A4：　该样本的组胺量，在检测范围的10ppm以下。（使用推荐的仪器分光光度计B的情况下）

　　　 得到负数的原因：

　　　 ・样本中不存在组胺。

　　　 ・组胺浓度在检测范围以下时，因有检测误差，计算样本检测值和样本空白值的差值，得到负数。

　　　 推荐仪器（分光光度计B）的检测范围的下限是10ppm。因此，得到负数是因为，样本的组胺浓度会出现

　　　 10ppm以下。

Q5：　检测完的反应液在放置一阵之后，再次检测后发现，检测值变高。那么，哪个数值才是正确？

A5：　反应结束后的检测值是正确的。

　　　 试剂盒的显色试剂，是通过阳光来显色的。如果把反应液放置在有阳光照射的地方，检测值会变高。因此，

　　　 反应结束后，请迅速进行检测。

Q6：　活的红身鱼在常温下放置了几天。检测后发现，鱼中并不含有组胺。

A6：　红身鱼（金枪鱼，秋刀鱼，鲣鱼，竹荚鱼，青花鱼等）等含有大量的组氨酸的食物，若被组胺菌污染的话，

　　　 会产生组胺。因此，还未被组胺菌污染的红身鱼即使腐烂了，也不会被检出组胺。

阿尔茨海默病研究用

抗β-淀粉样蛋白抗体（BAN50/BNT77/BA27/BC05）

　　β-淀粉样蛋白（Aβ）是由约40个氨基酸组成的多肽，在阿尔茨海默病患者的大脑内大量积蓄，形成老年斑，Aβ被认为是引发阿尔茨海默病的病因之一。Aβ主要的亚型包括Aβ40（40个氨基酸）、Aβ42（42个氨基酸）以及Aβ43（43个氨基酸）。

　　这次，Wako推出了识别不同表位的4个克隆号（BAN 50/BNT 77/BA 27/BC05）的单克隆抗体。

◆特点

●　丰富的文献使用数据

●　提供小包装

◆产品概要

各抗体识别Aβ种类

○有反应  ×无反应

◆使用案例（阿尔茨海默病模型小鼠的免疫组织染色实验）

　　全部抗体均将小鼠脑内积蓄的Aβ染色。

实验条件
●　样品
●　15月龄APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠大脑梨状皮质石蜡切片
●　B6.Cg-Tg(APPswe.PSEN1dE9)85Dbo/Mmjax
●　抗原活化法
●　BAN50/其他同等产品：

●　在乙酸缓冲液（pH6.0）中进行微波处理+蛋白酶 K处理
●　BA27/BC05：甲酸处理
●　抗体稀释率
●　BAN50/BA27/其他同等产品：1/1,000
●　BC05 ：1/100,000
●　二抗　生物素标记抗体
●　检测方法　ABC法＋DAB染色法

●　数据提供：东京大学研究生院医学系研究科 粉川老师、桥本老师、岩坪老师

◆使用案例（阿尔茨海默病模型小鼠的免疫印迹实验（Western Blot））

不溶性Aβ检测

　　全部抗体均被阿尔茨海默病模型小鼠脑裂解液中的不溶性Aβ检测出来。

实验条件
●　样品
●　Lane   1-3： 野生型小鼠大脑的甲酸提取DMSO溶解液
●　Lane   4-6：15月龄的APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠大脑甲酸提取DMSO溶解液
●　B6.Cg-Tg(APPswe.PSEN1dE9)85Dbo/Mmjax
●　还原处理：有
●　使用量：10μL/Lane
●　抗体稀释率：1/1,000

可溶性Aβ检测

　　全部抗体均被阿尔茨海默病模型小鼠脑裂解液中的可溶性Aβ检测出来。

实验条件

●　样品

●　Lane 1-3： 野生型小鼠大脑TBS提取液
●　Lane 4-6： 15月龄 APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠大脑TBS提取液
●　B6.Cg-Tg(APPswe.PSEN1dE9)85Dbo/Mmjax
●　使用量：30μg/lane
●　还原处理：有
●　抗体稀释率：1/1,000

●　数据提供：東京大学研究生院医学系研究科　桥本老师、岩坪老师

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1）  Asami-Odaka, A. et al.: Biochemistry, 34, 10272(1995).

2）  Sambamurti, K. et al. : J. Biol. Chem., 274, 26810 （1999）.

3）  Fukumoto, H. et al. : J. Neurosci., 30, 11157 （2010）.

4）  Takahara, Y., et al.: J. Neurosci., 25, 2, 436(2005).

5）  Iwata, H., et al.: J. Biol. Chem., 276, 21678(2001).

6）  Tomita, T., et al.: J. Neurosci., 19, 10627(1999).

7）  Sudoh, S., et al.: J. Neurochem. 71 , 1535(1998).

8）  Iwatsubo, T., et al .: Am J. Pathol., 149, 6, 1823(1996).

9）  Nunomura, A. et al. : J. Neuropathol. Exp. Neurol., 59, 1011（2000）.