Oxytocin ELISA kit 催产素检测试剂盒

◆原理

催产素是神经垂体表达的一种多肽，分泌在下丘脑的室旁核，并储存在垂体后叶。催产素由9个氨基酸构成，有一个[1-6] 二硫键和一个半胱氨酸。曾被认为是只作用于于女性生殖的激素，现今实验证明，催产素也能作用于神经递质，可能也涉及到神经精神障碍，社交/性行为和对雄性生殖生理有着重要的作用。催产素和相关神经垂体多肽、精氨酸 -加压素，能维持肾积水和钠的平衡。

Ezno提供的催产素ELISA检测试剂盒用比色法，过夜后只需1一个小时就能出结果。吸光度为405nm。不检测加压素，检测结果可信度高。灵敏度高，可检测15 pg/ml的催产素。试剂用不同颜色标记，在实验室中使用时，能减少失误。

该试剂盒灵敏度高，特异性强，可快速、低成本的检测催产素含量。

◆优点・特色

●　特异性强，不会检测加压素，检测结果可信度高。

●　灵敏度高，可检测15 pg/ml的催产素。

●　成本低，和LC/MS方法相比，检测速度更快，花费更低。

●　试剂用不同颜色标记和预包被检测板，使用更方便，减少误操作。

●　大量文献报道

●　可提供大包装

 ◆产品规格

催产素ELISA试剂盒 Q&A

Q：    催产素是否有必要抽提？

A：    Enzo Life Sciences的催产素ELISA试剂盒需要从血清或者血浆样品中进行抽提。需要抽提是由于血清或者

          血浆样品中存在的基质干扰（matrix  reference）,而不是因为预期的基础水平。其他样品没有证实过需要

          进行抽提。

Q：    如果血清或者血浆样品不进行抽提，是否还有另外的方法？

A：    以下方法是从液体中抽提催产素的实验流程

    1.     添加2体积的预冷丙酮到样品中。震荡混匀。

    2.     离心12,000 ×g，20分钟。

    3.     将上清转移到新管中。

    4.     添加5倍体积的预冷石油醚。震荡混匀。

    5.     离心10,000×g，10分钟。

    6.     弃上层的醚。小心转移留下的液体层到玻璃管，用氮气或者氩气进行干燥。

    7.     用assay  buffer重悬样品。

          请注意抽提处理过程中肽的回收率是变化的。需要对抽提步骤进行优化。确定抽提效率有很多种方法，包括

          放射性多肽，加样回收实验（添加平行样品，检测已知浓度催产素的回收率）

Q：    是否可检测唾液样品？

A：    虽然在研发该试剂盒中没有检测过唾液样品，但是很多客户对检测唾液样品中的催产素感兴趣。有文献

         （http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18842740）报道用该试剂盒检测唾液样品。有科研人员使用下列

          步骤检测唾液样品。请注意，需要对您检测的具体样品进行条件优化。

    1.     收集1mL唾液。使用前样品需要保存在-20℃。

    2.     离心直到出现沉淀颗粒，使粘液粘附在管底。

    3.     收集上清，每1mL进行分装。

    4.     用离心蒸发器（SpeedVac或者类似）蒸发1mL。

    5.     加入250ul assay buffer重悬干燥的样品。

          上述样品进行了4倍浓缩，应该不含有干扰因子。

Q：    我需要使用多少样品？建议的稀释比是多少？

A：    需要样品的量和建议的稀释比取决于样品中催产素的水平。建议客户参考相关的文献，最好是相近的样

          品类型，检测条件。

Q：    除了培养上清，牛奶，血浆或者血清外，还可以检测什么样品？

A：    文献报道有检测脑脊髓液，唾液，组织和尿液。

Q：    该试剂盒是否可以检测任意物种？

A：    虽然在一些灵长类动物中（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21411453）发现单一氨基酸替换的新

          型催产素（会影响抗体结合的亲和力），但是在大多数哺乳动物间催产素的氨基酸顺序没有发生大变化，因

          此该试剂盒可以检测任意物种。文献报道检测的物种包括狒狒，人，小鼠，猪，大鼠，猕猴，绢毛猴。请注

          意如果用兔血清检测会有问题。不是由于催产素本身，而是因为该试剂盒使用的是抗兔的IgG，会引起高背

          景值。

Q：    使用什么柱子进行催产素的抽提？

A：    使用含有200mg吸附剂、柱容量3.5mL的反向C18柱进行固相抽提（SPE）。如果血清/血浆样品少的话，

          可以使用更小的C18柱。

Q：    应该如何处理，变成干燥的样品？

A：    使用真空离心（比如Speed Vac）或者氮气或者氩气进行干燥样品。如果样品数量多，建议使用真空离心

          的方法。样品可室温放置在SpeedVac过夜。第二天样品会变干燥，保持了样品的完整度（在真空状态下没

          有与外界环境接触）。

          用氮气干燥的话，需要将玻璃枪头贴到气体的底部，将枪头正好悬在含有样品管子的正下方。如果使用这个

          方法，建议先用含有石油醚的管子进行练习，检测整个过程耗时多少。

          不建议将样品放在罩子下面进行干燥。样品会氧化，残留的溶剂会影响检测。

Q：    如何判断我的样品是需要进行稀释还是抽提？

A：    如果样品经过推荐的最小稀释比稀释后检测值在试剂盒的检测范围内（标准曲线的范围内），那就稀释后直

          接进行检测。如果样品低于检测的最小值，必须进行抽提和浓缩。

Q：    如何使用excel制作标准曲线？

A：    1.     计算标准品和样品的平均净OD值。
          平均的净OD值=平均OD- 平均NSB OD（Average Net OD=Average OD- Average NSB OD）
          2.     计算每个标准品的结合（与最大结合孔Bo的百分比）
          结合率=净OD/净Bo OD ×100（Percent Bound=Net OD/Net Bo OD ×100）
          3.     Excel程序，y轴为结合率（percent bound），x轴是标准品的浓度。 开始-插入-散点图-添加趋势

          线-对数，显示R值和公式即可。对数方程式。公式是 y = a*ln(x) + b，x = inv ln [(y – b) / (a)]或者

          x = e^[(y – b) / (a)].

Q：    血液样品该如何收集？

A：    血液样品应该收集到冷冻血清或者含有抑肽酶（500KIU/mL 血液）EDTA（1mg/mL血液）管。

          在4℃，1600×g离心样品15分钟。将血清或者血浆转移到塑料管内，保存在-70℃或者更低的温度，

          避免反复冻融。

Q：    如果样品是血浆，是否可以先稀释样品后再检测？

A：    说明书上没有提供血浆样品稀释的最小稀释比，因此建议样品抽提后进行检测。

Q：    如果样品是血清，是否可以先稀释样品再进行检测？

A：    说明书建议人血清的最小稀释比是1:8。建议在1:2~1:16范围之间摸索最佳的稀释比例（以稀释后测到的

          OD值落在标准曲线范围内为最佳）。如果上述实验结果不理想，建议对样品进行抽提。

Q：    如何评估样品抽提（样品前处理）的效果？

A：    制备加样样品（spiked sample），将200pg/mL 催产素（已知浓度的标准品）加到不同的样品类型中。

          然后样品和加样样品进行抽提、检测。同时制备标准曲线。抽提效率的公式如下：加样样品的浓度（参考

          标准曲线计算加样样品的浓度）—抽提后样品的浓度/200pg/mL(理论浓度) ×100%。当抽提效率在80%

          ~120%时，抽提效果最佳。

参考文献

［1］A sexually dimorphic hypothalamic circuit controls maternal care and oxytocin secretion: N. Scott, et al.; Nature (2015), Application(s): ELISA using isoflurane and blood samples from mice

［2］Conspecific recognition and aggression reduction to familiars in newly weaned, socially plastic mammals: K.J. Robinson, et al.; Behav. Ecol. Sociobiol. 59, 1383 (2015),Application(s): ELISA using seal pup plasma

［3］Electro-acupuncture improves the social interaction behavior of rats: H.F. Zhang, et al.; Physiol. Behav. 151, 485 (2015), Application(s): ELISA using rat brain tissue

［4］ Oxytocin increases VTA activation to infant and sexual stimuli in nulliparous and postpartum women: R. Gregory, et al.; Horm. Behav. 69, 82 (2015), Application(s): ELISA using human urine

［5］Oxytocin-induced coping with stressful life events in old age depends on attachment; findings from the cross-sectional KORA Age Study: R.T. Emeny, et al.

［6］Psychoneuroendocrinology 56, 132 (2015), Application(s): ELISA using human plasma

［7］Salivary oxytocin concentrations in seven boys with autism spectrum disorder received massage from their mothers: a pilot study: S. Tsuji, et al.; Front. Psychiatry 6, 58 (2015),Application(s): ELISA using human saliva

［8］Salivary oxytocin increases concurrently with testosterone and time away from home among returning Tsimane' hunters: A.V. Jaeggi, et al.; Biol. Lett. 11, (2015), Application(s):ELISA using human saliva

［9］Strongly bonded family members in common marmosets show synchronized fluctuations in oxytocin: C. Finkenwirth, et al. ; Physiol. Behav. 151, 246 (2015), Application(s): ELISA using marmoset urine

［10］Breaking bonds in male prairie vole: long-term effects on emotional and social behavior, physiology, and neurochemistry: P. Sun, et al.; Brain Behav. Immun. 15, 265 (2014),Application(s): EIA using prairie vole plasma samples

［11］Effects of early life social stress on endocrinology, maternal behavior, and lactation in rats: L.M. Carini, et al.; Horm. Behav. 64, 634 (2013), Application(s): EIA using rat plasma

Neonatal CSF oxytocin levels are associated with parent report of infant soothability and sociability: C.L. Clark, et al.; Psychoneuroendocrinology 38, 1208 (2013), Application(s):ELISA using human cerebral spinal fluid.

［12］Oxytocin administration attenuates atherosclerosis and inflammation in Watanabe Heritable Hyperlipidemic rabbits: A. Szeto, et al.; Psychopharmacol. 38, 685 (2013),  

［13］Oxytocin increases the influence of public service advertisements: P.Y. Lin, et al.; PLoS One 8, e56934 (2013)

［14］Peripheral vasopressin but not oxytocin relates to severity of acute psychosis in women with acutely-ill untreated first-episode psychosis: L.H. Rubin, et al.; Schizophr. Res. 146, 138 (2013), Application(s): ELISA using human serum.

［15］Peripheral oxytocin in female baboons relates to estrous state and maintenance of sexual consortships: L.R. Moscovice, et al.; Horm. Behav. 62, 592 (2012), Application(s): ELISA using baboon urine

［16］Validation of a new multiplex assay against individual immunoassays for the quantification of reproductive, stress, and energetic metabolism biomarkers in urine: K.G. Salvante, et al.; Am. J. Hum. Biol. 24, 81 (2012), Application(s): EIA using human urine

［17］Estradiol effects on behavior and serum oxytocin are modified by social status and polymorphisms in the serotonin transporter gene in female rhesus monkeys: V. Michopoulos, et al.; Horm. Behav. 59, 528 (2011), Application(s): ELISA using rhesus monkey serum, 

Evaluation of Enzyme Immunoassay and Radioimmunoassay Methods for the Measurement of Plasma Oxytocin: A. Szeto, et al.; Psychosomatic Medicine 73, 393 (2011)

［18］Genistein alters the release of oxytocin, prostaglandins, cortisol and LH during insemination in gilts: M. Norrby, et al.; Reprod. Domest. Anim. 46, 316 (2011),Application(s): ELISA using pig plasma

［19］Reproductive experience affects parental retrieval behaviour associated with increased plasma oxytocin levels in wild-type and CD38-knockout mice: O. Lopatina, et al.; J. Neuroendocrinol. 23, 1125 (2011)

［20］Calcium, parathyroid hormone, oxytocin and pH profiles in the whelping bitch: F.K. Hollinshead, et al.; Theriogenology 73, 1276 (2010), Application(s): ELISA using dog serum

［21］Mothers’ and Children’s Concentrations of Oxytocin Following Close, Physical Interactions with Biological and Non-biological Children: J. Bick & M. Dozier; Dev. Psychobiol. 52, 100 (2010), Application(s): Concentration in urine

［22］Prolactin promotes oxytocin and vasopressin release by activating neuronal nitric oxide synthase in the supraoptic and paraventricular nuclei: C. Vega, et al.; Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 299, R1701 (2010), Application(s): ELISA using rat plasma

［23］The cross-generation transmission of oxytocin in humans: R. Feldman, et al.; Hormones and Behavior 58, 669 (2010), Application(s): EIA using human saliva

［24］Variation in oxytocin is related to variation in affiliative behavior in monogamous, pairbonded tamarins: C.T. Snowdon, et al.; Horm. Behav. 58, 614 (2010), Application(s):ELISA using tamarin urine

［25］Effects of naltrexone on cortisol levels in heavy drinkers: L.A. Ray, et al.; Pharmacol. Biochem. Behav. 91, 489 (2009), Application(s): EIA using human saliva

［26］Influence of a 'Warm Touch' Support Enhancement Intervention Among Married Couples on Ambulatory Blood Pressure, Oxytocin, Alpha Amylase,and Cortisol: J. Holt-Lunstad, et al. ; Psychosom. Med. 70, 976 (2008), Application(s): EIA using human plasma and saliva

［27］Monetary sacrifice among strangers is mediated by endogenous oxytocin release after physical contact: P. Zak, et al. ; Evol. Hum. Behav. 29, 375 (2008), Application(s): EIA using human plasma and serum.,

［28］PVN electrical stimulation prolongs withdrawal latencies and releases oxytocin in cerebrospinal fluid, plasma, and spinal cord tissue inintact and neuropathic rats: M. Condes-Lara, et al. ; Pain 140, 265 (2008), Application(s): EIA using rat cerbrospinal fluid, plasma and tissue

［29］Targeted Inhibition of Cyclic AMP Phosphodiesterase-4 Promotes BrainTumor Regression: J. Rubin, et al. ; Clin. Cancer Res. 14, 7717 (2008), Application(s): EIA using mouse plasma.

［30］Oxytocin in the circadian timing of birth: J. Roizen, et al.; PLoS One 2, e922 (2007),Application(s): EIA using mouse plasma

自我免疫疾病 肾病研究

抗dsDNA抗体检测用ELISA Kit

■ Lbis^® Anti dsDNA-Mouse ELISA Kit

■ Lbis^® Anti ssDNA-Mouse ELISA Kit

■ Lbis^® Rheumatoid Factor IgG-Mouse ELISA Kit

■ Lbis^® Rheumatoid Factor IgM-Mouse ELISA Kit

◆特点

●　短时间测定

●　微量样品（稀释样品）可测

●　使用对环境无害的防腐剂

●　全部试剂均为液体，可直接使用

●　精密的测定精度和高再现性

标准曲线范围：15.6～1,000 mU/mL

◆精度测试

●　检测内变动：平均C.V.值10%以下

●　检测间变动：平均C.V.值10%以下

◆样品：血清或血浆

●　含抗dsDNA和抗ssDNA的血浆采血是不可使用肝素

●　用本品配备的缓冲液稀释检体，稀释范围如下：

稀释倍数： 51 倍、101 倍、201～

MRL/lpr产生抗体随时间的变化

MRL/lpr小鼠(n=7)

随着时间的推移，测量血清抗体MRL/lpr小鼠(n=7)的值。

测试值为平均值±标准偏差值，随着年龄增加，自身抗体增加。

治疗实验与MRL/lpr 20周龄相比较IgG-RF抗体，IgM-RF抗体，抗ssDNA抗体值有意的受到抑制。(＊p<0.05)

相关资料

AKRDD061说明书	ELISA试剂盒选择指南①②	ELISA试剂盒选择指③④
AKRIE-010说明书	AKRRG-101说明书	AKRRG-111说明书

C肽ELISA检测试剂盒

◆原理

　　C-Peptide & Insulin：在 B 细胞内胰岛素原能转变为胰岛素(Insulin)和 C 肽(C-Peptide)，正常情况下，只有极少量的胰 岛素和 C 肽会进入血液循环。因此检测血液中胰岛素和 C 肽的含量可以用于评估胰岛 B 细胞功能。

◆优点、特色

●　简单快速

●　高特异性

●　超灵敏度

更多ELISA 试剂盒

糖尿病/肥胖症

全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono（MS785/MS27）

本产品为两种针对SOD1突变体的抗体混合物。SOD1突变体被认为是导致神经性疾病肌萎缩性侧索硬化(ALS)的原因之一，本产品可特异性识别SOD1突变体的共通二级结构，并且通过免疫沉淀后以Western blot或免疫染色等方法可以检测出上百种SOD1突变体。

另外，本混合型抗体也适用于缺锌性内质网应激相关的SOD1研究。详细请浏览“MEMO——锌缺乏和SOD1立体结构变化”。

※ 本产品仅供研究。研究以外不可使用。

※ 本产品基于东京大学 药学系研究科 细胞情报学教室的研究成果产品化而成。

免疫沉淀后突变体SOD1的检测实例

在HEK293细胞中表达野生型以及不同突变型SOD1，裂解细胞后添加各抗体（MS785：5 μg/mL, MS27：

2 μg/mL, MS785/MS27混合：1 μg/mL）并反应10小时，然后使用Protein G 磁珠进行免疫沉淀。结果显示，MS785和MS27在经过免疫沉淀反应后，未识别出野生型（WT）但与突变体特异性结合。在抗原位点出现突变时，MS785和MS27无法单独识别，但是补充MS785/MS27混合体后，即可检测出来。

◆肌萎缩性侧索硬化(ALS)与SOD1

肌萎缩性侧索硬化(ALS；Amyotrophic Lateral Sclerosis)是一种由于运动神经的细胞死亡导致全身骨骼肌无力、主要症状为肌肉萎缩的神经退行性疾病。90%的ALS为非遗传性发病，10%左右为遗传性发病，并且已经鉴定出了约20种致病基因。其中因氧化还原酶SOD1（Cu/Zn Superoxide Dismutase）的突变导致发病的案例最多，而表达SOD1突变体的转基因小鼠也作为ALS的动物模型使用。借助各种研究手段我们有望阐明由SOD1突变导致的ALS发病机理。

SOD1是一种在活性中心带有铜离子与锌离子的金属酶，主要负责分解细胞内产生的活性氧。虽然SOD1是一种相对较小的蛋白，只有154个氨基酸（人）、分子量仅为24 kDa，但是却有着上百种突变体（图1）。这些突变体基本不会影响分解天然活性氧的酶活性。因此，研究认为，ALS的发病中存在着酶活性以外的其他因素，而伴随突变的毒性获得（toxic gain of function）被视为极有可能的因素。

原本，野生型SOD1形成二聚体，但有关SOD1突变体，东京大学一条秀宪教授等人已澄清了的以下要点：

●　上百种各形各式的SOD1突变体采用了与野生型SOD1不同的共通二级结构（图2）。

●　通过与内质网中的蛋白降解途径（ERAD）的构成蛋白Derlin-1相结合获得细胞毒性。

并且，以SOD1突变体与Derilin-1结合位点为基础，成功开发出能够特异性识别突变体立体结构的大鼠单克隆抗体，克隆MS785和MS27。这些抗体作为阐明SOD1突变引发的ALS发病机制的优秀工具备受期待。

图1  报告中SOD1突变位点的案例

图2 SOD1野生型与突变体的结构区别以及抗体识别位点

◆特点

●　混合了抗SOD1大鼠单克隆抗体克隆MS785和克隆MS27的混合型抗体。

※　亦可分别购入克隆MS785、MS27。

●　克隆MS785和MS27识别SOD1突变体共通的单体二级结构，且拥有在免疫沉淀后检测出上百种SOD1突变体的

●　实绩。

●　可以通过免疫细胞染色法特异性检测SOD1突变体。

●　在缺锌条件下可以检测作为内质网应激的原因之一的野生型SOD1二级结构变化。适用于内质网应激研究和

●　SOD1基础研究。详细请浏览“MEMO——锌缺乏和SOD1二级结构改变”。

◆抗体信息

■　关于克隆MS785与MS27的区别

•　MS785是以人SOD1的6~16氨基酸序列，MS27是以人SOD1的30~40氨基酸序列分别作为抗原制备的单抗。

•　均可广泛地检测突变体，但无法检测到某些每个表位均有突变的特定突变体。

•　由于MS785和MS27有互补性，所以混合型抗体可以补全抗原位点突变体的检测。

◆应用

●　免疫沉淀，免疫染色：突变体检测

●　ELISA：突变体检测（详细请参考原著文献2。）

●　Western blot：同时检测突变体与野生型

注意：在变性状态下，不仅会检测到SOD1突变体，也会检测到野生型SOD1。因此，实验过程中必须防止蛋白变性，请勿使用SDS等变性剂。

◆原著文献

1.　Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012).

1.　"A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral

1.　sclerosis-linked SOD1 mutants."

2.　Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015).

2.　"A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational

1.　alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

◆通过免疫染色对SOD1突变体的检测实例

在HEK293细胞表达野生型以及G93A突变体SOD1(FLAG融合蛋白)，分别使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合型抗体（红）和抗FLAG抗体（绿）进行免疫染色（工作浓度：1 μg/mL）。可以确认，野生型以及G93A突变体均倍倍抗FLAG抗体检测到信号，但是MS785、MS27以及MS785/27混合型抗体均不与野生型反应，仅与突变体反应。

◆缺锌状态下野生型SOD1的检测实例

本抗体可检测出缺锌时野生型SOD1的动态结构变化。不仅ALS研究，也适用于SOD1的基础研究。

●　本产品有在血清缺乏条件以及锌螯合剂TPEN处理下检测出内源性野生型SOD1的检测实例。

●　MS785、MS27以及混合物都可用于检测。

锌缺乏和SOD1立体构造改变

OD1是拥有锌离子的金属蛋白。东京大学的一条教授等人明确，在缺锌状态下野生型SOD1会释放锌离子，改变二级结构，并采取SOD1突变体相似的单体结构。这种结构变化，令原本不结合的内质网相关性降解（ERAD）蛋白Derlin-1获得结合能力，诱导了ER 应激（内质网应激）。即使是野生型SOD1，本产品也能识别出缺锌状态下的立体结构变化，检测出缺乏锌的SOD1。因此适用于SOD1基础研究以及ER应激研究。

参考文献：

1.  Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012).

1.  "A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral

1.　sclerosis-linked SOD1 mutants."

2. Homma, et al., Molecular Cell, 52, 75～86 (2013).

1.  "SOD1 as a Molecular Switch for Initiating the Homeostatic ER Stress Response under Zinc Deficiency."

3. Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015).

1.  "A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational

1.　alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

将HEK293细胞用10 μM锌螯合剂TPEN处理8小时。细胞裂解后，分别使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合抗体进行免疫沉淀。由于锌离子的缺失，内源性野生型SOD1与SOD1突变体同样被MS785、MS27检测出来。

◆储存温度

20°C