Bis(2,5,6-trimethylpyrazolo[1,2-a]pyrazole-1,7-dione-3-ylmethyl)sulfide

CAS号：1392113-30-2

商品信息

规格

性状：                          本品为无色或淡黄色固体

纯度（HPLC）：           97%以上

含量               ：           0.540~0.600（370nm）

处理条件

保存方法：                   避光冷藏

硫化氢 (H₂S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。H₂S被认为是一种除了NO和CO以外的第三种气体信号分子，在生理状态下大约80％的硫化氢解离为HS^–(pKa=7.0)。Monobromobimane (简称mBBr) 法是硫化氢检测最灵敏和可靠的方法之一。1个分子的H₂S可以与2个分子的mBBr反应生成1个分子的Sulfide dibimane.采用高效液相色谱法 (HPLC)可以分析谷胱甘肽或半胱氨酸和mBBr反应生成的Sulfide dibimane， 由于它可以发出荧光，所以检测的灵敏度较高1),2),3)。

硫化氢 (H₂S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。H₂S被认为是一种除了NO和CO以外的第三种气体信号分子，在生理状态下大约80％的硫化氢解离为HS^–(pKa=7.0)。Monobromobimane (简称mBBr) 法是硫化氢检测最灵敏和可靠的方法之一。1个分子的H₂S可以与2个分子的mBBr反应生成1个分子的Sulfide dibimane 。采用高效液相色谱法 (HPLC)可以分析谷胱甘肽或半胱氨酸和mBBr反应生成的Sulfide dibimane， 由于它可以发出荧光，所以检测的灵敏度较高。

HPLC实验例

样品的预处理

1. 吸取30 ul样品至含有70 ul 100 mmol/l Tris-HCl缓冲液 (pH 9.5,0.1 mmol/l DTPA) 的管子中。

2. 加入50 ul 10 mmol/l的mBBr乙腈溶液。

3. 培养30 min。

4. 加入50 ul 200 mmol/l的 5-磺基水杨酸。

5. 取上清液作为检测样品。

* 有关mBBr法的详细情况，请参见Methods Enzymol.，2015，554，314)。

硫化氢的定量分析

6. 加入100 ul乙腈至含有10 nmol Sulfide dibimane的管子中，用移液器吹打使溶解，制成0.1 mmol/l 的Sulfide dibimane储存液。

7. 用乙腈稀释0.1 mmol/l Sulfide dibimane储存液，稀释成一个系列浓度梯度的溶液。

8. 吸取上述系列浓度梯度的溶液各5 ul注射入HPLC色谱柱，制成一条标准曲线 (下图)。

9. 通过HPLC分析样品 ，计算Sulfide dibimane的峰面积。

10. 用标准曲线计算样品中HS^–的浓度。

注意：Sulfide dibimane溶液对光敏感，请避光并在一天内用完。

＜HPLC条件＞

柱：Inersil ODS-3

流动相：A) 0.1% TFA/H₂O ，

B) 0.1% TFA/Acetonitrile (TFA: Trifluoroacetic acid) B conc.：

5%-35% (0-5 min)，

35%-55% (5-16 min)，

55%-70% (16-23 min)

检测：荧光 (Ex: 390 nm, Em: 475 nm)

流速：1 ml/min

柱温：40℃

1) G. L. Newton, R. Dorian and R. C. Fahey,Anal. Biochem., 1981, 114, 383.

2) E. A. Wintner, T. L. Deckwerth, W. Langston, A.Bengtsson, D. Leviten, P. Hill, M. A. Insko, R.Dumpit,E.Vanden Ekart, C. F. Toombs and C. Szabo,Br. J. Pharmacology, 2010, 160, 941.

3) X. Shen, C. B. Pattillo, S. Pardue, S. C. Bir, R.Wang and C. G. Kevil,Free Radic. Biol. Med., 2011, 50, 1021