日本同仁化学Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264- DOJINDO

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Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264
葡萄糖检测试剂盒
Glucose Assay Kit-WST
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光防潮
运输条件:室温

特点:

 

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 稳定性好

●可使用酶标仪高通量筛选

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葡萄糖乳酸检测

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50 tests
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代谢

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264
Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

产品解说
活动进行中
试剂盒内含
概述
原理
操作步骤
制作葡萄糖标准曲线
实验例
常见问题Q&A
参考文献

产品解说

 

活动进行中

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NO.1.    Lactate Assay Kit-WST     乳酸检测

NO.2.    Glucose Uptake Probe-Green    葡萄糖摄取检测

NO.3.    Cell Counting Kit-8     细胞增殖毒性检测  

NO.4.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测

NO.5.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

 

试剂盒内含

50 tests 200 tests
Dye Mixture ×1 ×1
葡萄糖标准品(10 mmol/l)(红盖) 150 μl×1 600 μl×1
酶(绿盖) ×1 ×1
Assay Buffer 3.5 ml×1 14 ml×1
Reconstitution Buffer(蓝盖) 350 μl×1 1.4 ml×1

概述

葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质,也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标,在癌症研究中,也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明,抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性,可以抑制癌细胞的生长。

葡萄糖检测试剂盒(Glucose Assay Kit-WST)可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖,通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖,适合用96孔板检测,可以同时检测多个样品。

原理

*本试剂盒可以检测细胞上清液的葡萄糖的含量,通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外,试剂盒里有葡萄糖标准液,可以制作标准曲线,测定样品中的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

*要测定细胞上清液以外的样品,请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。

操作步骤

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

制作葡萄糖标准曲线

可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线,然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时,可以通过稀释样品进行检测。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

实验例

用Phloretin抑制葡萄糖的摄取

1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×105 cells/ml,在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。

2. 在6孔板中接种1×106 cells/孔的细胞悬液,在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。

3. 将细胞悬液转移到锥形管中,在1,500 rpm离心5 min。

4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中,用超纯水稀释30倍。

5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。

6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。

7. 在每孔中加入50 µl工作液。

8. 在37℃培养箱中培养30 min。

9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度,根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

Phloretin抑制葡萄糖的摄取

实验证实,细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。

常见问题Q&A

Q1:是否可以检测2-Deoxy-D-glucose?
A1:可以检测2-Deoxy-D-glucose。
Q2:Working Solution的稳定性如何?
A2:Working   Solution无法保存,请现配现用。由于对光不稳定,因此配制后请避光,在室温和避光条件下可保存4小时(当Working   Solution在曝光下,溶液颜色会由红色变为橙色,背景升高)。
Q3:当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测?
A3:如果样品中含有还原性的物质,则也会和WST染料发生显色,此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况,可以设定药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)作为背景对照,并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。
Q4:是否有检测细胞上清液以外的实验例?
A4:有测定细胞内葡萄糖的实验例。操作详情,请参考常见问题FAQ“Q5”。其他的样品没有实验例。
Q5:是否可以检测细胞内葡萄糖?
A5:细胞内葡萄糖也可以检测,请参考下面的样品制备步骤。
 

请准备「0.1%Triton X-100水溶液」和「滤膜(分子量:10KD )」

(1)将细胞*1悬液收于1.5 ml微量管中。

※测定所需的细胞数,需要根据细胞种类进行调整。
HepG2细胞和Jurkat细胞的测量结果如下图所示
(2)在300×g下离心5分钟,去除上清液。
(3)加入300 µl PBS,重悬细胞,在300×g下离心5分钟,除去上清液。
(4)加入250 µl细胞溶解液*2(0.1%Triton-X),裂解细胞后,在12,000×g离心5分钟。
(5)将操作(4)的上清液200 µl转移到超滤膜过滤管(分子量:10K)中,以12,000×g离心10分钟。
※当测定样品为n=3时,总共需要150 µl以上(50 µl×3)。
※离心后的滤液不超过150 µl时,请延长离心时间。
(6)将通过操作(5)得到的滤液作为测定样品。
然后按照使用说明书,测定葡萄糖浓度。
※测定试样在标准曲线范围内(0-0.5 mmol/l)内,请适当用细胞溶解液稀释,用于测定。
*1 为了检测0.02 mmol/l以上的葡萄糖,HepG2细胞数量为1×105cells以上,Jurket细胞需要2×106 cells以上的细胞数量。
*2 细胞溶解液中含有SDS会抑制显色,因此不能使用含有SDS的缓冲液。

 

Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。
A6:制备标准曲线和样品(n=3)时,可以检测的样品数量如下所示。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

标准曲线:8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

96孔板排列示意图(n=3)

Q7:可以测量L-Glucose吗?
A7:本产品用于β-D-Glucose测量,不能测量L-Glucose。

参考文献

No 检测对象 文献
1 小鼠血清 Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB   J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2 链霉菌 Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3 HCT116细胞 Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81
4 P388白血病细胞 2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966
5 小鼠精子细胞 Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation,   capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi:   10.1007/s00018-020-03683-9

 

*要测定细胞培养上清液以外的样品,请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。