日本同仁化学Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号:L248- DOJINDO

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Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号:L248
细胞脂质过氧化物检测试剂盒
Liperfluo
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光,充氮气
运输条件:室温

分子式:

C51H41N2O8P

分子量:

840.85

特点:

● 特异性检测铁死亡相关的脂质过氧化

● 比BODIPY C11更适合于胞内定位

● 铁死亡常见指标之一

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铁死亡检测方案

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荧光/流式检测

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Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号:L248

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号:L248

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规格性状
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原理
荧光特性
操作步骤
实验例
常见问题Q&A
参考文献

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规格性状

性状:深红色结晶粉末或固体。

纯度(HPLC):90.0%以上

核磁共振谱:符合一致性

<使用次数>每50µg可用5-50次

产品概述

Liperfluo是Spy-LHP的类似物,可用于检测脂质过氧化物 (LPO),Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长),因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团,因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光,但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。

特点:

1)能够成像和检测细胞中的脂质过氧化物

2)长波长激发,可以减少光损伤和自发荧光对细胞的影响

3)高度脂质过氧化物特异性

研究领域

在铁死亡研究中:

作为细胞死亡形式之一,在铁死亡研究中使用到Liperfluo

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号:L248

 

    细胞种类

(铁死亡诱导剂)

                                  论文信息
人支气管上皮细胞(RSL3) Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium.
小鼠成纤维细胞(RSL3) Oxidized arachidonic and adrenic PE s navigate cells to ferroptosis.
HeLa细胞

(添Erastin或Brefeldin A)

Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells.

原理

Liperfluo是Spy-LHP的类似物,可用于检测脂质过氧化物 (LPO),Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长),因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团,因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光,但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号:L248

荧光特性

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号:L248

激发波长Ex:488 nm,发射波长Em:500-550 nm

操作步骤

1.在培养皿或孔板中接种细胞。

2.去除上清液,用无血清培养基洗涤细胞1次。

3.加入适量的Liperfluo工作溶液,37℃孵育30 m in。

*根据实验条件等不同因素,Liperfluo的最佳浓度也不同。需要提前摸索条件。

4.去除上清液并用无血清培养基洗涤细胞2次。

5.在荧光显微镜下观察细胞或使用流式细胞仪分析细胞。

实验例

用激光共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

 

1) 在 -slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种H eLa细胞 (3.0×10 4 个/孔、含10% 胎牛血清M EM 培养基),

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基,用无血清M EM 培养基清洗细胞1次。

3) 将200 l用无血清M EM 培养基稀释的1 m ol/l的Liperfluo 溶液加入8孔板中,

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养30 m in。

4) 去除溶液,用200 l H BSS清洗2次。

5) 均匀地加入200 l用H BSS稀释的500 m ol/l的 t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液,

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养60 m in。

6) 用共聚焦荧光显微镜观察 (激发波长:488 nm ,发射波长:500-550 nm )。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号:L248

用流式细胞仪检测HeLa细胞

 

1) 将H eLa细胞 (1.0×10 5 个/孔、含10% 胎牛血清M EM 培养基) 接种至6孔板 (Therm o公司) 中,

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基,用无血清M EM 培养基清洗细胞1次。

3) 将2 m l用无血清M EM 培养基稀释的1 m ol/l的Liperfluo溶液加入6孔板中,在37℃ 5% 的

C O 2 培养箱中培养30 m in。

4) 去除溶液,用2 m l H BSS清洗2次。

5) 均匀地加入2 m l用H BSS稀释的500 m ol/l的t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液,

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养60 m in。

6) 用胰酶消化细胞后,用含有血清的M EM 培养基重悬细胞,移至管中并将培养基更换为H BSS。

7) 用流式细胞仪检测 (激发波长:488 nm ,发射波长:500-550 nm )。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号:L248

用Erastin诱导铁死亡细胞的荧光成像

 

1) 在 -slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×10 5 个/孔、含10% 胎牛血清D M EM 培养基),

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基,加入200 l用无血清D M EM 培养基稀释的50 m ol/l的Erastin溶液,

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

3) 去除培养基,用200 l H BSS清洗2次。

4) 去除H BSS,加入200 l用H BSS稀释的5 m ol/l的Liperfluo溶液,在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中

培养30 m in。

5) 去除溶液,用200 l H BSS清洗2次。

6) 用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长:488 nm ,发射波长:500-550 nm )。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号:L248

常见问题Q&A

Q1.文献实验方法:先加Liperfluo,后加药;说明书实验方法:先加药,后加探针, 哪种方法比较好?
A1: 都可以。

先加Liperfluo再加药

用共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

(1)在μ-slide 8孔板中(ibidi公司)接种HeLa细胞(3.0×104个/孔、含血清MEM培养基),在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

(2)去除培养基,用无血清MEM培养基清洗细胞一次。

(3)将200 μl无血清MEM培养基稀释后的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中,在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

(4)去除溶液,用200 μl HBSS清洗2次。

(5)均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液,在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。

(6)用共焦荧光显微镜观察 (激发波长:488 nm,发射波长:500-550 nm)。

先加药再加Liperfluo

(1)在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基),

在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

(2)去除培养基,加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液,

在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

(3)去除培养基,用200 μl HBSS清洗2次。

(4)去除HBSS,加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液,

在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

(5)去除溶液,用200 μl HBSS清洗2次。

(6)用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长:488 nm,发射波长:500-550 nm)。

Q2. Liperfluo如果按照文献进行,先加探针,后加药,荧光淬灭时间为2小时可能无法满足实验,希望延长荧光时间,是否有好的方法?或者是否可以加荧光防淬灭剂?
A2: 关于荧光抗淬灭剂:由于抗淬灭剂的作用原理,有可能无法在实验中使用。

其他的改善方法:

(1)如果褪色的原因是由光源照射造成的褪色。可以尝试减小光源强度进行观测。

(2)清洗操作后长时间放置可能会造成探针向细胞外漏出。可考虑不清洗直接观察。

Q3.Liperfluo由于是活细胞荧光探针,如果铁死亡发生,导致细胞膜破裂后,荧光是否存在?
A3:由于Liperfluo是活细胞探针,对死细胞无法发挥出探针的正常性能。
Q4:培养基中酚红或血清对实验有没有影响?此外,在背景高或荧光弱的情况下有没有改善意见?
A4:可用于酚红或含血清培养基。但是,如果背景高,请用PBS替换。     此外,当背景较高时,Liperfluo可能会被光自然氧化,培养时也请尽量遮光。

(溶解后请务必用铝箔等遮光)。

荧光强度弱的情况下,即使反应时间延长,背景也会变高,所以不推荐。

因此,建议调整设备 (荧光观察)的条件。

1.增强激发光的强度。

2.延长曝光时间。

Q5:悬浮和贴壁细胞都可以使用Liperfluo染色吗?是否可以染色固定细胞
A5:悬浮和贴壁细胞,都可以使用。

有实验经验的:HL-60细胞(悬浮细胞),CHO细胞·SH-SY5Y细胞(贴壁细胞)等,固定的细胞不能染色。

 

参考文献

以下文献根据影响因子由高到低排序:

 

细胞种类 期刊名 出版年 影响因子 论文题目(含原文链接)
小鼠胚胎成纤维细胞 Nature 2023 69.5 Phase separation of FSP1 promotes ferroptosis
H9C2(大鼠心肌细胞) Nature 2022 69.504 A   non-canonical vitamin K cycle is a potent ferroptosis suppressor
B16细胞(小鼠黑色素瘤细胞);   HT-1080(人纤维肉瘤细胞) Nature 2019 69.504 CD8+ T cells regulate tumour     ferroptosis during cancer immunotherapy
MEF(小鼠胚胎成纤维细胞) Nature   Chemical   Biology 2016 12.587 Oxidized arachidonic and adrenic   PEs navigate cells to   ferroptosis
RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) Nature   Chemical   Biology 2020 12.587 Redox lipid reprogramming   commands   susceptibility of macrophages and microglia to ferroptotic   death
Brain slices   from LN229TAZ(4SA)(人脑胶质瘤切片) Nature   Communications 2020 12.121 Neutrophil-induced     ferroptosis promotes tumor necrosis in glioblastoma progression
HBE(人支气管上皮样细胞) The   Journal of   Clinical Investigation 2018 11.864 Pseudomonas aeruginosa utilizes host   polyunsaturated   phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis   in bronchial   epithelium
HL-60(人骨髓细胞白血病细胞) Cell   Death and   Differentiation 2020 10.717 Oxygenated   phosphatidylethanolamine   navigates phagocytosis of ferroptotic cells   by interacting with TLR2
NCI-ADR/Res   (NAR) 人卵巢腺癌细胞 Biomaterials 2019 10.317 Triggered     ferroptotic polymer micelles for reversing multidrug resistance to     chemotherapy
4T1细胞(小鼠乳癌细胞) ACS   Applied Materials   & Interfaces 2019 8.758 Boosting the Ferroptotic   Antitumor Efficacy via   Site-Specific Amplification of Tailored Lipid   Peroxidation
BV2   Microglial(小鼠小胶质细胞) Particle   and Fibre   Toxicology 2020 7.546 Induction of ferroptosis in   response to   graphene quantum dots through mitochondrial oxidative   stress in microglia
BMDM(小鼠骨髓来源的巨噬细胞) Particle   and Fibre   Toxicology 2017 7.546 SiO2 and   TiO2 nanoparticles synergistically trigger macrophage inflammatory     responses
HT-22(细胞) Antioxidants 2023 7.0 Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy
3T3-L1   adipocytes(小鼠脂肪细胞) Cell   Death and   Disease 2018 6.304 Osteocalcin triggers     Fas/FasL-mediated necroptosis in adipocytes via activation of p300
OEC-M1(人口腔上皮细胞) Biomaterials     Science 2018 6.183 Assessment of zero-valent   iron-based nanotherapeutics for   ferroptosis induction and   resensitization strategy in cancer cells
Hacat(人永生化角质形成细胞) Free   Radical Biology   and Medicine 2017 6.17 Blue light-induced     oxidative stress in live skin
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) Free   Radical Biology   and Medicine 2015 6.17 New aspects of     24(S)-hydroxycholesterol in modulating neuronal cell death
HEI-OC1(耳蜗毛细胞);鼠新生耳蜗毛细胞 Oxidative   Medicine   and Cellular Longevity 2020 5.076 Liproxstatin-1 Protects Hair   Cell-Like HEI-OC1 Cells and   Cochlear Hair Cells against Neomycin   Ototoxicity
 Murine T cells(鼠T细胞) The   Journal of   Immunology 2019 4.886 Murine T Cell Maturation   Entails   Protection from MBL2, but Complement Proteins Do Not Drive   Clearance of Cells   That Fail Maturation in the Absence of NKAP
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) Molecular     Neurobiology 2020 4.5 Activation of   p62-Keap1-Nrf2 Pathway   Protects 6-Hydroxydopamine-Induced Ferroptosis   in Dopaminergic Cells
HEI-OC1(耳蜗毛细胞) Journal   of Cellular   and Molecular Medicine 2020 4.486 Inhibition of ferroptosis protects   House Ear   Institute-Organ of Corti 1 cells and cochlear hair cells   from   cisplatin-induced ototoxicity
PMVECs(肺微血管内皮细胞) Lung   Cellular and   Molecular Physiology 2019 4.406 Genetic inactivation of the     phospholipase A2 activity of peroxiredoxin 6 in mice protects against     LPS-induced acute lung injury
HepG2(人肝癌细胞) Journal   of   Agricultural and Food Chemistry 2019 4.192 Novel Fluorescence-Based   Method To   Characterize the Antioxidative Effects of Food Metabolites   on Lipid Droplets   in Cultured Hepatocytes
HeLa(人宫颈癌细胞) Communications     Biology 2018 4.165 Golgi stress mediates redox   imbalance   and ferroptosis in human cells
THP-1(人髓系白血病单核细胞);(1×105 cells/mL) Scientific   Reports 2016 3.998 Molecular hydrogen regulates gene   expression by modifying   the free radical chain reactiondependent   generation of oxidized phospholipid   mediators
4T1细胞(小鼠乳癌细胞); HT1080(人纤维肉瘤细胞) Nanotechnology 2016 3.551 WO3/Pt   nanoparticles   promote light-induced lipid peroxidation and lysosomal   instability within   tumor cells
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) RSC   Advances 2012 3.119 A novel fluorescent probe with high   sensitivity and   selective detection of lipid hydroperoxides in cells
Burkitt’s   Lymphoma(Burkitt淋巴瘤细胞) Biochemical   and   Biophysical Research Communications 2019 2.985 Artesunate activates the     ATF4-CHOP-CHAC1 pathway and affects ferroptosis in Burkitt’s Lymphoma
THP-1(人髓系白血病单核细胞) Canadian   Journal of   Physiology and Pharmacology 2019 1.946 Molecular hydrogen suppresses   free radical-induced cell   death by mitigating fatty acid peroxidation   and mitochondrial dysfunction
Horse breed   stallions(种马精子) Animal   Reproduction   Science 2019 1.66 Effects of media and     promoters on different lipid peroxidation assays in stallion sperm
Human hair(人头发) Cosmetics 2018 0.732 Mechanism of Cuticle Hole   Development   in Human Hair Due to UV-Radiation Exposure

 

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