Thermo Pierce™ 磁性 ChIP 试剂盒 分子生物试剂
- 产品型号: 26157
- 简单描述
- Thermo Pierce™ 磁性 ChIP 试剂盒Thermo Scientific Pierce 磁性 ChIP 试剂盒提供了一种通过免疫沉淀(染色质 IP)高效分离染色质结合 DNA 的便利方法,用于随后通过 PCR 进行定量分析。
Thermo Pierce™ 磁性 ChIP 试剂盒
Thermo Scientific Pierce 磁性 ChIP 试剂盒提供了一种通过免疫沉淀(染色质 IP)高效分离染色质结合 DNA 的便利方法,用于随后通过 PCR 进行定量分析。
磁性 ChIP 试剂盒的特点:
•快速— 可在约 8 小时内获得适于进行定量 PCR 的纯化 DNA
•高效且可重现—微球菌核酸酶酶切过程和细胞核裂解过程均经高度优化
•灵敏—只需 10,000 个细胞 (1 x 10^4) 即可获得结果
•低背景—Pierce 蛋白 A/G 磁珠已在不含 DNA 的试剂中进行封闭,可极大限度地降低背景
•全面—包括优化的阳性对照试剂:RNA 聚合酶 II 抗体和 GAPDH 启动子 PCR 引物
Pierce 磁性染色质免疫沉淀分析 (ChIP) 试剂盒含有足够的试剂,可使用优化的方案采用适当对照品进行 30 次 ChIP 检测。试剂盒中包含的试剂可用于裂解细胞、捕获蛋白-DNA 复合物,逆转交联以及分离 DNA。封闭 Pierce 蛋白 A/G 磁珠具有ji高的结合容量和较低的非特异性背景,可与很多种抗体一起使用。这些微珠可与磁力架或自动化平台(例如,Thermo Scientific KingFisher 仪器)一起用于手动工作流程。还提供经验证适用于 ChIP 且具备质量保证的抗体,与 Pierce 磁性 ChIP 试剂盒配合使用。
包括:
试剂盒含有用于染色质制备、IP 以及 DNA 纯化的试剂,同时也包含阳性对照品(抗体和引物)
需要:
体内交联剂(如甲醛)、微量吸头超声波仪(如 Misonix™ 超声波仪 3000)、符合 ChIP 要求的首xuan抗体、目标 DNA 序列的 PCR 引物、PCR 预混液(如果需要 qPCR,则含有一种染料,如 SYBR™ Green)和 qPCR 仪器
应用:
• 通过 PCR 或 ChIP-Seq 确定基因组 DNA 上特异性蛋白-DNA 相互作用的位点
• 监测组蛋白修饰或化学制剂对 DNA 结合的影响
要想成功进行 ChIP 检测,需要在检测靶标基因组 DNA 之前执行多个关键步骤(交联、染色质制备、免疫沉淀)。单独来讲,ChIP 实验方案中的每一步在优化时都很费时间。Thermo Scientific Pierce 磁性 ChIP 试剂盒简化了 ChIP 流程,可获得准确且可重现的结果。
蛋白-DNA 复合物首先在体内与甲醛交联。试剂盒含有的试剂可以裂解细胞,并可提取和溶解交联复合物。然后,将复合物和特异性抗体放在一起进行孵育,最后用 Pierce 蛋白 A/G 磁珠进行分离。在逆转交联和酶切蛋白后,纯化所得 DNA 片段,然后准备进行标准或定量 PCR。
Thermo Pierce™ 磁性 ChIP 试剂盒
规格
内容与储存
• PBS (20X),15 mL;在 4°C 下储存
• Halt™ 蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物,无 EDTA (100X),1 mL;在 4°C 下储存
• 膜提取缓冲液,10 mL;在 4°C 下储存
• MNase 酶切缓冲液,10 mL;在 4°C 下储存
• DTT (7.7 mg),冻干,2 个样品瓶;在室温或 4°C 下储存
• MNase 终止液,1 mL;在 4°C 下储存
• ChIP 级蛋白 A/G 磁珠,0.7 mL;在 4°C 下储存
• IP 稀释/洗涤缓冲液 (5X),40 mL,在 4°C 下储存
• 氯化钠 (5M),6 mL;在 4°C 下储存
• IP 洗脱缓冲液 (2X),4.5 mL;在 4°C 下储存
• 微量离心管,1.5 mL,75 个管;在室温或 4°C 下储存
• DNA 纯化柱和试剂,40 次纯化;在室温或 4°C 下储存
• DNA 纯化柱,40 个柱
• DNA 柱结合溶液,30 mL
• DNA 柱洗涤液,6 mL
• pH 指示剂,0.8 mL
• DNA 柱洗脱液,5 mL
• 微球菌核酸酶(ChIP 级)(10 U/µL),50 µL;在-20°C 下储存
• 抗 RNA 聚合酶 II 抗体,25 µL;在-20°C 下储存
• 正常兔 IgG (1 mg/mL),10 µL;在-20°C 下储存
• 蛋白酶 K (20 mg/mL),0.25 mL;在-20°C 下储存
• ChIP 阳性对照引物(GAPDH 启动子,人特异性),100 µL;在 -20°C 下储存