原装Qiagen试剂盒RNeasy Mini Kit (50) 分子生物试剂74104

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原装Qiagen试剂盒RNeasy Mini Kit (50) 分子生物试剂

  • 产品型号：  74104
  • 简单描述
  • 原装Qiagen试剂盒RNeasy Mini Kit (50)从细胞、组织或酵母中纯化至多100 μg的总RNA数分钟内快速纯化得到高品质总RNA即用型RNA在各种下游应用中表现良好少量起始样本，RNA产量稳定无需酚/ 氯仿抽提，无需氯化铯梯度离心，无氯化锂或者乙醇沉淀步骤
详细介绍

原装Qiagen试剂盒RNeasy Mini Kit (50)


RNeasy Mini Kit可从细胞、组织或酵母中快速纯化高品质RNA，硅胶膜RNeasy离心柱的结合能力达100 μg RNA。使用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent可方便的稳定组织样本，使用TissueRuptor或TissueLyser体系可有效的破碎组织。可在QIAcube全自动核酸纯化仪上应用RNeasy Mini Kit实现RNA纯化自动化。处理更小或更大的样本，可使用RNeasy Micro Kit（离心柱结合能力为45 µg RNA）、RNeasy Midi Kit（离心柱结合能力为1 mg RNA）和RNeasy Maxi Kit（离心柱结合能力为6 mg RNA）。

RNeasy Mini实验方案。

使用RNeasy Mini Kit纯化的总RNA具有高质量，适用于多种下游操作。实验方案还包括部分纯化的RNA、体外转录本和酶反应RNA的回收。不提供溶壁酶、酵母裂解酶或玻璃珠（酵母样本需要）。因样本来源的发育阶段、种属和生长条件的不同，从样本中分离的RNA量也各异。由于RNA酶步骤富集的RNA种属>200 nt，因此RNA产量不包括5S rRNA、tRNA或其他低分子量RNA。

从多种样本中纯化高品质RNA。

使用RNeasy Maxi Kit纯化的总RNA的甲醛琼脂糖凝胶电泳和northern印迹。从各种来源的样本中分离总RNA（10 µg）上样至各泳道。所有组织均来源于小鼠。酵母：Saccharomyces cerevisiae；E. coli菌株：HB101。32P标记的探针识别的（G）GAPDH；（E）翻译延长因子EF-1α；和（O）外膜蛋白A序列。（E和O分别由瑞士巴塞尔大学的P. Philippsen和德国蒂宾根马克斯-普朗克生物学研究所的U. Henning提供。）B. subtilis未采用探针检测。M：0.24–9.5 kb RNA分子量标准。胚胎、Huh7和HeLa细胞泳道中的7.5 kb条带（图示）为核前体RNA。

对少至100个细胞的RNA进行RT-PCR。

使用RNeasy Mini Kit从图示数目的HeLa细胞中分离的总RNA的RT-PCR。使用不含RNA酶的DNA酶酶切10 µl（1/5）洗脱液，并使用oligo-dT引物进行逆转录。使用2.5 µl（1/20）的cDNA混合物进行50 µl PCR。扩增452 bp的GAPDH片段。C-：阴性对照；C+：阳性对照；M：100 bp分子量标准。

RNeasy Mini离心柱。

RNeasy Mini Kit中提供RNeasy Mini离心柱。


原装Qiagen试剂盒RNeasy Mini Kit (50)


性能

RNeasy Mini Kit可从至多30 mg动物或人类组织样本，或从100–1 x 107个动物或人类细胞样本或酵母中纯化总RNA。

RNeasy Mini Kit纯化得到的总RNA产量

样本来源 起始材料 平均产量（µg）
动物细胞
LMH
HeLa
COS-7
淋巴细胞（未受激）		 1 x 106
1 x 106
1 x 106
1 x 106		 12
15
35
0.5
小鼠组织
肝
肺
脾		 10 mg
10 mg
10 mg		 40
10
35
真菌细胞
S. cerevisiae		 1 x 107 25
原理

RNeasy Mini Kit可从少量的样本中高效纯化总RNA。RNeasy纯化技术整合了ben酚/异硫氰酸胍裂解的严谨性和硅胶膜纯化的速度和纯度，简化了总RNA纯化技术。纯化得到高品质的RNA，并且DNA残留水平达到zui低。

操作流程
RNeasy Mini Kit可从10–1 x 107个动物或人类细胞中、0.5–30 mg动物或人类组织中或小于5 x 107个酵母细胞中方便的纯化总RNA。先对样本进行破碎和匀浆。在裂解物中加入乙醇以提供合适的结合条件。然后将裂解物上样至RNeasy硅胶膜。RNA结合到膜上（最多可结合100 µg），污染物被高效洗去。对于某些对少量DNA十分敏感的RNA应用，可在RNeasy操作过程中进行柱上DNA酶处理，去除DNA残留。之后可在30–100 µl的纯水洗脱液中得到高浓度的纯化RNA。还有各种特殊应用的实验方案可供选择。
应用

使用RNeasy技术纯化得到的RNA的A260/280比为1.9–2.1（10 mM Tris­·Cl、pH 7.5的溶液中），适用于多种下游应用，包括：

Northern印迹、点印迹和狭缝印迹
终点式RT-PCR
定量real-time RT-PCR
芯片分析
Poly A+ RNA筛选
特点
参数
Applications PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
Elution volume 30–100 µl
Format Spin column
Main sample type Tissue, cells
Processing Manual (centrifugation)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein Total RNA
Sample amount 0.5–30 mg
Technology Silica technology
Time per run or per prep 20 minutes
Yield Varies