MitoBright IM Red for Immunostaining

05 細胞染色用色素

MitoBright IM Red for Immunostaining

• 細胞染色用色素
• 細胞機能解析
• ミトコンドリア関連

免疫染色用ミトコンドリア検出蛍光色素 Red

• 免疫染色法と共染色できる
• 固定化・膜透過処理後もミトコンドリアに滞留しやすい
• 血清培地中で染色できる

• 製品コード
  MT15　 MitoBright IM Red for Immunostaining

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マニュアル

免疫染色法との共染色

既存の低分子ミトコンドリア染色試薬には、免疫染色法と共染色する際に鮮明さに課題がありました。これは、ミトコンドリアに集積していた試薬が、細胞染色後の固定化や膜透過処理によってミトコンドリア以外の細胞質や細胞外へ移動することで、バックグラウンドの増加や蛍光シグナルの低下を起こします。MitoBright IMは、生細胞で染色した後の免疫染色の工程でもミトコンドリアに保持されやすい構造を有するため、免疫染色と併用する際の課題を解決する新しい色素です。

MitoBright IMでミトコンドリアを染色したHeLa細胞を固定化と膜透過処理後、小胞体のマーカータンパクであるKDEL抗体を用いた免疫染色法と共染色しました。また、蛍光画像の矢印(青色)で示した範囲において、各々の蛍光強度を測定しました(右図)。その結果、鮮明にミトコンドリアおよび近接する小胞体の形態を観察できました。

＜検出条件＞
MitoBright IM Red (赤) Ex: 561 nm, Em: 560-620 nm
KDEL抗体-Alexa 488 (緑) Ex: 488 nm, Em: 490-550 nm
スケールバー：10 μm

Q

MitoBright IM Red は DMSO溶液ですが、凍結融解を繰り返しても劣化しないのでしょうか？

A

小社では凍結融解を5回繰り返した溶液を用いても、染色が可能であったことを確認しております。
長期間保存を行われる場合は、小分けした後に保存することを推奨致します。

Q

細胞を薬剤処理した後にMitoBright IMで染色したところ、染まり方にムラが生じました。 対処方法を教えてください。

A

薬剤処理をする前にMitoBright IMで染色してください。
本色素はミトコンドリア膜電位に応じて集積する性質を持ち、著しく膜電位が低下したミトコンドリアには集積しません。

（参考）
HeLa細胞をFCCPによる処理前後でMitoBright IMで染色し、蛍光観察しました。
MitoBright IMで染色後にFCCP処理を行うと蛍光が観察されましたが、FCCP処理後に染色した場合は、蛍光が観察されませんでした。

 

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