RNA干扰(RNA interference;RNAi)是基因表达抑制的一种方法。RNAi是由于双链RNA的导入,分解靶基因的mRNA,使其表达受到抑制的一种方法。在哺乳动物细胞中,使用21-23个碱基的短的双链RNA(short interfering RNA;siRNA)获得的RNAi效果比较明显。RNAi实验的主要技术有合成的siRNA直接导入细胞的方法和表达载体在细胞内表达siRNA的方法,这两种方法应用比较普遍。合成的siRNA直接导入细胞的方法RNAi效果短暂;用表达载体在细胞内表达siRNA的方法,能够获得持续性的RNAi效果,一旦获得了导入表达载体的细胞,就有可能获得基因表达长期受抑制的效果。 因为逆转录病毒载体可以在感染细胞的染色体上稳定的重组目的基因,所以使用载体转染方法获得长期稳定的RNA干扰作用是非常有效的。pSINsi载体系列是以自我复制缺陷型逆转录病毒载体作为基本骨架,使用RNA polymerase III (pol III)系列的promoter表达hairpin型RNA。RNA polymerase III (pol III)系列promoter下游的克隆位点插入表达hairpin型RNA的合成寡核苷酸DNA,就可以获得siRNA表达逆转录病毒载体,以新霉素作为这种载体的抗性筛选基因。 |
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