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基因编辑后克隆基因型确认
Guide-it Genotype Confirmation Kit |
每个细胞中大部分基因都拥有两个等位基因。CRISPR/Cas9基因编辑可以对特定基因的一个或两个等位基因引入插入突变或缺失突变(indels)。Guide-it Genotype Confirmation Kit提供了一种简单的方法，用于确认特定克隆是一个等位基因突变（单等位基因），还是两个等位基因突变（双等位基因突变），或者是未发生变化（野生型）。实验操作中涉及到从Cas9 和single guide RNA (sgRNA)处理的细胞中扩增靶点序列。扩增出的序列被用在重组Cas9和相同的sgRNA的体外剪切反应。剪切产物通过琼脂糖凝胶电泳，确定基因型。
基因编辑后使用该试剂盒，加快了在大量克隆中筛选所需基因型的进程。每个试剂盒包含足够的试剂，用于100次提取、扩增和剪切反应。 |
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| 产品特点： |
· Cas9 和sgRNA体外剪切实验，用于确定单等位基因突变和双等位基因突变
· 包括高纯度的重组Cas核酸酶，用于体外剪切实验
· 流程化的操作步骤，使用来自于细胞的目的基因组DNA直接扩增
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| 产品应用： |
· CRISPR/Cas9 基因编辑
· CRISPR/Cas9 基因编辑后，单等位基因突变和双等位基因突变的确定 |
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| 实验例： |
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A图：使用Cas9和靶向C4BPB 基因的sgRNA对HEK 293细胞进行基因编辑。使用Guide-it Genotype Confirmation Kit对获得的15个单细胞克隆进行C4BPB位点的基因型鉴定。图中左侧的野生型 (WT)，单等位基因 (M)，双等位基因 (B)在分析中作为对照。结果表明克隆1，4，10，12是野生型；克隆2是单等位基因突变；以及克隆3，5-9，11和13-15是双等位基因突变。
B图：对A图中挑选的克隆进行测序分析。每个结果中，小写字母代表的是野生型（WT）序列。对于那些在A图中使用基因型鉴定方法确认的双等位基因突变的克隆，进一步测序分析表明克隆7是杂合子，克隆9和11是纯合子。在克隆2中，检测到3种不同的等位基因，可能是因为在HEK 293细胞系中出现拷贝数变异。
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| （数据来源于Takara Bio USA, Inc.） |
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