| |
| ■ 制品内容 |
| SPP System Set (Code No.: 3366) |
|
1. SPP System Set
pCold I (SP-4) DNA、pCold II (SP-4) DNA
pCold III (SP-4) DNA、pCold IV (SP-4) DNA |
各20 μg |
| 2. pMazF DNA (20 ng/μl) |
0.5 μg |
| 3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) |
0.2 μg |
| |
|
| SPP System I～IV (Code No.: 3367～3370) |
|
| 1. pCold I～IV (SP-4) DNA中一个(0.5 μg/μl) |
20 μg |
| 2. pMazF DNA (20 ng/μl) |
0.5 μg |
| 3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) |
0.2 μg |
| |
|
|
| ■ GenBank登录 |
| |
Accession No. |
| pCold I (SP-4) DNA |
AB248600 |
| pCold II (SP-4) DNA |
AB248601 |
| pCold III (SP-4) DNA |
AB248602 |
| pCold IV (SP-4) DNA |
AB248603 |
| |
| ■ 链长 |
|
| pCold I (SP-4) DNA |
4,407 bp |
| pCold II (SP-4) DNA |
4,392 bp |
| pCold III (SP-4) DNA |
4,377 bp |
| pCold IV (SP-4) DNA |
4,359 bp |
|
| |
| ■ 制品说明 |
根据美国新泽西州医学与牙科大学的井上正顺博士小组的研究，大肠杆菌的蛋白质MazF是一种能够识别并切断单链RNA特定序列 (ACA) 的核酸内切酶 (mRNA Interferase)。利用MazF可以抑制宿主蛋白质表达，只表达目的蛋白质。利用这一技术，开发了Single Protein Production (SPP) System。
在SPP System中，在保持氨基酸序列不变的情况下用非ACA序列置换目的基因中的ACA序列，然后与MazF基因共表达。大部分宿主蛋白的mRNA因为有ACA序列而被MazF分解，表达被抑制，但是目的基因的转录mRNA中不含有ACA序列，不能被MazF切断，从而使目的蛋白得到高效表达。由于目的蛋白质的不同，也有比单纯使用冷休克表达载体进行表达时表达量低的情况。构建SPP系统，首先需要通过化学合成或点突变的方法制备无ACA序列的目的基因。设计无ACA基因的时候，在确保氨基酸序列不变的情况下将ACA序列替换，同时加入必须的酶切位点。其次，将无ACA基因克隆至含有无ACA转录区域的pCold (SP-4) 载体中。至此，用于目的片段的SPP系统表达的载体准备完毕，将其与能够表达足量的MazF的pMazF载体共转化至E.coli中，形成了目的片段的SPP。
SPP System用的冷休克表达载体与pCold冷休克表达载体一样，根据TEE序列、His tag和Factor Xa酶切位点序列有无，分成4个载体，分别是pCold I～IV (SP-4) DNA，pCold IV (SP-4)在多克隆位点的上游没有附加的序列。 |
| |
| ■ 保存 |
| -20℃。 |
| |
| ■ 特长 |
同位素标记方便：标记的目的蛋白质最大可达到宿主胞内新生蛋白质的90%。
使用宿主广泛：CspA启动子来源于大肠杆菌，所以大部分的大肠杆菌都可作为宿主使用。因为共表达用载体pMazF DNA的筛选标记是氯霉素，所以具有氯霉素抗性的大肠杆菌 (例如：Rosseta等)不能作为宿主使用。 |
| |
| ■ 纯度 |
用于pCold (SP-4) DNA系列载体。
1. 用双脱氧测序法确认多克隆位点。
2. 确认多克隆位点上的限制酶Nde I, Sac I, Kpn I, Xho I, BamH I, EcoR I, Hind III, Sal I, Pst I 和Xba I只有一个酶切位点。 |
|
| |
| ■ SPP System 原理图 |
 |
| |
| ■ SPP System冷休克表达载体图谱 |
| |
TEE序列 |
His tag序列 |
Factor Xa切断序列 |
| pCold I (SP-4) DNA |
○ |
○ |
○ |
| pCold Ⅱ (SP-4) DNA |
○ |
○ |
× |
| pCold Ⅲ (SP-4) DNA |
○ |
× |
× |
| pCold Ⅳ (SP-4) DNA |
× |
× |
× |
|
| |
 |
 |
| |
| ■ MazF表达质粒pMazF DNA载体图谱 |
 |
| |
