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■ 制品内容 (5 次量)  |
| Exonuclease Ⅲ (180 U/μl) |
10 μl |
| Exo Ⅲ Buffer |
500 μl |
| Mung Bean Nuclease (25 U/μl) |
20 μl |
| Mung Bean Nuclease buffer |
500 μl |
| Klenow fragment (2 U/μl) |
10 μl |
| Klenow Buffer |
250 μl |
| Ligation Solution A |
500 μl |
| Ligation Solution B |
60 μl |
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| ■ 制品说明 |
本制品是对M13mp系列噬菌体载体 (mp18、19) 和pUC系列质粒载体 (pUC18、19和pUC118、119) 多克隆位点中插入的数千个碱基片段进行测序的试剂盒。
同时本制品也可有效用于DNA片段末端的单向缺失。
本制品是Steven Henikoff法 (Gene (1984)28、351～359) 和Celeste Yanision-Perron法(Gene(1985)33、103～119)的改良品。 |
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| ■ 保存 |
| -20℃。 |
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| ■ 长链DNA测序原理 |
| 本制品是利用Exonuclease Ⅲ 的3’→5’外切酶活性制作连续的单向缺失DNA片段的试剂盒。Exonuclease Ⅲ从5’突出末端或平滑末端的3’端连续降解核苷酸，但对于3’突出末端的降解活性较低。基本上，插入的目的DNA是被连续消化的，但测序引物的退火结合位点通过连接4碱基的3’突出的限制酶切位点而避免被消化。分取不同时间间隔的Exonuclease Ⅲ反应液，用Mung Bean nuclease/buffer cocktail处理，终止Exonuclease Ⅲ反应并同时切断互补链的5’突出末端。使用Klenow Fragment进行平滑化后，使用Ligation cocktail进行连接环化，转化到感受态细胞中。 |
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