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■ 制品内容 |
E.coli DH5α Electro-Cells |
50 μl × 10 |
pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) |
10 μl |
SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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*SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
0.5% |
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Yeast extract |
10 mM |
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NaCl |
2.5 mM |
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KCl |
10 mM |
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MgSO4 |
10 mM |
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MgCl2 |
20 mM |
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Glucose |
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■ 制品说明 |
E. coli DH5α Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜,从而使外源DNA转入宿主细胞的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大,尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。 E.coli DH5α在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时,利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性) ,应用蓝白斑方法可以很容易鉴别重组体菌株。由于菌株无lacl q,故不需要IPTG。因此,当制作基因文库或进行亚克隆时,可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
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■ 细胞浓度 |
>1×1010 bacteria/ml |
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■ Genotype |
E. coli DH5α:F-, φ80dlacZ Δ M15, Δ ( lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA , supE44 , λ-, thi -1 , gyrA96 , relA1 |
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■ 保存 |
-80℃。 注意: -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定,转化降低将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
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■ 质量标准 |
1. 转化效率 转入10 pg 的pUC19,涂于含有A+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 109 transformants /μg pUC19 2. β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 DNA时,含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-琼脂平板上出现蓝色菌落。 |
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■ 注意事项 |
1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 |
2. 当使用50 μl Electro-Cells时,添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。 |
3. 导入分子量较大的DNA (>7 kb) 时,转化效率降低。 |
4. 当改变实验规模时,适当改变反应条件。 |
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。 |
·L-broth: Ingredient |
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per liter water |
Tryptone |
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10 g |
Yeast extract |
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5 g |
NaCl |
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5 g |
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用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。 |
·φb-broth: Ingredient |
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per liter water |
Tryptone |
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20 g |
Yeast extract |
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5 g |
MgSO4·7H2O |
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5 g |
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用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。 |
6. 稀释时,使用“使用方法4”中加入的SOC培养基。 |
7. 当使用X-Gal时: |
·将20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200~300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中。 |
8. DH5α可作为M13mp载体的复制。但由于不携带F因子,因而不能形成菌斑。 |
9. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。 |
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