本制品以含有T7启动子序列的双链DNA为模板，以NTPs为底物，转录启动子下游区域，合成与模板互补的单链RNA。与附带的buffer一起用于体外转录 (IVT) 反应时，可以大量制备高质量的RNA。
本制品是T7 RNA Polymerase（Code No. 2540A/B）的升级产品，每个反应（20 μl体系）的RNA合成量提高约7倍（图1），性能更强！ |
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| 图 1. 本制品与旧产品合成 FLuc RNA（约 1.9 kb）时的产量比较（20 μl 体系） |
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| * 典型的 T7 启动子序列和转录起点 |
| 为 IVT 反应制备模板 DNA 的典型 T7 启动子序列如下所示。将转录起始点（+1 位置）的碱基设置为“G”对于高效的 RNA 合成很重要，但需要根据要合成的RNA序列和用于5′-cap修饰的Cap类似物的特点来设计模板，所以要根据目的准备模板DNA。 |
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| ■ 保存 |
| －20℃ |
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| ■ 起源 |
| Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase. |
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| ■ 性质 |
1. 分子量：约99 kDa
2. 辅因子：Mg2+ |
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| ■ 活性定义 |
| 在 37℃，1 小时内使 1 nmol [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位（unit)。 |
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| ■ 用途 |
1. 使用 Cap 类似物合成带帽的 mRNA
2. 长链非编码 RNA 的合成
3. guide RNA 的合成
4. siRNA前体的合成
5. 用于 RT-qPCR 的 RNA 标准模板的合成
6. 高标记RNA 探针的合成 |
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| ■ 使用注意 |
1. 酶不要剧烈搅拌。
2. 当 dsDNA 模板、试剂、试管或微量移液器吸头被 RNase 污染时，合成的 RNA 的产量会降低或者出现片段化。在实验过程中应采取预防措施以避免 RNase 污染，例如戴一次性手套和使用专门用于 RNA 实验的试管和微量移液器吸头。
3. 为了合成长度一致的RNA，通常使用线性dsDNA（例如线性化质粒和 PCR 产物）用于体外转录。有报道称，模板DNA末端应为5’-突出或平端，以避免出现非特异性产物。
4. 缓冲液中的亚精胺会与核酸形成复合物并可能产生沉淀，因此模板 DNA 应在加酶之前即倒数第二步再加入反应体系中。
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