| TaKaRa Taq*1 (5 U/ μl) |
50 μl (250 U) |
| dNTP Mixture*2 (各2.5 mM) |
1.28 ml |
10 × PCR Buffer (Mg2+ plus)
100 mM Tris-HCl(pH8.9)
500 mM KCl
15 mM MgCl2
|
1 ml |
|
10 × PCR Buffer (Mg2+ Free)
100 mM Tris-HCl(pH8.9)
500 mM KCl
|
1 ml |
| MgCl2 (25 mM) |
1 ml |
| Control Template (1 μg/ml λ DNA) |
100 μl |
| Control Primer 1*3 (20 pmol/μl) |
50 μl |
| Control Primer 2*3 (20 pmol/μl) |
50 μl |
| Control Primer 3*3 (20 pmol/μl) |
50 μl |
| λ-EcoT14 I Marker*4 (100 ng/μl) |
40 μl |
| 6 × Loading Buffer*5 |
1 ml |
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| *1 TaKaRa Taq™酶说明 (5 U/μl) |
| 【酶贮存液】 |
| 20 mM Tris-HCl（pH8.0），100 mM KCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，0.5% Tween20，0.5% NP-40，50% Glycerol。 |
| 【活性定义】 |
| 用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃、pH9.3、30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位 (U)。 |
| 【Reaction mixture】 |
| 25 mM |
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TAPS (pH9.3，25℃) |
| 50 mM |
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KCl |
| 2 mM |
|
MgCl2 |
| 0.1 mM |
|
DTT |
| 200 μM |
|
each dATP·dGTP·dCTP |
| 100 μM |
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[3H]-dTTP |
| 0.25 mg/ml |
|
activated salmon sperm DNA |
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| |
| *2 dNTP Mixture (各2.5 mM) |
dNTP Mixture无需稀释，可直接用于PCR。
Form：溶于水 (钠盐)，pH7-9
纯度：每种dNTP≥98% |
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| *3 Control Primer序列 |
| Control Primer 1 |
5′-GATGAGTTCGTGTCCGTACAACT-3′ |
| Control Primer 2 |
5′-CCACATCCATACCGGGTTTCAC-3′ |
| Control Primer 3 |
5′-GGTTATCGAAATCAGCCACAGCGCC-3′ |
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| * 使用Control Primer 1、2时，可以扩增Control Template (λ DNA)的6,012 bp DNA片段。使用Control Primer 1、3时，可以扩增Control Template (λ DNA)的500 bp DNA片段。 |
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| *4 λ-EcoT14 I Marker |
| 此marker是用限制性内切酶EcoT14 I分解λcl857 Sam7 DNA得到的。由DNA片段19,329 bp；7,743 bp；6,223 bp；4,254 bp；3,472 bp；2,690 bp；1,882 bp；1,489 bp；925 bp；421 bp；74 bp等组成。由于λ DNA分解的末端片段与COS end相连，需加热处理（60℃，5 min.）。 |
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| *5 6×Loading Buffer的组成 |
| 36% |
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甘油 |
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| 30 mM |
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EDTA |
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| 0.05% |
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溴酚兰 |
|
| 0.035% |
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二甲苯青 |
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