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■ 制品内容 (Code No.: RR023A : 100次量*1)  |
| BcaBEST Polymerase (22 U/μl) |
50 μl |
| RNase Inhibitor (40 U/μl) |
25 μl |
| Random 9 mers (50 μM) |
50 μl |
| Oligo dT Primer (50 μM) |
50 μl |
| RNase Free dH2O |
1 ml |
| Bca-Optimized Taq (5 U/μl) |
25 μl |
| 2 × Bca lst Buffer |
1.25 ml × 2 支 |
| 5 × Bca 2nd Buffer |
800 μl |
| dNTP Mixture (各10 mM) |
50 μl |
| MgSO4 (25 mM) |
500 μl |
| Control F-1 Primer*2 (20 μM) |
25 μl |
| Control R-1 Primer*3 (20 μM) |
25 μl |
| Positive Control RNA (2 × 105 copies/μl) |
25 μl |
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*1 反转录反应10 μl，PCR反应体系50 μl，可使用100次。
*2 Positive Control RNA用上游引物。
*3 Positive Control RNA用下游引物。 |
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| ■ 制品说明 |
PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
本试剂盒含有从RNA反转录到cDNA以及扩增此cDNA所必需的全部试剂，即用Bacillus caldotenax来源的BcaBEST Polymerase从RNA合成cDNA，然后在同一试管内加入应用LA PCR技术研制的Bca-Optimized Taq扩增此cDNA。此外，使用BcaBEST Polymerase进行反转录反应的最适温度是65℃，所以对具有复杂二级结构的RNA特别适合。 |
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| ■ 各种引物的序列 |
| 引物名称 |
各引物序列 |
| Random 9 mers |
5′-NNNNNNNNN-3′ |
| Oligo dT Primer |
包含Takara特别设计的dT区域。本序列与TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver.3.0（Code No. RR019A/B）及TaKaRa RNA LA PCR Kit（AMV）Ver.1.1（Code No. RR012A）中的Oligo dT-Adaptor Primer的序列不同，没有M13 Primer M4区域。 |
| Control F-1 Primer |
5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′ |
| Control R-1 Primer |
5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ |
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| ■ 试剂盒的原理 |
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| BcaBEST RNA PCR的原理图 |
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| ■ 试剂盒特点 |
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RNA模板
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适用于所有RNA (对富含GC的mRNA及具有复杂二级结构的mRNA特别有效) |
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扩增片段大小
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5 kb以下 |
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反转录酶
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BcaBEST Polymerase (最适温度65℃) |
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DNA聚合酶
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Bca-Optimized Taq |
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RNase Inhibitor
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必须使用 (试剂盒中含有) |
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合成cDNA第一条链的引物
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Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或 特异性下游PCR Primer 可供选择 |
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操 作
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在同一反应管中进行 (反转录酶在进行PCR反应前须进行高温失活) |
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