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| SMART-Seq HT Kit & SMART-Seq HT Plus Kit：自动化友好型的单细胞mRNA全长分析 |
· 自动化友好型 - 兼容自动化工作站，更少的时间分析更多的样本
· 高灵敏度 - 可以从单细胞或10 pg总RNA起始（起始量：1-100个细胞或10 pg-1 ng总RNA）
· 高质量的RNA-Seq数据 - 保留全长基因信息，低rRNA比率，高基因检出数，有效扩增GC-rich转录本
· 单管操作流程 - SMART-Seq HT PLUS Kit包含完整的cDNA合成和文库构建流程，分别在单管中进行，减少样品损失与混淆，降低手动操作误差
· 增强的测序性能 - SMART-Seq HT PLUS Kit整合双端特殊index（UDI），即便多个文库pool后用高通量型illumina测序仪（如Novaseq）分析，也能得到正确结果
· 更高的文库产量 - 更便于使用高通量型illumina测序仪测序（如Novaseq），或保存剩余的文库用于多次测序 |
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| ■ 产品说明 |
SMART-Seq HT Kit（SS-HT）和SMART-Seq HT Plus Kit（SS-HT PLUS）均兼容自动化移液工作站，采用oligo(dT)引物，支持1-100个细胞或10 pg-1 ng总RNA起始。
SS-HT试剂盒是从第4代的SMARTer Ultra Low试剂（SMART-Seq v4）发展而来的，具有简化的操作流程，将原有的反转录和PCR扩增步骤整合为一步，且不影响性能。细胞分离或RNA提取后，仅通过一步RT-PCR扩增双链cDNA，然后进行纯化完成操作。cDNA合成可在4小时内完成，整个文库构建方案可在2天内完成。而且，SMART-Seq HT试剂盒具有与SMART-Seq v4试剂盒相同的灵敏度和可重复性。核心的SMART技术，是一种对全转录组研究，以及包括细胞内剪接位点，可变剪接研究的非常强大的工具，且可以检测全长基因。 Oligo（dT）可以从高品质总RNA（RIN> 8）或完整细胞中特异性扩增mRNA。 通过采用LNA技术，提升了模板转换的效率与基因检出数等性能。
SS-HT PLUS Kit在包含核心的cDNA合成试剂基础上，同时整合了Takara Bio Group专利性的文库构建技术（U.S. Patents 7,803,550, 8,399,199, 8,728,737, 9,598,727, 10,196,686, 10,208,337, and 11,072,823）及单次使用的双端特殊index（UDI），提供完整的单细胞cDNA合成到文库构建的实验体验。建库试剂中包含片段化酶，以实现对合成cDNA的片段化，接着利用特别的茎环形接头构建高品质illumina文库。在建库阶段，单管两步操作、过程中无需纯化、2 h即可建成文库！ |
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| ■ SS-HT Kit：流程缩短、性能不变！ |
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| 图1 SMART-Seq HT的技术流程 |
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| 图2 SMART-Seq v4和SMART-Seq HT工作流程的比较 |
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| SMART-Seq HT（右）是由SMART-Seq v4方法（左）经过改进而来的一个手动操作时间更短的高通量工作流程。使用FACS方法获得单细胞，SMART-Seq HT试剂盒只需3个操作步骤即可制备cDNA，而SMART-Seq v4试剂盒需要6步。SMART-Seq HT工作流程的一个重要步骤是一步RT-PCR，即使用一步RT-PCR缓冲液，进行高效的反转录和PCR扩增cDNA的过程。 |
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| 图3 使用SMART-seq v4 kit和SMART-Seq HT kit从FACS分选的293T细胞中获得的高重复性的基因表达数据 |
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| 使用SMART-Seq v4试剂盒（SSv4_1-SSv4_12）和SMART-Seq HT试剂盒（ HT_1-HT_9）（上图）从21个293T细胞单细胞制备文库，并对每个细胞获得的基因表达性进行评估。层次聚类热图展示了所有细胞之间的Euclidean distances，并显示从0.74到0.97的Pearson相关性。不仅用相同试剂盒制备的细胞之间可以观察到非常高的相关性，而在两种试剂盒之间的相关性也非常高。这些数据表明，SMART-Seq HT的工作流程与SMART-Seq v4相比，在基因表达分析中没有显著的偏差。 |
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| ■ SS-HT PLUS Kit：不只是一个Kit，更是完整的单细胞RNA-Seq建库体验！ |
| 为了使单细胞cDNA合成、文库构建实验“一步”到位，我们全新推出了SS-HT PLUS Kit。 |
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| 从高灵敏度、高重复性的cDNA合成出发，构建更高品质illumina文库 |
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| Takara科学家从10 pg小鼠脑total RNA起始，采用SMART-Seq HT Kit完成cDNA合成。随后分别使用SS-HT Plus Kit中的SMART-Seq Library Prep Kit模块与市面上较常用的A公司试剂盒构建文库，并比较性能差异。 |
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| (比较数据来源于Takara Bio USA, Inc.) |
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| 从测试数据中可以看出，SS-HT PLUS Kit所建文库的产量是A公司Kit产量的5倍，而更高的文库产量更适于高通量型Illumina测序仪，如Novaseq。 |
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| 两种方法所建文库随后用Nextseq 500完成测序，并对TPM(Transcripts per million)≥0.1的基因数进行统计。SS-HT PLUS文库能比A公司文库多检出10%的基因，从同样的cDNA起始能“捕获”更全的信息！ |
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| 更多实验数据： |
| SS-HT Kit |
| SS-HT Plus Kit |
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| 延伸阅读： |
| 单细胞NGS解决方案 |
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