α-突触核蛋白聚集检测试剂盒 
(ALPHA)-Synuclein Aggregation Assay Kit    

　　α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模拟在路易体痴呆、帕金森病、多系统萎缩中发现的细胞内α-突触核蛋白聚集。

　　本试剂盒可用于在细胞培养水平上，检测目标活性物质对细胞聚集的抑制和/或预防作用。

◆背景 　　 痴呆症是导致记忆和辨别能力退化的疾病，还没有根治的方 法。经过多年的科学研究证实，许多神经变性病（包括痴呆 症）的大脑退化部位会发生蛋白凝聚，表明这种聚集的出现与 这些疾病的发生和发展密切相关。 正常蛋白形式因特定原因形成异常结构并在细胞中积累时，会发生蛋白聚集，每种疾病有不同的聚集蛋白。目前已知在帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩病人脑内，α-突触核蛋白结构形成异常结构。 α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模拟细胞内“α-突触核蛋 白”的聚集情况，可用于在体外筛选活性成分。

◆试剂盒组成

组成	容量	规格	保存
pCMV-SNCA (α – Synuclein 表达质粒, 红盖)  (浓度1.25 μg/μL)	32 μL	1 小瓶	4°C 不冻结
pCMV-NC(阴性对照, 绿盖) (浓度1.25 μg/μL)	5 μL	1 小瓶
pCMV-dGFP(dGFP 表达质粒, 蓝盖) (浓度1.25 μg/μL)	5 μL	1 小瓶
20 mM Tris-HCl Buffer (pH 7.4)	10 mL	1 瓶
F-αSyn (α – Synuclein 纤维, 黄盖) (浓度1 μg/μL)	32 μL	1 小瓶
Multifectam (基因转染试剂)	0.33 mg	1 瓶

◆检测流程

◆实例

一  免疫印迹法Western blotting (使用各种突触核蛋白抗体)

1、除去培养基。

2、每个孔添加 1 mL PBS, 用移液器收集细胞。

3、离心 (4,500 rpm [1,800 x g], 5 分钟,室温), 收集沉淀。

4、添加 0.1 mL 裂解缓冲液(10 mM Tris-HCl, pH 7.5 含 0.8 M NaCl, 1 mM乙二醇双（2-胺基乙基醚）-

　  N，N，N，N-四乙酸 (EGTA), 1 mM DTT 和 1% N-月桂酰肌氨酸钠), 超声波混合。

5、离心 (50,000 rpm [100,000 x g], 20 分钟, 室温)。

6、添加 40 µL 2 x SDS Buffer (0.125 M Tris-HCl pH6.8, 200 mM 1,4二硫苏糖醇(DTT), 4% 十二烷基硫酸钠

　  (SDS) , 10%蔗糖, 0.01% BPB) 至颗粒中,超声波混合, 加热 (100 °C,5 分钟), 进行 10 µL/well 的免疫印迹。

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二  淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒

　　使用淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒(Cosmo Bio,产品编号：CSR-SYN02-COS)，可对已发生聚集的α-突触核蛋白和核仁进行双重染色。

阴性对照载体（pCMV-NC）
相位图	核染色	突触核蛋白聚集
使用α-突触核蛋白（pCMV-SNCA+F-α Syn）
相位图	核染色	突触核蛋白聚集

仅用于研究。不得用于人类基因治疗或临床诊断。

α-突触核蛋白聚集检测试剂盒

参考文献

　Nonaka T. et al. J Biol Chem. 2010 Nov 5;285(45):34885-98.