溶酶体积聚检测试剂盒

 

 

◆原理

 

　　Lyso-ID ^® Red cytotoxicity kit 阳离子两亲性示踪剂（CAT）的染料，其以类似诱导磷脂药物的方式迅速分到细胞中。通过在探头（染料）上放置可滴定基团，形成此示踪。使标记物扩展到用弱碱性细胞穿透物化合物预处理的细胞层状包涵体，如抗疟药氯喹。此外，溶酶体本身探头可用于突出溶酶体样细胞器，前提是其中的细胞产生包含大多数降解酶的溶酶体，非酸性母体细胞器的空泡可以监测溶酶体降解功能的失常，使用药物类的阳离子示踪染料选择性地快速染色酸性细胞器，可用于监控活细胞内溶酶体的积聚和溶酶体样结构。可用于体外毒理学和临床前药物安全评估。

 

◆优点・特色

 

　　●　包括迅速区分细胞和标记酸性细胞器的独特药物类染料的分析。

　　●　市面上唯一可用于长期监测细胞毒性作用的商业化产品。

　　●　高通量快速检测：染料仅需10-15分钟孵育。

　　●　无需与人工磷脂类似物共同培育进行检测，消除了混杂染料所造成伪像的可能性。

　　●　监控溶酶体积累长期药物治疗的反应。

　　●　定量分析，包括药物诱导，3个小时即可完成

◆试剂盒组成

  10x双色检测试剂： 2 x 1 ml
  检测缓冲液： 20 ml

  Verapamil 对照：3 μmoles
  10x 分析缓冲液：15 ml

 

◆案例・应用

1、消除混杂染料所造成伪像

在短短15分钟，LYSO-ID® 红染料培养消除了混杂染料所造成伪像的可能性。在24小时内U-2 OS细胞的荧光强度对应不同浓度氯喹。在药物治疗期间，把用LipidTox染料（绿线）染色的细胞放在荧光脂质中培育24小时。在药物培育后，用LYSO-ID® Red dye（red line）或Hoechst公司产品33342（蓝线）染色细胞15分钟。

2、激发和发射光谱

A是LYSO-ID® Red Detection Reagent；B是Hoechst 33342细胞核染色。

3、溶酶体扰动活性治疗学的高通量筛选

使用传统的荧光酶标仪去估测在U-2 OS细胞里维拉帕米的毒性。用维拉帕米处理U-2 OS的细胞18小时后，用LYSO-ID® Red dye染色15分钟。高Z因子（0.87为100μM的维拉帕米）显示LYSO-ID® Red dye适合HTS的应用。Hoechst可用作复染剂，归一化控制细胞数目。

 4、细胞的复合亮场和荧光显微镜图像

U2-OS细胞（左），用64μM氯喹预先处理5小时的细胞（右）。用LYSO-ID® Red dye来染色细胞10分钟。用Hoechst 33342 染料进行细胞核复染。

5、使用LYSO-ID^® Red dye来估测U-2 OS细胞药物诱导的溶酶体的累积

这两种化合物是阳离子和两亲性，并且可观察到诱导溶酶体内磷脂异常累积，导致板层体的形成。由图中增加的红色荧光可知，U-2 OS细胞对磷脂诱导药物的处理，导致溶酶体数目和体积的增加。细胞核的复染用Hoechst 33342染料（蓝色）。

（A）未处理的细胞 （B）氯丙嗪，28µM （C）维拉帕米，200µM

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产品编号	产品名称	包装
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ENZ-51005-0100	Lyso-ID ® Red detection kit (GFP-Certified ®) for microscopy	100    tests