Wako亲和标签（汇总）

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参考文献

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重组蛋白质提纯/检测用试剂

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●　TARGET标签

●　PA标签

●　亲和标签系统

●　DYKDDDDK标签

●　6×His标签

●　GFP标签

●　HA标签

●　MBP标签

●　c-Myc标签

●　GST标签

●　V5标签

●　亲和标签抗体磁珠结合

●　亲和标签抗体琼脂糖珠结合

●　亲和标签肽

●　对照融合蛋白系列

●　亲和标签对比表

●　相关产品

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◆TARGET 标签系统标签序列【(YPGQ)5V】

●　通过树脂再生，降低运作成本

●　温和洗脱、清洗，实现高纯度

●　在动物细胞表达系（HEK293T细胞、CHO细胞等）中有效纯化蛋白质

　　TARGER 标签系统使用的是可识别肽标签（21氨基酸残基）的单抗（P20.1），是日本开发的亲和纯化标签系统。

　　TARGET 标签系统实践证明，即使在传统系统都难以进行高纯度蛋白质纯化的动物细胞表达系中，也可有效的进行亲和纯化。

TARGET标签系统

　　A rapid screening method for cell lines producing singly-tagged recombinant proteins using the“ TARGET tag” system. Tabata S. et al., J. Proteomics, 2010 Aug 5;73(9):1777-85.

TARGET 标签表达载体案例

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产品选择

载体	表达模式	宿主细胞	MCS启动子
pEBMulti	游离型稳定表达	灵长类（人、猴）、狗细胞等粘着系细胞	CAG
pCAG	瞬时表达	灵长类（人、猴）、狗细胞等粘着系细胞、大/小鼠等动物细胞	CAG

　　测序用引物序列、其他载体序列的相关详细信息，已附在产品现货说明书中。

　　另外可点击和光主页/TARGET标签，查看序列信息、Multi Cloning Site(MCS)信息。

TARGET标签融合蛋白质的免疫沉淀

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通过Transient 载体，表达TARGET标签融合重组蛋白

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培养上清（培养第7天）

每10mL中，分别添加0.1mL（net 0.05mL）的抗体珠（①抗TARGET标签抗体珠、②抗DYKDDDDK标签抗体珠，其他公司产品），4℃条件下，进行2小时免疫沉淀。

清洗后，在回收的各珠中分别添加0.5mL 0.2 mg/mL TARGET标签肽/TBS和0.2mg/mL DYKDDDDK肽/TBS，4℃条件下，平稳震动0.5小时。离心后回收上清。

再分别在各珠中添加0.5mL 0.1M Glycine-HCl (pH2.7)，室温下，平稳震动5分钟。离心后，回收上清并用1M Tris-HCl (pH9.0)做中和处理

上图为SDS-PAGE处理后的银染色结果。

与传统DYKDDDDK tag相比，背景更低

→高纯度!

　M：M.W. Marker

　　1.仅转染载体的培养上清

　　2.转染了蛋白Y-TARGET 标签表达质粒的细胞培养上清

　　3.转染了TARGET标签-蛋白Y 表达质粒的细胞培养上清

　　也可使用市售的Transient载体

通过Episomal 载体确认TARGET tag C末端融合重组蛋白的表达

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利用可编码表达人源生理活性蛋白基因的质粒转染HEK293N细胞后，从初期细胞数3×10^5cells/mL开始培养，回收0/3/7日的培养上清。

用20μL/lane的培养上清进行SDS-PAGE处理，通过银染色和Western blotting，检测出表达蛋白。

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可确认到与市面售卖的Tag系统有相同的表达量和检测灵敏度。

TARGET 标签系列

产品名称	子类克隆号		适用实验	规格	产品编号	包装
单抗
抗TARGET标签, 单抗 Anti TARGET tag, Monoclonal Antibody		小鼠IgG1 P20.1	IP, WB	免疫化学用	016-25481	200μg
					012-25483	1mg
HRP标签单抗
抗TARGET tag, 单抗, 过氧化酶结合 Anti TARGET tag, Monoclonal Antibody (P20.1)Peroxidase conjugated		小鼠IgG1 P20.1	WB	免疫化学用	015-25571	200μL
					011-25573	1mL

产品名称	子类克隆号			规格		产品编号		包装
抗体结合琼脂糖珠
抗TARGET标签抗体珠 Anti TARGET tag Antibody Deads		小鼠IgG1 P20.1	免疫化学用		018-25561		2mL (Net 1mL)
					014-25563		10mL (Net 5mL)
					012-25564		50mL (Net 25mL)
识别N末端、C末端的TARGET标签使用载体　：4%　琼脂糖溶液组成　：1 x TBS (pH7.5), 0.05 w/v%叠氮化钠抗体结合量：2.0mg/mL 结合容量　： 1mL本品可结合约0.1-1.0mg的TARGET标签融合蛋白

产品名称	备注	规格	产品编号	包装
肽
TARGET标签肽 TARGET tag Peptide	含量（HPLC）95%以上	基因研究用	200-19673	5mg
TARGET标签肽 TARGET tag Peptide	含量（HPLC）95%以上	基因研究用	208-19674	25mg
清洗液
TARGET标签清洗液 TARGET tag Washing Solution	已过滤消毒即用型	基因研究用	208-19831	50mL

产品名称	可选Marker		产品编号	包装
	大肠杆菌	动物细胞
瞬态载体
C端插入TARGET标签的pCAG-Ble 载体 pCAG-Ble TARGET tag-C	博莱霉素		165-26381	20μg
N端插入TARGET标签的pCAG-Ble 载体 pCAG-Ble TARGET tag-N	博莱霉素		162-26391	20μg
C端插入TARGET标签的pCAG-Bsd 载体 pCAG-Bsd TARGET tag-C	杀稻瘟素S		165-26401	20μg
N端插入TARGET标签的pCAG-Bsd 载体 pCAG-Bsd TARGET tag-N	杀稻瘟素S		162-26411	20μg
C端插入TARGET标签的pCAG-Hyg 载体 pCAG-Hyg TARGET tag-C	潮霉素B		169-26421	20μg
N端插入TARGET标签的pCAG-Hyg 载体 pCAG-Hyg TARGET tag-N	潮霉素B		166-26431	20μg
C端插入TARGET标签的pCAG-Neo 载体 pCAG-Neo TARGET tag-C	卡那霉素	G418	163-26441	20μg
N端插入TARGET标签的pCAG-Neo 载体 pCAG-Neo TARGET tag-N	卡那霉素	G418	160-26451	20μg
游离载体
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体 pEBMulti-Ble TARGET tag-C	博来霉素		167-26461	20μg
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体 pEBMulti-Ble TARGET tag-N	博来霉素		164-26471	20μg
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Bsd载体 pEBMulti-Bsd TARGET tag-C	杀稻瘟素S		161-26481	20μg
N段插入TARGET标签的pEBMultI-Bsd载体 pEBMulti-Bsd TARGET tag-N	杀稻瘟素S		168-26491	20μg
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体 pEBMulti-Hyg TARGET tag-C	潮霉素B		161-26501	20μg
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体 pEBMulti-Hyg TARGET tag-N	潮霉素B		168-26511	20μg
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体 pEBMulti-Neo TARGET tag-C	卡那霉素	G418	165-26521	20μg
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体 pEBMulti-Neo TARGET tag-N	卡那霉素	G418	162-26531	20μg
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体 pEBMulti-Puro TARGET tag-C	氨苄青霉素	嘌呤霉素	169-26541	20μg
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体 pEBMulti-Puro TARGET tag-N	氨苄青霉素	嘌呤霉素	166-26551	20μg

◆PA标签系统标签序列【GVAMPGAEDDVV】

●　通过树脂再生，降低运行成本

●　超高亲和性抗体，实现高回收率、高纯度纯化

●　在动物细胞表达系（HEK293T细胞、CHO细胞等）中，有效纯化蛋白质

●　PA标签系统是使用可识别肽标签（12氨基酸残基）的单抗（NZ-1）。日本开发的亲和性纯化标签系统。

●　NZ-1单抗对PA tag具有高亲和性和特异性，可应用于Western Blotting、细胞流式仪、免疫组化（ ICC）。通过免疫沉淀，可纯化PA标签融合蛋白以及树脂再生。

●　PA标签系统，可一步纯化高纯度PA标签融合蛋白。

PA标签系统

　　Fujii, Y. et al., "PA tag: A versatile protein tagging system using a super high affi nity antibody against a dodecapeptide derived from human podoplanin.", Protein Exp. Purif., 95, 240-247(2014).

Fujii, Y. et al.
　　新型亲和标签系统“PA tag”的应用方法~蛋白质的纯化及检测~

　　蛋白质科学学会档案, 7, e075 (2014)

PA标签表达载体案例

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载体	表达模式	宿主细胞	MCS启动子
pCAG	瞬时表达	灵长类（人、猴）、犬细胞等粘着细胞和啮齿动物细胞	CAG

　　测序用引物序列、其他载体序列的相关详细信息，已附在产品现货说明书中。

用PA标签从培养上清中亲和提纯的案例

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数据提供：大阪大学蛋白质研究所附属蛋白质分析先进研究中心

分子创制学研究室高木淳一老师，藤井勇树老师

Protocol　目的蛋白的纯化

１．哺乳类动物细胞转染(HEK293T)
　　转染处于40-60%融合状态的细胞
　　培养基：D-MEM, 5%FBS

２．回收培养上清和吸附蛋白树脂
　　转染48-72小时后，回收约420mL培养上清，加入8mL抗PA标签抗体珠，混合2小时（2-10℃）

３．树脂回收
　　用50mL的纯化柱。回收步骤2)中的珠

４．树脂洗涤
　　加入珠4倍量的TBS 缓冲液（20mM Tris-HCl, 150mM NaCl），清洗5次

５．PA标签肽从树脂中竞争性洗脱
　　加入经1×TBS溶液, pH7.5溶解过的PA 标签肽（最终浓度0.1mg/mL），体积量需为珠的一倍，

　　然后分10次回收PA标签融合蛋白X

６．SDS-PAGE
　　样品量
　　c. sup：5μL, flow through：5μL, wash：5μL,
　　肽洗脱（1-10）：各10μL

　　可纯化PA标签融合蛋白X且不依赖PA标签。→可实现极高纯度的亲和纯化。

通过PA tag降低背景的方法

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可在含有高浓度NaCl的TBS溶液中，通过前清洗去除杂质蛋白质！！

M: Marker
I: input 100ng分
P: 纯化前样品
1: wash片段①
2: wash片段②
3: wash片段③
4: wash片段④
5: wash片段⑤
6: wash片段⑥
7: wash片段⑦
8: wash片段⑧
9: wash片段⑨
10: 酸洗脱①
11: 酸洗脱②
12: 酸洗脱③
13: 酸洗脱④
14: 酸洗脱⑤

　　在20mL的昆虫细胞溶解液中加入蛋白Z，使其浓度变为1.0mg/L后，添加200μL抗PA标签抗体珠，4℃温度条件下，搅拌3小时。

　　分别用不同浓度的TBS溶液（0.15M、0.5M、1.0M NaCl）进行调整，用珠50倍量清洗。在回收的各珠中加入0.5mL 0.1M Glycine-HCl(pH2.7)，室温条件下平稳震动5min。

　　离心后回收上清，用1M Tris-HCl (pH9.0)做中和处理。

　　SDS-PAGE后进行银染色，去除污染蛋白之后，比较不同浓度的结果。

使用案例：Western Blotting

Wako亲和标签（汇总）
数据提供：东北大学研究生院医学系研究科

地域革新领域加藤幸成老师，金子美华老师

NZ-1显示出与天然抗体具有相同的高检测灵敏度。

Lane 1

一抗：抗IDH1抗体（RcMab-1）, 1μg/mL

二抗：抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释

Lane 2

一抗：抗PA tag抗体, 1μg/mL

二抗：抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释

Lane 3

一抗：抗DYKDDDDK标签抗体, 3.5μg/mL

二次抗体：抗マウスIgG-HRP标签, 1000倍稀释

样品量：各10μg
曝光时间：10分钟

PA标签系列

产品名称	子类克隆号	适用实验	规格	产品编号	包装
单抗
抗PA标签, 大鼠单抗 Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody	大鼠IgG2a NZ-1	IP, WB, FCM, ICC	免疫化学用	016-25861	200μL
				012-25863	1mL
HRP标签单抗
抗PA标签, 大鼠单抗,过氧化酶结合 Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated	大鼠IgG2a NZ-1	WB	免疫化学用	015-25951	200μL
				011-25953	1mL

产品名称	子类克隆号	规格	产品编号	包装
抗体结合琼脂糖珠
抗PA标签抗体珠 Anti PA tag Antibody Beads	大鼠IgG2a NZ-1	免疫化学用	012-25841	2mL(Net 1mL)
			018-25843	10mL(Net 5mL)
			016-25844	50mL(Net 25mL)
识别N末端、C末端的PA标签使用载体　：4%　琼脂糖溶液组成　：1 x PBS (pH7.2), 0.05 w/v%叠氮化钠抗体结合量：参见标签记载结合容量　：1mL本品可结合约0.015-1.0mg的PA标签融合蛋白质
抗体结合磁珠
MagCaptureTM HP 抗PA标签抗体磁珠 MagCapture™ HP Anti PA tag Antibody Magnetic Beads	大鼠IgG2a NZ-1	免疫化学用	137-18751	2mL
溶液组成：1×TBS(pH 7.4), 50% glycerol, 0.05w/v% sodium azide

产品名称	备注	规格	产品编号	包装
肽
PA标签肽 PA tag Peptide	含量（HPLC）95%以上	基因研究用	167-25501	5mg
PA标签肽 PA tag Peptide	含量（HPLC）95%以上	基因研究用	163-25503	25mg
清洗溶液
PA标签清洗溶液 PA tag Washing Solution	已过滤消毒即用型	基因研究用	169-27261	50mL

产品名称	可选Marker		产品编号	包装
产品名称	大肠杆菌	动物细胞	产品编号	包装
瞬时载体
pCAG-Ble PA 标签-C pCAG-Ble PA tag-C	Bleomycin		161-26861	20μg
pCAG-Ble PA 标签-N 信号增加型 pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus	Bleomycin		168-26871	20μg
pCAG-Bsd PA 标签-C pCAG-Bsd PA tag-C	Blasticidin S		165-26881	20μg
pCAG-Bsd PA 标签-N 信号增加型 pCAG-Bsd PA tag-N Signal Plus	Blasticidin S		162-26891	20μg
pCAG-Neo PA 标签-C pCAG-Hyg PA tag-C	Hygromycin B		165-26901	20μg
pCAG-Hyg PA 标签-N 信号增加型 pCAG-Hyg PA tag-N Signal Plus	Hygromycin B		162-26911	20μg
pCAG-Neo PA 标签-C pCAG-Neo PA tag-C	Kanamycin	G418	169-26921	20μg
pCAG-Neo PA 标签-N 信号增加型 pCAG-Neo PA tag-N Signal Plus	Kanamycin	G418	166-26931	20μg

◆亲和标签抗体系列

　　和光为您准备了DYKDDDDK, 6×His, GFP, HA, MBP, c-Myc, GST,V5融合蛋白质提纯、检测用抗体及珠。
　　另外，和光还准备了上述各样品的试用装，您可向当地代理商索取。

　　DYK标签：DYKDDDDK

　　DYK标签是识别DYKDDDDK肽的单抗。可用于检测大肠杆菌、酵母、哺乳动物中的DYKDDDDK标签融合蛋白质。

Wako亲和标签（汇总）
数据提供：　
鹿儿岛大学研究生院医疗牙科综合研究科附属顽固病毒病理控制研究中心分子病毒感染研究领域草野秀一老师

将表达3×DYKDDDDK标签融合蛋白质A的质粒转染至HEK293细胞株中，经过24小时培养后，随机选取其中的克隆细胞。将选取的克隆细胞用RIPA缓冲液进行溶解，对所得的细胞溶解液用Western Blot法检测，可检测出3×FLAG标签融合蛋白质。

分别用Wako（克隆号 1E6）（产品编号：018-22381）抗体和A公司抗体进行Western Blot检测。

与A公司抗体相比，Wako（克隆号 1E6）抗体识别DYKDDDDK的特异性更高。

A公司产品和Wako产品在Western Blot检测中的灵敏度比较

Wako亲和标签（汇总）

Lane 1: 293T细胞溶解液
Lane 2: 瞬时表达蛋白质A-DYKDDDDK的293T细胞溶解液
Lane 3: 瞬时表达蛋白质B-DYKDDDDK的293T細胞溶解液
封闭：含5%脱脂奶的TBS-T、4℃，一晚

抗体反应：2小时、室温
发光剂：ImmunoStar® LD
检测：LAS-3000、曝光时间15分

Wako 1E6-HRP比A公司产品有更高的灵敏度!!

产品名称	子类克隆号	适用实验	规格	产品编号	包装
单抗
抗DYKDDDDK标签, 单抗 Anti DYKDDDDK tag, Monoclonal Antibody	小鼠IgG2b 1E6	WB,IP,FCM,ChIP	免疫化学用	018-22381	200μg
				014-22383	1mg
				012-22384	5mg
抗DYKDDDDK标签, 单抗 Anti DYKDDDDK tag,Monoclonal Antibody,Rat	大鼠IgG1 6F7	WB,IP,ELISA,IHC,FCM	免疫化学用	018-23621	200μg
				012-23624	1mg
HRP标签单抗
抗DYKDDDDK标签, 单抗, 过氧化酶结合 Anti DYKDDDDK tag, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated	小鼠IgG2b 1E6	WB	免疫化学用	015-22391	200μL
				019-22394	1mL

6×His标签：HHHHHH (6×组氨酸)

　　可用于检测His(6×组氨酸)标签融合蛋白质。克隆不同，识别末端的特异性、应用也有所不同。

Wako亲和标签（汇总）

克隆号	识别末端	Western blot		Immunoprecipitation		ELISA	产品编号
克隆号	识别末端	N末端	C末端	N末端	C末端	ELISA	产品编号
9F2	C末端	ND	+++++	ND	++	–	010-21861
9C11	N・C末端	+++++	++++	+++++	++	○	011-23091
21-48	N・C末端	+++	++++	+++	+++	○	017-23211
28-75	N・C末端	++	++	+++++	+++++	○	014-23221
9F2	C末端	ND	+++++	–	–	–	013-23171
9C11	N・C末端	+++++	++++	–	–	◎	010-23181

B公司产品和Wako产品各克隆号的Western blot检测功能比较

Wako亲和标签（汇总）

N末端His：HEK293T表达的6xHis-ProteinZ, 1×105 cells
C末端His：Protein P-6xHis＋CHO细胞溶解液, 1×105 cells
一抗： 1μg/mL
二抗：抗小鼠IgG抗体, 5000倍稀释液
可确认其具有比B公司产品同等甚至更高的灵敏度。

6×His tag抗体　选购指南

N末端的检测中，最强的克隆号是什么？
WB：9C11　IP： 9C11, 28-75
C末端的检测中，最强的克隆号是什么
WB：9F2　IP：28-75
最适用于WB检测中，识别N/C末端的克隆号是什么？
9C11
最适用于IP检测中，识别N/C末端的克隆号是什么？
28-75

可灵活应用于WB/IP的万能型克隆号是哪个？
21-48
最适用于WB检测的克隆号是哪个？
9C11
最适用于IP检测的克隆号是哪个？
28-75
只识别C末端的性价比较高的克隆号是哪个？
9F2

产品名称	子类克隆号	适用实验	规格	产品编号	包装
单抗
抗6×组氨酸, 单抗 Anti 6×His,Monoclonal Antibody(9F2)	小鼠IgG1 9F2	WB,IP	免疫化学用	010-21861	200μg
				014-21864	1mg
				010-21866	5mg
抗6×组氨酸, 单抗 Anti 6×His,Monoclonal Antibody(9C11)	小鼠IgG1 9C11	WB,IP,ELISA	免疫化学用	011-23091	200μg
				015-23094	1mg
				011-23096	5mg
抗6×组氨酸, 单抗 Anti 6×His,Monoclonal Antibody(21-28)	小鼠IgG1・κ 21-48	WB,IP,ELISA	免疫化学用	017-23211	200μg
				011-23214	1mg
抗6×组氨酸, 单抗 Anti 6×His,Monoclonal Antibody(28-75)	小鼠IgG3・κ 28-75	WB,IP,ELISA	免疫化学用	014-23221	200μg
				018-23224	1mg
HRP标签单抗
抗6×组氨酸, 单抗, 过氧化酶结合 Anti 6×Histidine, Monoclonal Antibody(9F2), Peroxidase Conjugated	小鼠IgG1 9F2	WB	免疫化学用	013-23171	100μL
				017-23174	500μL
抗6×组氨酸, 单抗, 过氧化酶结合 Anti 6×Histidine, Monoclonal Antibody(9C11), Peroxidase Conjugated	小鼠IgG1 9C11	WB	免疫化学用	010-23181	100μL
				014-23184	500μL

GFP tag： Green Fluorescent Protein (GFP)

　　可识别Green Fluorescent Protein (GFP)抗体。GFP是可实时检测目标蛋白质局部或细胞、细胞器中的标签蛋白质，可应用于各个领域。

产品名称	子类克隆号	适用实验	规格	产品编号	包装
单抗及多抗
抗绿色荧光蛋白质, 单抗 Anti Green Fluorescent Protein, Monoclonal Antibody (Anti GFP, MoAb)	小鼠IgG2a・κ mFX73	IP, IHC	免疫化学用	012-20461	100μL
	小鼠IgG2a・κ mFX73	IP, IHC	免疫化学用	018-20463	100μL×5
抗绿色荧光蛋白质, 单抗 Anti GFP,MoAb(mF×75)	小鼠IgG2a・κ mFX75	WB	免疫化学用	012-22541	100μL
抗绿色荧光蛋白质, 多抗 IS,兔 Anti Green Fluorescent Protein,Rabbit Polyclonal IS	–	WB, IHC	免疫化学用	013-23811	20μg

HA tag：YPYDVPDYA

　　血凝素（HA）来源(98-106 aa)的多肽：抗YPYDVPDYA单抗。

产品名称	子类克隆号	适用实验	规格	产品编号	容量
单抗
抗血凝素, 单抗 Anti HA,MoAb	小鼠IgG2b 4B2	WB, IP	免疫化学用	014-21881	200μg
				018-21884	1mg
				014-21886	5mg
HRP标签单抗
抗血凝素, 单抗, 过氧化酶结合 Anti Hemagglutinin,Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated	小鼠IgG2b 4B2	WB	免疫化学用	011-21911	100μL
				015-21914	500μL

参考数据

抗绿色荧光蛋白质, 单抗（012-22541）
抗体浓度：1μg/mL
抗原量：将100μL表达GFP重组蛋白质的大肠杆菌溶解液进行10倍稀释，并取10μL进行电泳操作
用10000倍稀释的抗小鼠IgG-HRP抗体进行检测。

抗血凝素，单抗（014-21881）
抗体浓度：0.5μg/mL
抗原量：对5ng HA标签重组蛋白质进行电泳操作
用10000倍稀释的抗小鼠IgG-HRP抗体进行检测。

Wako亲和标签（汇总）

MBP tag：Maltose Binding Protein

　　可识别Maltose-binding Protein (MBP)单抗。MBP是对麦芽糖、麦芽糊精具有结合性的蛋白质，具有通过与目的蛋白融合，提高表达蛋白质可溶性的特点，可简便纯化、检测重组蛋白质。

产品名称	子类克隆号	适用实验	规格	产品编号	包装
单抗
抗麦芽糖结合蛋白, 单抗 Anti MBP, Monoclonal Antibody, Rat	大鼠IgG2b TMab-2	ELISA, WB	免疫化学用	016-24141	200μg

c-Myc标签：EQKLISEEDL

　　可识别人c-Myc 来源(410-419aa)多肽EQKLISEEDL单抗。

产品名称	子类克隆号	适用实验	规格	产品编号	包装
单抗
抗c-Myc, 单抗 ANTI c-Myc, Monoclonal Antibody	小鼠IgG1 9E10	WB, IP	免疫化学用	017-21871	200μg
				011-21874	1mg
				017-21876	5mg
抗c-Myc, 单抗 Anti c-Myc, Monoclonal Antibody (10D11)	小鼠IgG1 10D11	WB, IP	免疫化学用	017-26511	20μg
				013-26513	200μg
				011-26514	1mg
HRP标签单抗
抗c-Myc, 单抗, 过氧化酶结合 Anti c-Myc,MoAb, Peroxidase Conjugated	小鼠IgG1 9E10	WB	免疫化学用	014-21901	100μL
				018-21904	500μL
抗c-Myc, 单抗, 过氧化酶结合 Anti c-Myc, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated (10D11)	小鼠IgG1 10D11	WB	免疫化学用	014-26521	10μL
				010-26523	100μL
				018-26524	500μL

GST标签：Glutathione-S-transferase

　　可识别Glutathione S-transferase（GST）单抗。

产品名称	子类克隆号	适用实验	规格	产品编号	包装
单抗
抗谷胱甘肽 S-转移酶, 单抗 Anti Glutathione S-transferase,Monoclonal Antibody	小鼠IgG2b 5A7	WB, IP	免疫化学用	013-21851	200μg
				017-21854	1mg
				013-21856	5mg
HRP标签单抗
抗谷胱甘肽 S-转移酶, 单抗, 过氧化酶结合 Anti Glutathione S-transferse,Monoclonal Antibody, HRP Conjugated	小鼠IgG2b 5A7	WB	免疫化学用	011-21891	100μL
				015-21894	500μL

参考数据

抗c-Myc, 单抗（017-21871）
抗体浓度：0.25μg/mL
抗原量：对10ng c-Myc标签重组蛋白质进行电泳操作。
用10000倍稀释的抗小鼠IgG-HRP抗体进行检测。

抗谷胱甘肽 S-转移酶, 单抗（013-21851）
抗体浓度：1.0μg/mL
抗原量：将100μL表达GTS标签重组蛋白质的大肠杆菌溶解液进行10倍稀释，并取10μL进行电泳操作。
用10000倍稀释的抗小鼠IgG-HRP抗体进行检测。

Wako亲和标签（汇总）

V5 tag：GKPIPNPLLGLDST

　　可识别多肽GKPIPNPLLGLDST单抗｡

产品名称	子类克隆号	适用实验	规格	产品编号	包装
单抗
抗V5 tag, 单抗 Anti V5 tag, Monoclonal Antibody(6F5)	小鼠IgG2a 6F5	WB, IP	免疫化学用	011-23591	200μg
				015-23594	1mg
				011-23596	5mg
HRP标签单抗
抗V5tag, 单抗, 过氧化酶结合 Anti V5 tag, Monoclonal Antibody(6F5), Peroxidase Conjugated	小鼠IgG2a 6F5	WB	免疫化学用	019-24371	100μL

◆亲和标签抗体结合磁珠

抗DYKDDDDK tag抗体磁珠

　　已固定识别DYKDDDDK肽单抗的磁珠悬浮液。可用于检测大肠杆菌、酵母、哺乳动物表达的DYKDDDDK标签融合蛋白质。

特点

●　非特异性结合少

●　可回收N末端、C末端、Internal全部蛋白质

●　可用DYKDDDDK肽、SDS溶液洗脱

●　无需离心处理，可减少样品损耗，简单替换溶液

1. 抗DYKDDDDK标签抗体磁珠的反应性

Wako亲和标签（汇总）

可在不依赖标签位置的情况下，回收重组蛋白质。

把各DYKDDDDK tag融合蛋白分别加入细胞溶解液中进行免疫沉淀后，通过Western blotting比较抗原回收量。

经4%SDS样品缓冲液洗脱和SDS-PAGE后，用Western blotting法，加过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。

M 　: 标签蛋白
Met : N-terminal Met-DYKDDDDK-BAP
N 　: N-terminal DYKDDDDK-BAP
C 　: C-terminal DYKDDDDK-BAP

2. 洗脱法比较抗原回收性能

Wako亲和标签（汇总）

SDS和DYKDDDDK肽均能洗脱抗原

将DYKDDDDK标签融合蛋白质加入细胞溶解液中，分别加入磁珠吸附后，利用各种洗脱法回收抗原量并用Western Blotting法进行比较。

用过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。

M　　 : Marker蛋白质
Lane1 : 添加2×SDS sample buff er后，煮沸
Lane2 : DYKDDDDK peptide(200μg/mL)
Lane3 : 4% SDS solution

3. 非特异性吸附蛋白的比较

Wako亲和标签（汇总）

在不含DYKDDDDK tag的细胞溶解液中分别添加磁珠并进行免疫沉淀后，比较非特异性吸附蛋白质。

用4%SDS样品缓冲液洗脱、电泳后，用银染色、抗小鼠IgG、过氧化酶标签抗体进行Western Blotting比较。

无法检测出非特异性吸附质。

产品名称	子类克隆号	规格	产品编号	包装
DYK标签：DYKDDDK
抗DYKDDDDKtag抗体磁珠 Anti DYKDDDDK tag Magnetic Beads	小鼠 IgG2b 1E6	免疫化学用	011-25154	200μL
			017-25151	2.5mL
			013-25153	2.5mL×5
溶液组成：10mg/mL Anti-DYKDDDDK Magnetic Beads, 1×TBS(pH7.4), 50 w/v % glycerol, 0.05 w/v % sodium azide

◆亲和性标签抗体结合琼脂糖珠

Wako亲和标签（汇总）

可确认比A公司产品具有同等甚至以上的抗原回收性能！！

＜使用载体量＞
抗DYKDDDDK标签抗体珠(Wako): 20μL / assay
A社 Affinity Beads: 20μL /assay
＜抗原添加量＞
含DYKDDDDK标签融合蛋白质的大肠杆菌细胞溶解液20mg/assay
＜免疫沉淀条件＞
4℃、3 小时
＜洗脱方法＞
150μg/mL DYKDDDDK肽 (产品编号：044-30951) 20μL /assay
→ 4℃、孵化30 分钟
添加20μL / assay 的2%SDS sample buffer → 煮沸5分钟。

＜SDS-PAGE＞
样品电泳量：10μL
＜检测方法＞
银染色法
配制可过量表达DYKDDDDK标签融合蛋白质（约19kDa）的大肠杆菌裂解液，分别用本产品和A公司产品免疫沉淀后，用DYKDDDDK肽进行抗原洗脱。将得到的抗原样品用SDS-PAGE分离、银染色后，比较抗原回收率。

产品名称	子类克隆号	规格	产品编号	包装
DYK标签：DYKDDDK
抗DYKDDDDK标签抗体珠 Anti DYKDDDDK tag Antibody Beads	小鼠IgG2b 1E6	免疫化学用	012-22781	2mL(Net 1mL)
			018-22783	10mL(Net 5mL)
			016-22784	50mL(Net 25mL)
识别N末端、C末端、Internal的DYKDDDDK标签使用载体　：4%琼脂糖溶液组成　：1 x PBS (pH7.4), 50w/v% glycerol, 0.02 w/v% sodium azide 抗体结合量：7.5mg/mL 结合容量　：1mL本产品可结合约1.0mg的DYKDDDDK标签融合蛋白质。
His标签：HHHHHH（6×Histidine）
抗6×组氨酸抗体珠 Anti 6×Histidine Antibody Beads	小鼠IgG3・κ 28-75	免疫化学用	019-23391	2mL(Net 1mL)
			015-23393	10mL(Net 5mL)
可识别N末端、C末端的6×His tag 使用载体　：4%　琼脂糖溶液组成　：1×TBS (pH 7.4), 0.05w/v％ sodium azide 抗体结合量：2.0mg/mL 结合容量　：1mL本产品可结合约1.0～2.0mg的6×His标签融合蛋白质
HA tag：YPYDVPDYA
抗HA抗体珠 Anti HA Antibody Beads	小鼠IgG1 4B2	免疫化学用	014-23081	2mL(Net 1mL)
			010-23083	10mL(Net 5mL)
使用载体　：4%　琼脂糖溶液组成　：1×PBS (pH 7.4), 50％ glycerol, 0.02w/v％ sodium azide 抗体结合量：8.5mg/mL 结合容量　：1mL本品可结合约1.5 mg的HA标签融合蛋白质
c-My标签：EQKLISEEDL
抗c-Myc抗体珠 Anti c-Myc Antibody Beads (10D11)	小鼠IgG1 10D11	免疫化学用	010-26501	200μL(Net 100μL)
			016-26503	2mL(Net 1mL)
			014-26504	10mL(Net 5mL)
使用担体　：4%　琼脂糖溶液组成　：1×PBS (pH 7.4), 50％ glycerol, 0.02w/v％ sodium azide 抗体结合量：7.5mg/mL 结合容量　：1mL本产品可结合约0.9 mg的c-Myc tag融合蛋白质
V5 tag：GKPIPNPLLGLDST
抗V5 tag抗体珠 Anti V5 tag Antibody Beads	小鼠IgG1 10B5	免疫化学用	016-24381	2mL(Net 1mL)
			012-24383	10mL(Net 5mL)
使用载体　：4%　琼脂糖溶液组成　：1×PBS (pH 7.4), 50％ glycerol, 0.02w/v％ sodium azide 抗体结合量：7mg/mL 结合容量　：1mL本产品可结合约0.5 mg的V5标签融合蛋白质

◆亲和性标签肽

本产品是可用于竞争洗脱各种标签抗体珠回收到的重组蛋白质的肽。

产品名称	备注	规格	产品编号	包装
DYKDDDDK标签肽
DYKDDDDK肽 DYKDDDDK Peptide	含量（HPLC）95%以上	基因研究用	044-30951	5mg
			040-30953	25mg
His标签：HHHHHH（6×Histidine）
6×组氨酸肽 6×Histidine Peptide	含量（HPLC）95%以上	基因研究用	087-09251	5mg
			083-09253	25mg
HA标签：YPYDVPDYA
HA 肽 HA Peptide	含量（HPLC）95%以上	基因研究用	088-09161	5mg
			084-09163	25mg
c-Myc标签：EQKLISEEDL
c-Myc肽 c-Myc Peptide	含量（HPLC）95%以上	基因研究用	132-16361	5mg
			138-16363	25mg

◆对照融合蛋白质系列

Multitope蛋白质

本品是由4种标签肽、3种标签蛋白质连接成的重组蛋白质。

因其为变性状态，可直接用于SDS-PAGE，在Western Blotting中可用作阳性对照。

Wako亲和标签（汇总）

通过各种一抗检测Multitope（Western Blotting检测法）

Wako亲和标签（汇总）

Lane 1: MultiTope, 变性20ng
Lane 2: MultiTope, 变性50ng

＜一抗＞
His： 6×His MoAb Albumine free, 5000倍稀释
GFP： Anti GFP(Wako, 012-22541), 1000倍稀释
HA： Anti HA(Wako, 014-21881), 500倍稀释
DYK： Anti DYKDDDDK(Wako, 018-22381), 5000倍稀释
GST： Anti GST(Wako, 013-21851), 500倍稀释
c-Myc： Anti c-Myc(Wako, 017-21871), 1000倍稀释
C末端-His：Anti C-terminal 6×His(Wako, 010-21861), 400倍稀释

产品名称	备注	规格	产品编号	包装
Multitope蛋白质
Multitope (变性), 重组体, 溶液 Multitope, Denatured, recombinant, Solution	浓度：10ng/μL	免疫化学用	139-16371	500μL
			133-16374	2.5mL
组成　：50mmol/L Tris-HCl, pH6.8, 2w/v% SDS, 10v/v% glycerol, 0.1w/v% bromophenol blue, 1.5w/v% DTT. 使用方法　：Load 5-10μL of Multitope onto SDS-PAGE 使用注意：本品保存温度为-20℃。保存过程中，缓冲液成分可能会析出，所以使用前请在室温条件下充分混合溶液直至析出成分完全溶解，方可使用。

◆DYKDDDDK-BAP, 重组体, 溶液

　　本产品是可融合DYKDDDDK标签各个部位的Bacterial Alkaline Phosphatase(BAP)。

１．可用于识别抗DYKDDDDK标签抗体交叉性的

　　对照蛋白质。

２．可用于Western Blotting和免疫沉淀实验。

Wako亲和标签（汇总）

产品名称	备注	产品编号	包装
DYKDDDDK-BAP, 重组体, 溶液
N末端 DYKDDDDK-BAP,重组体, 溶液 Amino-terminal DYKDDDDK-BAP, recombinant, Solution	基因研究用	016-24401	200μg
N末端 Met-DYKDDDDK-BAP, 重组体, 溶液 Amino-terminal Met-DYKDDDDK-BAP, recombinant, Solution		013-24411	200μg
C末端 DYKDDDDK-BAP, 重组体, 溶液 Carboxy-terminal DYKDDDDK-BAP, recombinant, Solution		036-22781	200μg
来源：大肠杆菌表达DYKDDDDK-BAP 溶液组成： 10 mM Tris-HCl, pH8.0, 120 mM氯化钠, 0.05 mM氯化锌, 50 w/v %甘油蛋白质浓度： 0.35 mg/mL 含量： 90%以上(SDS-PAGE) 分子量：约48.8 kDa (N末端 DYKDDDDK-BAP) 约49.0 kDa (N末端 Met-DYKDDDDK-BAP) 约48.8 kDa (C末端 DYKDDDDK-BAP)

亲和标签比较表

亲和标签	TARGET	PA	6xHis
氨基酸序列	(YPGQ)5V	GVAMPGAEDDVV	HHHHHH
残基	21	12	6
分子量 (kDa)	2.34	1.16	0.84
等电点（pI）	5.52	3.49	7.21
配体	TARGET tag	PA tag	Ni, Co, Zn, Cu
亲和珠回收	40% Propyleneglycol, 1×TBS(pH7.5)	3M MgCl2, MES(pH6.0)	0.5M Imididazole(pH7.4)
单抗边界强度（KD（M））	1.0×10-8	4.9×10-10	Ni-NTA: 1.0×10-5～-6
单抗 Clone No.	P20.1(Mouse)	NZ-1(Rat)	Merck:HIS. H8(Mouse)
亲和力	++++	+++++	+++
提纯成本	+	+	+
多肽洗脱	+++	+++	Imidazole
背景（培养上清）	+	+	+++++
背景（细胞裂解物）	+	+	++++

亲和标签	DYKDDDDK	c-Myc	HA	GST
氨基酸序列	DYKDDDDK	EQKLISEEDL	YPYDVPDYA	–
残基	8	10	9	218
分子量 (kDa)	1.01	1.20	1.10	26
等电点（pI）	3.97	4.00	3.56	–
配体	DYKDDDDK tag	c-Myc tag	HA tag	GST
亲和珠回收	Tris-HCl, Glycine Buffer(pH2～3.5)	Tris-HCl, Glycine Buffer(pH2～3.5)	Tris-HCl, Glycine Buffer(pH2～3.5)	Glutathione, Tris-HCl, Glycine Buffer(pH2～3.5)
单抗边界强度（KD（M））	2.8×10-8	2.2×10-9	2.8×10-9	Glutathione: 1.0×10-5～-6
单抗 Clone No.	M2(Mouse)	9E10(Mouse)	3F10(Mouse) HA-7(Rat)	Wako:5A7(Mouse)
亲和力	++++	++++	++++	++++
提纯成本	++	++	++	+
多肽洗脱	+++	++	++	Glutathione
背景（培养上清）	++++	+++	+++	++++
背景（细胞裂解物）	++++	++++	+++	++++

本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同，特异性也会有所变化，因此无法保证各个亲和标签的功能。

◆相关产品

　　内参照

　　下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。

产品名称	规格	产品编号	包装
抗β肌动蛋白单抗 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody	免疫化学用	013-24553	200μg
		011-24554	1mg
		017-24556	5mg
抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated	免疫化学用	017-24573	200μL
抗α-微管蛋白, 单抗 Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody	免疫化学用	011-25034	10μg
		017-25031	200μg
		013-25033	1mg
Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody 抗β-微管蛋白, 单抗	免疫化学用	018-25044	10μg
		014-25041	200μg
		010-25043	1mg
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody 抗GAPDH, 单抗	免疫化学用	016-25523	200μg
		014-25524	1mg
		010-25526	5mg
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated 抗GAPDH, 单抗, 过氧化酶结合	免疫化学用	015-25473	200μL

蛋白酶抑制剂系列

产品名称	规格	产品编号	包装
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型） Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (x 100), Lyophilized	通用型	165-26021	1mL用
	通用型	161-26023	1mL用×5
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III, DMSO溶液（不含EDTA）（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution (EDTA free) (x 100)	动物细胞	163-26061	1mL
	动物细胞	169-26063	1mL×5
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V （无EDTA）（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized	2D电泳	162-26031	1mL
	2D电泳	168-26033	1mL×5
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)	植物细胞	164-26091	1mL
	植物细胞	160-26093	1mL×5
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution (for Histidine-tagged Protein) (× 100)	His Tag 纯化^※	167-26101	1mL
	His Tag 纯化^※	163-26103	1mL×5

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	产品价格

whatman (沃特曼)

英国沃特曼品牌中国官网代理

Wako亲和标签（汇总）