相关产品信息请点击此处

◆原理

　　在工业生产的疫苗和治疗用生物制品（干扰素、白细胞介素、单克隆抗体、重组蛋白）中，宿主细胞残余DNA 污染直接影响最终产品和整个生产过程的质量和产量，可能引起动物致瘤、感染病毒DNA 等严重后果， 中国药典、WHO、EU、FDA对宿主细胞DNA 残留限量都有规定。传统的DNA 提取方法蛋白酶K-SDS 法在SDS的稳定和促进下降解细胞中的蛋白质特别是核酶，再经有机溶剂萃取得到高质量的DNA，但有提取时间较长和使用有毒溶剂氯仿和苯酚等缺点。该产品是血清中病毒DNA 和生物制品宿主细胞残余DNA 的提取试剂盒。使用新型提取步骤，用碘化钠（NaI）作为促溶剂，稳定且灵敏度高、时间短，无有毒溶剂，无需复杂和费力操作，即可从样品中得到高质量和高回收率的DNA。

 

 

◆特点

●　可与Threshold 系统配合使用进行DNA 定量分析

●　高灵敏度，可提取低至10 pg 的DNA

●　单独的离心管无交叉污染，提取的DNA可用于下游实验

●　可获得高质量高回收率的DNA

注： 和光纯药公司引进并销售美国Molecular Devices公司（加利福尼亚州门洛帕克）开发的检测DNA用

注： 的生物传感器（Threshold Systems）。“Threshold”是检测微量的DNA分子系统。

 

试剂盒组成

试剂盒组成（50 次反应）：

1.　碘化钠溶液 1×26 mL

2.　月桂酰肌氨酸钠溶液 1×1.2 mL

3.　洗涤液（A） 1×42 mL

4.　洗涤液（B） 2×40 mL

5.　糖原溶液 1×0.1 mL

 

 

Wako DNA 提取试剂盒产品选择

样品	全血	血清	血浆	组织	石蜡包埋 组织切片	生物制药	培养细胞	头发、指甲 血迹、唾液
	•   DNA Extractor® WB Kit				•   DNA Isolator PS Kit
基因组 DNA	•   DNA Extractor® WB-Rapid   Kit			•   DNA Extractor® WB Kit	•   DNA Isolator PS-Rapid   Reagent		•   DNA Extractor® WB Kit	•   DNA Extractor® FM Kit
线粒体 DNA (mtDNA)	•   mtDNA Extractor® WB Kit			•   mtDNA Extractor® CT Kit			•   mtDNA Extractor® CT Kit
游离 DNA		•   DNA Extractor® SP Kit	•   DNA Extractor® SP Kit
低氧化程度的 DNA	•   DNA Extractor® WB Kit			•   DNA Extractor® TIS Kit			•   DNA Extractor® TIS Kit
细菌基因组 DNA		•   DNA Extractor® Kit				•   DNA Extractor® Kit

  

 

 ◆案例・应用

DNA Extractor^® Kit在生物制药中DNA残留检测的应用

DNA  Extractor^® Kit说明书       No.295-50201

 

说明书	DNA 提取试剂盒PDF

　　本产品是血清中含有的病毒DNA 和生物制品宿主细胞残余DNA 的提取试剂盒, 无有毒溶剂、提取时间短、DNA 提取纯度高、DNA 回收率高。

 

◆DNA 抽提原理

　　高浓度的促溶剂碘化钠和阴离子去垢剂参与生物制品中蛋白质和脂质的溶解，然后在混合物中加入异丙醇，糖原和核酸共沉淀可作为载体，而碘化钠和阴离子去垢剂阻止样品中蛋白等成分的沉淀使其溶于液相，从而选择性沉淀DNA。

 

◆试剂

1．　试剂盒组分： 1）　碘化钠溶液 1×26 mL 2）　月桂酰肌氨酸钠 1×1.2 mL 3）　洗涤溶液（A） 1×42 mL 4）　洗涤溶液（B） 2×40 mL 5）　糖原溶液 1×0.1 mL

2．必需的试剂和仪器： 试剂： 1）　异丙醇（特级） 40 mL 试剂： 2）　蒸馏去离子水 6 mL 仪器： 1）　微型离心机（Max. 12,000 g） 仪器：2）　有盖微量离心管（1.5 or 2 mL） 仪器：3）　旋涡混合器

 

 

◆保存

　　2 – 10℃，试剂盒的保存期为2 – 3 年。

 

◆DNA Extractor^® 系列产品列表

 

产品编号	产品名称	规格	样品类型	原理	特点	试剂盒组成
生物制品中的残余 DNA 提取
295-50201	DNA   Extractor® Kit Wako	50 次	生物制药血清	碘化钠法	生物制品中的残余 DNA 提取	碘化钠溶液 月桂酰肌氨酸钠溶液 洗涤液 (A) 洗涤液 (B) 糖原溶液	1×26 mL 1×1.2 mL 1×42 mL 2×40 mL 1×0.1 mL
血清和血浆中的 DNA 提取
296-60501	DNA Extractor®  SP Kit	50 次	血清和血浆	碘化钠法	1. 高灵敏度仅需 100 μl 血清或血 浆样品，高 DNA 产量； 2.  整个提取过程在单独的离心管中，无交叉污染； 3. 特别配制的乙醇能完全去除血液 中的脂质。	酶反应液 蛋白质消化液 碘化钠溶液  乙醇溶液 洗涤液 (A) 洗涤液 (B)	1×10 mL 1×250 μL 1×15 mL 1×30 mL 1×50 mL 1×50 mL
人和动物组织中的 DNA 提取（用于 8- 羟基脱氧鸟苷检测）
296-67701	DNA Extractor®  TIS Kit	50 次	组织培养细胞	碘化钠法	1.   用于 8- 羟基脱氧鸟苷（氧化应激标志物）检测和鉴定 2.   抗氧化剂阻止更进一步的 DNA氧化。	裂解液 酶反应液 蛋白酶溶液 蛋白消化液  氧化抑制剂 碘化钠溶液 乙醇溶液 PEG 溶液	2×75 mL 1×15 mL 1×50 μL 1×750 μL 1×350 μL 1×15 mL 1×30 mL 1×20 mL
全血中的 DNA 提取
291-50502	DNA   Extractor®  WB Kit	50 次	全血组织培养细胞	碘钠化法	1.   高 DNA 回收率 2. 整个提取过程在单独的离心管 中，无交叉污染；	裂解液 酶反应液 碘化钠溶液 洗涤液 (A) 洗涤液 (B) 蛋白酶	2×65 mL 1×10 mL 1×15 mL 1×50 mL 1×50 mL 1×10 mg
297-54801 293-54803	DNA Extractor®  WB-Rapid Kit	20 次 200 次	全血		比 DNA Extractor® WB Kit 实验步骤更少、提取时间更短                  (30 分钟以内 )	裂解液 酶反应液 洗涤液   蛋白酶溶液	20 次反应 1×10 mL 1×0.8 mL 1×20 mL 1×40 μL	200 次反应 2×50 mL 1×8 mL 3×70 mL 1×400 μL
石蜡包埋组织的 DNA 提取
295-52401	DNA Isolator PS Kit	100 次	石蜡包埋组织			酶反应液 酶激活剂 蛋白酶 DNA 沉淀促进剂 DNA 稀释剂	1×2 mL 1×34 mg 1×2.2 mg 1×0.5 mL 1×0.5 mL
291-56401	DNA Isolator PS-Rapid Reagent	100 次	石蜡包埋组织	煮沸法		DNA 提取溶液	5×10 mL
全血中线粒体 DNA 提取
293-54401	mtDNA   Extractor®  WB Kit	25 次	全血	碘化钠法	全血中线粒体 DNA 提取可在 90 分 钟内完成。	白血球提取溶液 DNA 提取溶液 I DNA 提取溶液 II(A) DNA 提取溶液II(B) DNA 提取溶液 III 碘化钠溶液 洗涤液	1×5.0 mL 1×26.5 mL 1×1.3 mL 1×1.3 mL 1×1.9 mL 1×7.5 mL 1×50 mL
培养细胞和组织样品中的线粒体 DNA 提取
291-55301	mtDNA   Extractor®  CT Kit	25 次	组织培养细胞	碘化钠法	培养细胞和组织样品中的线粒体 DNA 提取	匀浆液缓冲液 DNA 提取溶液 I DNA 提取溶液 II(A) DNA 提取溶液II(B) DNA 提取溶液 III 碘化钠溶液 洗涤液	1×25.0 mL 1×1.3 mL 1×1.3 mL 1×1.3 mL 1×1.9 mL 1×7.5 mL 1×50 mL
法医学调查的 DNA 提取
295-58501	DNA Extractor®  FM Kit	50 次	头发  指甲  血迹  唾液	碘化钠法	在几十分钟内可溶解多种毛发	裂解液 酶激活试剂 (EAR) 再水化液 蛋白酶 碘化钠溶液   洗涤液 (A) 洗涤液 (B)	1×9.5 mL 1×80 mg 1×0.5 mL 1×10 mg 1×12.5 mL 1×50 mL 1×50 mL

Q：    产品的特色是什么？
A：    传统的方式是采用蛋白酶 -SDS 的方法提取 DNA，虽然能够获得高品质的 DNA，但是后续需 要用苯酚 –

         氯仿进行处理，而苯酚 – 氯仿属于危险化学品，对人体有一定危害。Wako 的该试剂盒采用碘化钠法，能获

         得高质量和高回收率的 DNA，抽提过程不需要使用苯酚 – 氯仿。碘化钠代替苯酚 – 氯仿，溶解蛋白和脂类。

         糖原作为载体，异丙醇沉淀DNA。只需将 试剂加入离心管内即可，不同于其他的 DNA 抽提试剂盒采用柱吸

         附法。

Q：    测定原理
A：    碘化钠是离液序列离子的代表化合物，可作为蛋白质的溶解剂使用。月桂基酰基氨酸钠是和 SDS 相同的表面

          活性剂，蛋白质的改性剂。 由这两个化合物作用使蛋白质改性后与核酸分离。蛋白质的改性、溶解（核酸也

          是溶解状态）的状态中添加酒精（异丙醇），使核酸析出，沉淀。

Q：    产品说明书中的方法 1 是血清中提取 DNA，请问血浆是否可用？
A：    血浆可以用。

Q：    产品回收率多少？
A：    一般，样品中提取残留 DNA，即使极微量（DNA 在 10 pg 左右）也能高效率的回收而不伤害样品。文献 *

         报道的回收率是 80% ~ 90%

Q：    该产品说明书上提供了两种方法，该如何选择？
A：
          方法 1 是用于血清 DNA 的抽提，如果样品蛋白浓度高可以采用这种方法。
          方法 2 是 Threshold Systems 总 DNA 检测时样品的处理，是配套 Molecμlar Devices的生物制品中定量

          DNA 和蛋白的光寻导电位传感器（LAPS）使用。在其说明书上有介绍Wako 该款试剂盒的操作步骤。如果

          样品蛋白浓度低，也可以采用方法 2。MolecμlarDevices 说明书上的步骤，和 Wako 该款试剂盒的操作步

          骤略有差异，客户可依据具体情况而定。

          注：和光纯药公司引进并销售美国Molecular Devices公司（加利福尼亚州门洛帕克）开发的检测DNA用的

          注：生物传感器（Threshold Systems）。“Threshold”是检测微量的DNA分子系统。

Q：    什么样的样品可使用该款试剂盒？  
A：    检测生物蛋白类药物包括抗体，疫苗和治疗性蛋白中残留的 DNA。这些生物制药可能是由细菌，酵母，动

          物或者细胞系生产获得。残留的宿主细胞 DNA 即使是小剂量，也会引起药物安全性 问题，所以 FDA 和

          WHO 对生物蛋白类药物中残留的宿主 DNA 都有规定。

Q：    是否可以用蛋白酶 K（Proteinase K）裂解细胞？
A：    推荐用蛋白酶 K 先处理样品，可提高回收率。Protein K 本身不含有 DNA。

Q：    客户使用该试剂盒前用蛋白酶 K 消化样品蛋白，但是回收率没有达到文献 * 提到 80 ~ 90%。
A：    蛋白酶 K 消化蛋白灭活核酸酶的过程可能导致纯化过程中 DNA 降解。建议 37 ℃（或 60 ℃过夜），添加

          SDS 裂解缓冲液。（MD 的操作是加入蛋白酶 K 和 SDS 溶液，55℃过夜）注意：PK 处理的后期 SDS 浓

          度不能超过 0.1%。在处理的末期，SDS 可能减少 1/10。裂解缓冲液开始不能超过 1% SDS。

Q：    是否可以用乙醇替代异丙醇？
A：    用乙醇替代异丙醇，可能会导致回收率下降。若要使用乙醇，客户可尝试自己优化条件。

Q：    按照方法 2，样品的体积是 400 μl 或者 500 μl，如果添加蛋白酶 K，样品的体积应该是多少？
A：    添加蛋白酶 K 以及缓冲液的，包括蛋白酶 K 和缓冲液在内样品的体积是 400 μl 或者 500 μl。

Q：    按照方法 2，样品体积要求 400 μl，但是如果达不到 400 μl，可否用 200 μl 或者 250 μl 样品做实验？
A：    样品体积是 200 μl 或者 250 μl，也可以做实验。所有试剂按照相应比例添加。

Q：    方法 1 中，26 ml NaI 溶液中加入 6 ml 蒸馏水稀释，再加入 1 ml 月桂酰肌氨酸钠和 65μl 糖原混合后，

          可以保存多久？
A：    大约半年。

Q：    能否用荧光法进行检测？
A：    可以。使用者需要考虑荧光法检测的范围。（比如 EB 染色）

Q：    得到的 DNA 是否可进行 Real-Time PCR ？
A：    可以。

Q：    样品是蛋白。最后一步沉淀离心时，离下来的沉淀经常不牢，沉淀会飘起来，使后续不易操作。
A：    可尝试将方法 2 中提取步骤 8 的离心分离的条件从"10,000 g x 5 mins"增加到"10,000 gx 10 mins"。
          步骤 8 加入洗涤溶液 B 后的涡旋尽量时间短点。过分涡旋会导致回收率下降。另外， 步骤 5 的残留

          溶液请去除干净完全。

Q：    DNA 的回收率低。
A：    可尝试不做涡旋，轻柔的倾倒试管混合，尽量不破坏 Pellet 的形状。

Q：    如果客户样品中蛋白含量高，采用说明书中的哪个方法？
A：    1）预处理样品：样品中加入 2 mg/ml 蛋白酶 K 和 1% SDS，37℃或者 60℃过夜。
          2）按照方法 1 进行。添加糖原溶液（可以是说明书上提到的   2 倍体积）有助于 DNA 沉淀。