从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒

ISOGEN PB Kit

　　本产品是石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒。包含从脱石蜡，Proteinase K处理组织到利用ISOGEN-LS提取RNA，非常简便、短时间（约2小时）即可完成。提取的RNA可用于RT-PCR检测。

◆特点

●　从石蜡包埋组织切片提取RNA

●　操作简便，且用时少（2小时）

●　提取的RNA可用于RT-PCR

◆用途

●　RT-PCR 检测RNA 病毒

●　RT-PCR 检测mRNA

●　检测石蜡包埋组织切片的RNA 保存度等

◆产品内容

产品	包装	备注
Proteinase K（20 mg/mL）	100 µL×1
Extraction Buffer	3 mL×1	可室温保存 Extraction Buffer 可能出现白色结晶，非质量问题。在37～50°C条件下，孵化后，结晶完全溶解后使用。
ISOGEN-LS	10 mL×1	非医疗用剧毒物 可冷藏保存（2～10°C）
Ethachinmate	60 µL×1	可冷藏保存（2～10°C）
Deoxyribonuclease（RT Grade）	20 µL×1
10X DNase（RT Grade）Buffer II	100 µL×1
Stop Solution（RT Grade）	100 µL×1
DEPC treated Water	500 µL×2	可室温保存

保存方法

　　冷冻保存（-20°C）

试剂盒以外必需的试剂

●　Lemosol^® 或Lemosol^® A

●　乙醇

●　氯仿

●　异丙醇

◆使用实例

操作前需知

　　从石蜡包埋组织提取RNA时， RNA的分解持续到包埋过程，其RNA的完整性比从新鲜组织提取的RNA低。

　　从哺乳动物的新鲜组织提取的total RNA经过电泳后，检测出明亮的28S rRNA和18S rRNA条带，其比例约为2 : 1。使用石蜡包埋组织进行提取时，无法得出这个结果。实际上，使用小鼠的石蜡包埋组织进行提取实验，几乎无法检测28S rRNA。因此，在包埋过程中引导RNA分解。石蜡包埋状态关系到RNA的分解程度。有可检测出18S rRNA的石蜡块，也有18S rRNA降解太多而无法检测出来。Nippon Gene将判断基准设定为剩余一个18S rRNA，in situ hybridization等、需要高保存度RNA时，建议设定标准。

　　即使RNA已分解（包括无法确认18S rRNA的情况），可使用RT-PCR检测出基因，使用RT-PCR时，RNA的完整性较好。但是使用石蜡包埋组织切片进行PCR时，扩增效率比一般情况的低，请注意避免引物长度设置过大（400 bp以下，尽量设置为200 bp以下）。

操作流程

　　　　　

操作实例1　从小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片提取RNA

　　按照操作流程，从4片10 µm小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片，提取RNA ，取1/4的 量（5 µL），使用1% 福尔马林変性Agarose S 进行电泳。

　　

操作实例2　RT-PCR检测小鼠Gapd基因

从小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片提取500 ng RNA， DNase 处理后，进行RT-PCR，检测出小鼠glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase（Gapd）基因外显子5（258 bp）。

　　　

　　　

关于微量样本RT-PCR

　　对于无法得到提取RNA的电泳结果或10 ng 以下的情况，建议添加RT反应補助试剂RTmate，进行逆转录。

◆备注

●　本产品为实验研究用试剂。请勿用于医疗用途。

◆资料 Data Sheet

产品手册

ISOGEN PB Kit 第二版 （PDF 261 KB）

SDS（Safety Data Sheet）

ISOGEN PB Kit （PDF）

◆相关产品

液体样本提取RNA用试剂　ISOGEN-LS

RT反应補助试剂　RTmate