ISOGEN II RNA抽提试剂
ISOGEN II
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- 参考文献
ISOGEN II RNA抽提试剂
ISOGEN II
从动物组织和培养细胞中高效分离纯化含有小RNA的总RNA
◆原理
ISOGEN II是从动物组织和培养细胞中总RNA和小RNA的抽提试剂。本品是含有苯酚和胍的均相液体，根据与细胞成分的相互作用，能单一地分离RNA。
使用旧产品（ISOGEN和ISOGEN-LS）需要添加氯仿，要进行液相分离，而本产品则无需此步骤。在样品中加入ISOGEN II溶解或是均质化之后，再添加水，因为DNA、蛋白质、多糖类等会形成不溶性沉淀，进行离心分离后可以去除。用乙醇沉淀并洗涤、溶解得到上清之后，能分离出高纯度的RNA。
◆优点・特色
● 不需使用氯仿分离RNA
● 比起旧产品（ISOGEN等），小RNA的抽提效率更高
● 可以把大RNA（>200bases）和小RNA（<200bases〉分离（同时提供不分离的方案）
● DNA污染少，抽提的RNA可以直接用于RT-PCR和RT-qPCR上
● 约1 h可完成RNA的抽提
内容和保存条件
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产品名称 |
构成 |
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ISOGEN II |
ISOGEN II |
100mL |
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使用手册 |
1本 |
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ISOGEN II（with Ethachinmate） |
ISOGEN II |
10mL |
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Ethachinmate |
0.03mL |
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使用手册 |
1本 |
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冷藏保存
请在购买日起6个月内使用
本品可在室温下运输。产品到达后，在2~10℃条件下保存即可正常使用
产品安全数据图表（MSDS）
ISOGEN II MSDS
ISOGEN II(with Ethachinmate) MSDS
使用手册
ISOGEN II 手册（第一版）
ISOGEN II(with Ethachinmate)手册（第一版）
◆案例・应用
操作流程
使用例子
Data 1 抽提得到的RNA电泳
根据ISOGEN和ISOGEN II的方案抽提RNA，进行电泳
M：RNA Ladder (Code No.311-06261）
Lane1：ISOGEN 抽提总 RNA（2μg）
Lane2：ISOGEN II 抽提总RNA（2μg）
Lane3：ISOGEN II 抽提高分子RNA（2μg）
Lane4：ISOGEN II 抽提小RNA（0.2μg）
1.2%Agarose S（甲醛变性）EtBr染色
Lane1：ISOGEN 抽提总RNA（5μg）
Lane2：ISOGEN II 抽提总RNA（5μg）
Lane3：ISOGEN II 抽提高分子RNA（5μg）
Lane4：ISOGEN II 抽提小RNA（0.5μg）
12%聚丙烯酰胺（Urea变性）EtBr染色
ISOGEN II 能抽提和ISOGEN同等的总RNA
ISOGEN II 能对200base以上的高分子RNA和10~200base的小RNA进行分离
Data 2 ISOGEN和ISOGEN II抽提的总RNA用“3D-Gene”Human miRNA Oligo chip（东来株式会社）分析。
ISOGEN II比ISOGEN能更完整地抽提miRNA
Data 3 RT-PCR
用ISOGEN和ISOGEN II从HeLa细胞中提取出RNA并定性，再用PT-PCR检测出β-Actin基因。同时进行没有经过RT反应的对照实验。
1：模板RNA量 500ng
2：模板RNA量 100ng
3：模板RNA量 20mg
M：Gene Ladder 100
实验证明以ISOGEN II抽提的RNA与以ISOGEN抽提的RNA相比，DNA残留更少。
Data 4 RNA提取量的参考值
分别用 “大RNA的提取”和“总RNA的提取”方案得到的RNA的提取量的参考值如下：
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试剂 |
大RNA的提取 |
总RNA的提取 |
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组织 |
肝脏 |
5~7 g RNA/mg tissue |
6~8 μg RNA/mg tissue |
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肾脏、脾脏 |
3~4 g RNA/mg tissue |
3~4 μg RNA/mg tissue |
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|
骨骼肌、脑、肺 |
0.5~1.5 g RNA/mg tissue |
0.5~1.5 μg RNA/mg tissue |
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胎盘 |
1~3 g RNA/mg tissue |
1~3 μg RNA/mg tissue |
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培养细胞 |
上皮细胞 |
5~8 g RNA/108 cells |
5~10 μg RNA/106 cells |
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成纤维细胞 |
3~5 g RNA/108 cells |
4~6 μg RNA/106 cells |
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◆注意事项
● 本品是实验研究用的试剂，不能作为医药品或其他目的使用。另外，如果您对试剂的基本的知识不了解。
请不要使用。
● 因为 ISOGEN II是医药用外有害物质（苯酚制剂），所以请小心操作。
● 使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。
● 请不要吸入蒸汽，进行充分的通风。
● 如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗至少15分钟，并前往医院就诊。
● 本品的操作请按照手册记载的内容进行
● 对于和手册记载内容不同的操作带来的事故，日本基因不负任何责任。
◆相关产品
|
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
备注 |
|
315-02504 |
ISOGEN |
10mL |
RNA抽提用试剂 医药用外有害物质 |
|
317-02503 |
50mL |
||
|
311-02501 |
100mL |
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|
– |
200mL |
||
|
317-02623 |
ISOGEN-LS |
10mL |
|
|
311-02621 |
100mL |
|
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
备注 |
|
298-68001 |
Target mRNA Cloning Kit Wako |
10次用 |
miRNA的目标mRNA克隆试剂盒 |
|
291-70201 |
microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 |
10次用 |
Argonaute（Ago）根据免疫沉淀的microRNA特异纯化试剂盒 |
|
292-66701 |
microRNA Isolation Kit, Human Ago2 |
10次用 |
|
|
292-67301 |
microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 |
10次用 |
|
|
297-70301 |
microRNA Isolation Kit, Human Ago3 |
10次用 |
|
|
015-22411 |
Anti Ago1, Monoclonal Antibody (2A7) |
50μL |
抗Argonaute（Ago）抗体 |
|
014-22023 |
Anti Mouse Ago2, Monoclonal Antibody |
50μL |
|
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018-22021 |
100μL |
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|
011-22033 |
Anti Human Ago2, Monoclonal Antibody |
50μL |
|
|
015-22031 |
100μL |
||
|
290-66501 |
microRNA Cloning Kit Wako |
8次用 |
含热稳定ligase高效小RNA克隆试剂盒 |
参考文献
| 1. |
Chomczynski, P. Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending. |
| 2. |
Chomczynski, P. and Sacchi, N:Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroformextraction”, Anal. Biochem., 162, 156-159（1987） |
| 3. |
Chomczynski, P.:A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques, 15, 532-537(1993) |
| 4. |
Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.:Effect of pH and ionic strength on thespectrophotometric assessment of nucleic acid purity”, Biotechniques, 22, 474-481(1997) |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 产品价格 |
| 311-07361 | ISOGEN Ⅱ 总RNA及小RNA提取试剂 |
100mL | 医药用外有害物质 | – |
| 314-07351 | ISOGEN II（with Ethachinmate） | 10mL | 医药用外有害物质 | – |