显色法检测组胺试剂盒

　　

　　组胺多数产生于金枪鱼，鲣鱼，鲭鱼此类海鲜的腐败过程中。

　　对于以生鱼（鲜鱼、冷冻鱼肉）为原料的食品来说，为了防止组胺过量而导致过敏性中毒，对于食品组胺浓度测定的管理是很重要的。

　　但是，以前的组胺检测需要耗时一天，检测费用高，需要使用大型检测设备。如果用显色法组胺检测系统，生鱼（鲜鱼、冷冻鱼肉）的组胺含量检测可以快捷地完成。

获奖情况：

　　2007年日本水产学会的水产技术奖

　　2014年日本酱油协会的日本酱油技术奖（应用部门）

 

◆特点

　　●　简单： 前处理操作简单，可以省略荧光光谱法和高效液相色谱法那样测定障碍物质复杂的前处理操作。由于酶的特异性高，无需使用强酸或有机溶剂，任何对象均可简单、安全地分析

　　●　迅速： 利用具有高组胺特异性的组胺脱氢酶的酶法来检测。如果是生鱼，检测和提取过程仅需要1个小时即可得到结果。

　　●　廉价： 用廉价的试剂和检测器就可检测，免除了仪器成本。

 

◆测定原理

　　组胺含有1－Methoxy PMS的情况下，添加组胺脱氢酶会被特异性分解。此时因产生的电子转移会通过四唑盐显色，便可以在470nm上下测量吸光度，计算组胺浓度。

◆性能

　　●　特异性：即使样本中含有尸胺和腐胺等其他的胺类也不影响检测结果。

　　●　测定范围：0.4-6ppm生鱼样本换算10-150ppm（稀释25倍）。

　　●　测定时间：各试剂注入后约20分钟。

◆试剂盒内容

试剂名	主要成分	包装
酶	组胺脱氢酶	冷冻干燥品  6瓶
显色试剂	WST-8/1-Methoxy PMS	冷冻干燥品  6瓶
缓冲液	Tris缓冲液	24mL  3瓶
标准液（30mL）	组胺	30mL  1瓶

（60次测定：10次×6）（2-8℃保存）

注意：

　　●　测定仪器请使用分光光度计（可检测到470nm左右） 。 *如需仪器推荐：分光光度计B

　　●　此试剂除了自主卫生检查和研究用途以外不用。

 

◆宣传彩页

显色法检测组胺试剂盒

◆操作视频

请点击链接观看视频：http://www.boppard.cn/resources/show/43.html

其他组织样品的组胺检测试剂盒（欲了解详情请点击文字）

Q&A导读：

◆关于组胺

◆关于龟甲万的组胺检测法

◆关于显色法组胺检测试剂盒

◆关于从样本中提取组胺

◆关于检测值有误的问题

◆关于组胺

Q1：　什么是组胺？

A1：　一种由组氨酸（氨基酸）合成的胺。如果红身鱼（金枪鱼，秋刀鱼，鲣鱼，竹荚鱼，青花鱼等）等含有大量

　　　 组氨酸的食物，被组胺菌污染的话，会产生组胺。

　　　 另外，一般来说，人的喉咙和鼻粘膜上皮都存在着很多肥大细胞、嗜碱性粒细胞等。一旦数量过多，也会引

　　　 起过敏症状。

 

Q2：　什么是过敏性食物中毒（组胺中毒）？

A2：　红身鱼被组胺菌污染的原因是，食品在制造加工、运输时，在家庭等地方的保存温度管理不当时，组胺菌繁

　　　 殖增多，产生大量组胺。（参照：Q1.什么是组胺？）

　　　 组胺非常耐热，一旦生成，普通的加热处理无法使它分解，还是会残留在鱼肉里。因此，人们食用了被组胺

　　　 污染的鱼或其加工食品，可能会出现过敏症状。在食品安全学上，这种症状被称为过敏性食物中毒（组胺中

　　　 毒）。

Q3：　食物中含有多少组胺时，会引起食物中毒？

A3：　一般来说，食物的组胺含量超过100mg/100g＝1000ppm以上的话，会引起食物中毒。

　　　 组胺是会引起过敏反应，胃酸分泌，血压等各种生理反应的化学物质。因此，摄取高浓度组胺的话，约30分

　　　 钟~60分钟后，会出现面部、特别是嘴巴周围以及耳垂的泛红症状，还会出现头痛，荨麻疹，发热等。一般

　　　 经过6~10小时后会恢复正常。

Q4：　对于食物中含有的组胺量标准，是否有相关规定？

A4：　日本：没有相关法制规定。

　　　 欧美：有相关规定。因此，出口到欧美国家的食品，必须要严格遵守规定。

Q5：　有什么方法可以检测组胺量？

A5：　检测鱼肉中的组胺量方法：生物检测技术，比色法，荧光法，高速色谱法（HPLC），抗原 – 抗体反应和毛

　　　 细管电泳等。

　　　 一般来说，日本是使用卫生检测法的HPLC法；美国则是使用荧光光度法（被记载于国际标准—-AOAC法

　　　 内）。

◆关于龟甲万的组胺检测法

Q1：　龟甲万的组胺检测法与其他检测法相比有什么优点？

A1：　・提取组胺的方法简单，无需进行除去阻碍检测物质的前处理。

　　　 ・与HPLC法、其他公司的同类产品相比，操作更简单。

　　　 ・可以快速、精准度高地检测组胺。

　　　 ・与HPLC法有着很高的相关性。

Q2：　需要什么仪器或器具？

A2：　必需：组胺检测试剂盒（显色法检测组胺），分光光度计。

　　　 其他：请阅读说明书的第一页右下角（试剂盒所需的器具）。

　　　 注意：请使用塑料器具。因为组胺会附着在玻璃上。

Q3：　一般的分光光度计也可以检测吗？

A3：　可以。但需要是可以检测460nm上下的吸光度的分光光度计。

　　　 注意：推荐使用的分光光度计（分光光度计BABS-B470，共立理化学研究所公司所制）的光路是2cm。

　　　 如果使用光路是1cm的分光光度计，一旦超出组胺的检测界限，标准溶液的检测值也会变化。

　　　 详情请阅读说明书：第一页左方— [试剂盒性能] 和 第2页右方—5）标准值的检测。

◆关于显色法组胺检测试剂盒

Q1：　显色法检测组胺试剂盒的检测浓度范围？

A1：　使用推荐的分光光度计B：可以检测的组胺浓度是0.4-6ppm。如果是检测生鱼，罐头鱼等，将样品稀

　　　 释25倍，再换算样品的浓度，可以检测组胺的范围是10-150ppm。

　　　 光路长1cm的分光光度计：可以检测的组胺浓度是0.8-12ppm。

　　　 如果是检测生鱼，罐头鱼等，将样品稀释25倍，再换算样品的浓度，可以检测组胺的范围是

　　　 20-300ppm。

　　　 此外，若样本的组胺浓度超过检测范围的话，可以稀释样本后，再检测。

Q2：　1盒显色法组胺检测试剂盒可以检测多少个样本？

A2：　本试剂盒可以检测60次。但是，在实际的检测中，每进行一次连续的检测，就需要检测一次标准值。因

　　　 此根据每次连续检测的样本数的不同，一个试剂盒可以检测的样本数也不同。

　　　 例如：

　　　 如果一次的检测就把试剂盒用完的话，除去检测一次标准值之外，实际可以的样本数为59个。

　　　 如果每次检测的样本数为5个的话，再加上每次都需要检测一次标准值。实际可以检测的次数为10次，即

　　　 可以检测的样本数为50个。

　　　 注意：在一次连续的检测中，将没用完的冷冻、冷藏后的试剂替换成新的试剂时候，请再次重新检测标准

　　　 值。

Q3：　如果没有可以调制组胺提取溶液的设备，可以买其他的代替吗？

A3：　不好意思，无法提供组胺提取液的购买。若调制溶液时遇到问题，可以使用其他替代品，详情请咨询金畔。

Q4：　如何保存溶解后剩下的显色试剂？

A4：　最好可以一次性用完溶解后的显色试剂。

　　　 如果真的用剩了，请在按以下方法进行保存：

　　　 冷藏：2～8℃，可保存一周

　　　 冷冻：-10℃以下，可保存一个月。

　　　 在以上保存的情况下，冻结溶解操作只可进行3次。

　　　 （详情请阅读说明书第二页左方 “2.试剂的调制（显色试剂）”）

　　　 解冻时，请在流水中快速进行。解冻完请一定要冷却后再使用。

Q5：　如何保存溶解后剩下的酶试剂？

A5：　最好可以一次性用完溶解后的酶试剂。

　　　 如果真的用剩了，请在按以下方法进行保存：

　　　 冷冻：-10℃以下，可保存一个月。冻结溶解操作只可进行3次。（详情请阅读说明书第二页左方 “2.试剂

　　　 的调制（酶试剂）”）

　　　 还有，当用完冷冻溶解后的酶试剂后，换成新的酶试剂时，请重新检测标准值。

◆关于从样本中提取组胺

Q1：　为什么从活鱼提取组胺时，需要进行煮沸处理？

A1：　因为组胺是存在于鱼肉成分(肌肉蛋白、油等)中，所以加热后再提取，效率更高。而罐头类食品本身已经过

　　　 加热处理了，提取时不需要再煮沸。

Q2：　如果不能立刻检测样本，或者是已提取了组胺的样本的话，应该怎样做？

A2：　活鱼：请冷冻保存。保存方法没有什么需要注意的点，不过为避免解冻时的酶反应发生得太快，请尽快完

　　　 成解冻。

　　　 ・经过煮沸提取组胺，再过滤后的样本，可以进行放入冷藏、冷冻格里保存。

　　　 ・组胺提取没有经过煮沸的样本，以及对样本进行前处理的时候，由于样本中含有酶，需要进行冷冻。解

　　　 冻的时候，如果有沉淀物出现的话请用滤纸等进行除去。

Q3：　听说样本中含有杂质时，是不能进行检测的。那么杂质是什么物质？

A3：　影响组胺检测试剂盒反应的杂质是氧化还原物质。

　　　 鱼粉：饲料不新鲜时，由此而增殖的微生物形成的氧化还原物质就是杂质。

　　　 罐头：调味料可能具有氧化还原能力。

 

Q4：　如果样本有杂质，检测值是偏高还是偏低？

A4：　如果还原物质多的话，检测值会偏高，如果氧化物质多的话，检测值会偏低。因此检测值是偏高还是偏低，

　　　 是根据两种物质的比例来决定的。氧化还原物质是抗氧化物质（维生素和细胞色素等）或者是氧化物质，在

　　　 食品中以多种类的方式存在，因此无法确认是哪个种类物质造成的影响。

Q5：　如何知道样本中是否含有杂质？

A5：　对新的食品进行组胺检测时，可以在样本添加定量的组胺，然后进行检测（添加回收实验）。由此可以知道

　　　 是否有杂质的影响，以及是否需要进行前处理。

Q6：　是否有排除杂质影响的方法？

A6：　鱼肉、金枪鱼罐头、鱼酱油等食品，只要按照说明书操作（一般的操作的提取、检测），是可以除去杂质的

　　　 影响。

　　　 但是，如果使用一般方法，也不能排除杂质影响的话，可以通过稀释样品或固相萃取柱将氧化还原物质进行

　　　 前处理。（详情请咨询金畔）

◆关于检测值有误的问题

Q1：　标准溶液的数值偏低。

A1：　如果使用了溶解后再保存的酶溶液，因为在保存情况下酶活性降低，标准值可能也会降低。但只要达到正常

　　　 数值（0.85）的80%以上，检测就没有问题。

　　　 注意：使用光路为1cm的光度计的时候，检测值达到一半以上即可（0.5左右）。（详情请阅读说明书：第

　　　 二页右方检测5）

Q2：　样本的组胺量比实际要低。

A2：　・样本的均化没有很好地进行。

　　　 （如果样本的均化没有很好地进行，将无法完全地提取组胺）

　　　 ・样本中含有杂质（参考Q.如果样本有杂质，检测值是偏高还是偏低？）

 

Q3：　样本的组胺浓度超出检测界限。

A3：　稀释组胺提取液后，再次检测。计算出组胺浓度时，注意要考虑稀释倍数，再进行计算。

Q4：　计算样本的组胺量后，得到负数。

A4：　该样本的组胺量，在检测范围的10ppm以下。（使用推荐的仪器分光光度计B的情况下）

　　　 得到负数的原因：

　　　 ・样本中不存在组胺。

　　　 ・组胺浓度在检测范围以下时，因有检测误差，计算样本检测值和样本空白值的差值，得到负数。

　　　 推荐仪器（分光光度计B）的检测范围的下限是10ppm。因此，得到负数是因为，样本的组胺浓度会出现

　　　 10ppm以下。

Q5：　检测完的反应液在放置一阵之后，再次检测后发现，检测值变高。那么，哪个数值才是正确？

A5：　反应结束后的检测值是正确的。

　　　 试剂盒的显色试剂，是通过阳光来显色的。如果把反应液放置在有阳光照射的地方，检测值会变高。因此，

　　　 反应结束后，请迅速进行检测。

Q6：　活的红身鱼在常温下放置了几天。检测后发现，鱼中并不含有组胺。

A6：　红身鱼（金枪鱼，秋刀鱼，鲣鱼，竹荚鱼，青花鱼等）等含有大量的组氨酸的食物，若被组胺菌污染的话，

　　　 会产生组胺。因此，还未被组胺菌污染的红身鱼即使腐烂了，也不会被检出组胺。