SCALEVIEW®-S4

SCALEVIEW®-S4
球状体·细胞用透明化试剂

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  • 参考文献

SCALEVIEW®-S4球状体·细胞透明化试剂

SCALEVIEW®-S4

SCALEVIEW®-S是组织透明化试剂。可通过使用SCALEVIEW®-S0 – SCALEVIEW®-SMt等六种产品进行组织透明化处理。

其中,可单独使用SCALEVIEW®-S4透明化球状体或细胞。只需将目标样品浸入SCALEVIEW®-S4即可。


◆特点


● 只需浸泡即可实现简单透明化

● 透明化耗时短(1日左右)

● 不需要特殊的设备

● 可配合荧光抗体标记和荧光素观察

◆T47D细胞球状体观察实例

Data by Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).


SCALEVIEW®-S4

图1. SCALEVIEW®-S4透明化T47D细胞球体的图像示例(细胞核使用Hoechst染色)4

       使用共聚焦显微镜Z-堆叠获得的球状体图像。



SCALEVIEW®-S4


2. T47D细胞球状体经诺考达唑处理后,使用组蛋白H3抗体的测量实例。

       通过SCALEVIEW®-S4的透明化处理,可观察药物施用对球状体表面和内部的影响。


◆操作步骤图示


SCALEVIEW®-S4

◆SCALEVIEW®-S4 Neurosphere的观察实例

数据提供:

国立研究开发法人理化学研究所

脑神经科学研究中心细胞技能探索技术研究组/ 光量子工学研究中心生命光学技术研究组 滨裕先生、星田哲志先生、宫脇敦史先生

协助:olympus 株式会社



Neurosphere的观察实例

(※试剂使用量推荐前处理和透明化均为各试剂:1.2mL。※荧光抗体标记基于AbScale方案。)


固定 前处理
灌注固定+固定
4%PFA/PBS(-)
【pH 7.6-7.8】
前处理1
SCALEVIEW®-S0
透明处理1
SCALEVIEW®-A2
透明处理2
8 M Urea Solution
透明处理3    SCALEVIEW®-A2 洗净
deScale Solution
4 ℃, 3 day 37 ℃, 4 hr 37 ℃, 4 hr

37 ℃,

12 hr

37 ℃, 4 hr 4 ℃, 6 hr

荧光抗体标记 透明化 观察

Blocking

1% Blocking Reagent(Roche)/

    PBS(-)

抗体标记【例:标记Iba1抗体】
AbScale Solution
洗净
AbScale Solution
再固定
4% PFA/PBS(-)【pH 7.6-7.8】
洗净
 deScale Solution
透明化

 SCALEVIEW®-S4

37 ℃,4 hr

固定
SCALEVIEW®-S4
摇动1小时后固定*
室温,2 hr 37 ℃, >1 day

室温,  

2 hr ×1、

1 hr ×1

室温,1 hr 4 ℃,3 hr 37 ℃,4 hr 室温

*透明化后,使用1.5%(wt / vol)琼脂糖嵌入并固定。

成年大鼠海马神经干细胞神经球状体的三维免疫荧光  —使用AbScale法—


SCALEVIEW®-S4

参考文献


1) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

2) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).

3) Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019

4) Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).

◆产品信息


产品编号 产品名称 规格 包装
194-18561 SCALEVIEW-S4
SCALEVIEW-S4组织透明化试剂
组织透明化用 250 mL

◆相关产品


产品编号 产品名称 规格 包装
193-18455 SCALEVIEW-A2
SCALEVIEW® 组织透明化试剂A2
组织透明化用 500 mL
196-18521 SCALEVIEW-S0
SCALEVIEW® 组织透明化试剂S0
组织透明化用 250 mL
041-34425 deScale Solution
透明化洗涤溶液
组织透明化用 500 mL
294-35631 See Through Chamber, 0.3mm thick
透明室,0.3mm厚
组织透明化用 10 set
291-35641 See Through Chamber, 0.5mm thick
透明室,0.5mm厚
组织透明化用 10 set
295-35661 See Through Chamber, 1.0mm thick
透明室,1.0mm厚
组织透明化用 10 set
292-35671 See Through Chamber, 2.0mm thick
透明室,2.0mm厚
组织透明化用 10 set
299-35681 See Through Chamber, 3.0mm thick
透明室,3.0mm厚   
组织透明化用 10 set


相关资料

SCALEVIEW®-S4

透明化试剂方法选择流程.pdf

组织透明化试剂Q&A ver1.0

Tissue clearing reagent Q&A ver1.0

Q组织透明化的原则

A:组织透明化通常是按下面的步骤进行的:

A:(a)固定 (b)透化 (c)脱色 (d)折射率匹配

 

Q:组织透明化的优势

A:目前大多数可用的透明化技术,都是通过编码荧光报告蛋白或者用荧光标记抗体进行后标记,从而可视化

A:组织中特定的蛋白。组织透明化成为了具有单细胞分辨率的组织3D成像中重要的一环。

 

Q:透明化技术的比较

A:下面是水性的透明化技术。

SCALEVIEW®-S4


SCALEVIEW®-S4

A:SeeDB(基于果糖的方法)在一些应用中有一定优势。因为SeeDB不含去垢剂,所以对于透明化DiI(细胞膜

A:红色荧光探针,一种神经示踪剂)标记的样品和使用光电关联显微镜(CLEM)的情况下,SeeDB有着一定优

A:势。另外SeeDB会产生自体荧光,有时候会对辨认未标记的神经元结构(如神经毡)起着一定帮助。

A:SeeDB2是为使用高NA物镜的高分辨率成像而优化的技术;因此,当处理较大的组织时,CLARITY或者CUBIC

A:会是更好的选择。

 

Q:切片厚度的最大值和最小值?

A:您应该根据您的物镜的WD(工作距离)来决定切片的厚度。我们建议切片的厚度不要超过3mm。对于十分薄

A:且脆弱的样品,我们建议使用琼脂糖包埋。

A:使用CUBIC,可以让全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重复性。

 

Q:试剂盒成分

A:具体如下:

A:1. SCALEVIEW-S试剂盒(299-79001)适用于20份1-2mm的切片样品

A:A:1) SCALEVIEW-S0——100mL

A:A:2) SCALEVIEW-S1——100mL

A:A:3) SCALEVIEW-S2——100mL

A:A:4) SCALEVIEW-S3——100mL

A:A:5) SCALEVIEW-S4——100mL

A:A:6) SCALEVIEW-SMT——100mL

 

A:2. SCALEVIEW-S试剂盒(290-80801)适用于20-30份1-2mm的切片样品。

A:A:1) SCaleCUBIC-1 Solution——250mL

A:A:2) SCaleCUBIC-2 Solution——250mL

A:A:3) Mounting Solution 1——40mL

A:A:4) Mounting Solution 2——40mL

 

A:3. SeeDB试剂盒(299-79901)适用于20-30份1-2mm的切片样品。

A:A:1) SeeDB:20w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:2) SeeDB:40w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:3) SeeDB:60w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:4) SeeDB:80w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:5) SeeDB:100w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:6) SeeDB——50mL

 

A:4. SeeDB2试剂盒(294-80701)适用于20-30份1-2mm的切片样品。

A:A:1) Saponin(皂角苷)——5g

A:A:2) SeeDB2G solution——50mL

A:A:3) SeeDB2S solution——50mL

A:A:4) PBS——50mL

 

Q:样品的保存

A:SCALEVIEW-S处理的样品应在室温下保存2至3周。您可以在2至3周内观察SCALEVIEW-S透明化的样品中的

A:荧光信号。

A:CUBIC处理的样品应在室温下保存1周。您可以在1周内观察CUBIC透明化的样品中的荧光信号。

A:SeeDB2G处理的样品应在冰箱中保存1年,而SeeDB2S处理的样品则可在室温下保存1年。您可以在1年内观

A:察SeeDB透明化的样品中的荧光信号。

 

Q:抗体的荧光标记

A:应在进行透明化前就进行抗体的荧光标记。

 

Q:适用于SCALEVIEW-S的显微镜

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

 

Q:适用于CUBIC的显微镜

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

A:Zeiss Lightsheet Z.1(Carl Zeiss)

 

Q:适用于SeeDB2的显微镜

A:Confocal(最好使用高NA的油浸镜头)

A:STED(Leica Microsystems)

A:SR-SIM(Carl Zeiss)

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

A:Airyscan(Carl Zeiss)

A:HyVolution(Leica Microsystems)

A:Two-photon(最好使用复合浸没镜头)

A:Confocal(最好使用高NA的甘油浸镜头)

A:Light-sheet DLS(Leica,最好使用定制镜面的设备)

 

Q:重构

A:对于定量用途,我们建议使用Neurolucida系统(MBF)。我们同样测试了VAST Lite用于成像用途时的表

A:现。重构时也可以使用开源软件。例如,Vaa3d可以处理大量的拼接图像的数据。

 

Q:物镜推荐

SCALEVIEW®-S4

 

Q:其他物种?其他器官?

A:对于昆虫样品和鱼类样品,建议选择CUBIC。

A:昆虫相关文献:Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).

A:鱼类相关文献:Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).

   

  对于多细胞球状体,选择SCALEVIEW-S会更好。

  https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0

 

参考文献


1) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

2) Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).

3) Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019

4) Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).

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