凯杰试剂盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) 分子生物试剂12362

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凯杰试剂盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) 分子生物试剂

  • 产品型号：  12362
  • 简单描述
  • 凯杰试剂盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)纯化得到至多10 mg的无内毒素高转染级纯质粒或柯斯质粒DNA纯化得到的DNA内毒素水平低于0.1 EU/µg 纯化流程快，同时去除内毒素 获得高产量、高拷贝质粒DNA 使用LyseBlue，获得的裂解和高产量的DNA
详细介绍

凯杰试剂盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)

纯化得到至多500 μg无内毒素高转染级纯质粒或柯斯质粒DNA

  • 纯化得到的DNA内毒素低于0.1 EU/µg

  • 纯化流程快，同时去除内毒素

  • 获得高产量的高拷贝质粒DNA

  • 使用LyseBlue，获得的裂解和高产量的DNA

EndoFree Plasmid Kits基于阴离子交换技术，可快速制备不含内毒素的质粒DNA。QIAfilter Cartridges通过过滤快速澄清裂解液，DNA产量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制备的DNA纯度超过两次CsCl梯度离心法所得DNA的纯度，非常适合超转染级纯的应用。

质粒纯化方法与转染效率。

使用两种方法独立制备pRSVcat，分别使用脂质体介导的方法转染到COS-7、HeLa和LMH细胞中，及使用磷酸钙转染至Huh7细胞中。平均转染效率以相对于QIAGEN Plasmid Kit制备的DNA的转染效率表示。

凯杰试剂盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)

性能

EndoFree Plasmid Maxi Kit将高效的内毒素去除步骤整合到质粒纯化过程中，不需要额外步骤，也不需用亲和柱去除脂多糖。通过QIAfilter Maxi Cartridge过滤细菌裂解液，通过重力流QIAGEN-tip 500阴离子交换柱纯化质粒DNA。100–250 ml培养菌液至多可纯化500 µg DNA。（培养量取决于质粒拷贝数量、插入片段大小、宿主菌和培养介质。）纯化的DNA无内毒素（<0.1 EU/µg DNA）。

EndoFree Plasmid Kits去除细菌在裂解过程中释放的内毒素，内毒素会影响原代细胞和敏感培养细胞的DNA转染。从EndoFree Plasmid Kits得到的无内毒素DNA高度适用于可重复且结果可靠的转染。QIAGEN超纯无内毒素DNA也适用于基因治疗研究和其他敏感应用。

质粒制备中的内毒素水平*
质粒准备方法 内毒素(EU†/µg DNA) 平均转染效率‡
EndoFree Plasmid Kit 0.1 154%
QIAGEN Plasmid Kit 9.3 100
2x CsCl 2.6 99%
Silica-gel slurry 1230.0 24%
* 宿主菌：大肠杆菌DH5α  质粒：pRSVcat.
† 1 ng LPS = 1.8 EU.
‡ 根据表中数据计算 “Plasmid purification method versus transfection efficiency”.
无内毒素DNA配合原代细胞得到高转染率*
DNA纯化方法 转染细胞百分比
EndoFree Plasmid Kit 21.0% ± 0.93
QIAGEN Plasmid Kit 8.1% ± 0.57
Silica-gel slurry 5.2% ± 0.74
* 原代兔胃壁细胞转染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制备。使用Effectene Transfection Reagent进行转染。该数据是细胞表达GFP的百分率，由转染48小时后绿色荧光细胞数量确定。转染效率是每种纯化方法制备的超过2个不同的DNA中6–9个复制样本的平均值。（数据由C. Chew and J. Parente友情提供， Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.）
原理

纯化的质粒DNA内毒素污染水平取决于所用的纯化方法。硅胶技术纯化的DNA具有非常高的内毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和两次CsCl超速离心可获得相对低水平内毒素的纯DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的内毒素去除步骤，获得<0.1 EU/µg的质粒DNA。