ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red

08 ラベル化剤

ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red

• ラベル化剤

エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Deep Red

• 細胞外で凝集せず、より正確な動態を観察できる
• 本キットだけで蛍光標識から精製まで可能

• 製品コード
  EX06　 ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red

精製済エクソソームを染色することができます。

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マニュアル

技術情報

このキットだけで蛍光標識から精製まで

ExoSparkler シリーズは、エクソソームの標識に最適化したプロトコルに加え、蛍光標識後の未反応色素を除去できるフィルトレーションチューブを同梱しているため、簡単な操作で蛍光標識エクソソームを調製できます。

 

精製手法(未反応色素の除去)の比較

ExoSparklarシリーズで未反応色素の除去に使用しているフィルトレーションチューブは、同用途で従来から用いられているゲルろ過法と比較して、高い回収率でエクソソームを精製することが可能です。

	回収率※
フィルトレーションチューブ(本キット)	50% 程度
ゲルろ過法	10% 程度
※ 小社での実施例：精製前後のエクソソーム粒子数をNTA(ナノ粒子トラッキング解析)で比較

フィルトレーションチューブを用いた精製の有効性確認の蛍光画像をよくある質問：標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？に掲載しています。

技術や使用製品に関する補足

• 

  細胞外小胞、エクソソームの特性と機能 小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執筆いただいた記事を掲載しています。

Q

推奨されるエクソソームの精製法はありますか？

A

超遠心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。
また、超遠心法と同等の回収実績のある、ExoIsolator Exosome Isolation Kit(EX10)もご利用いただけます。

なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、残存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。

1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。

2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細胞取り込みアッセイに標識エクソソームを使用する場合、細胞内動態が変化する恐れがございます。

Q

標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？

A

未反応の色素はフィルターに保持されるために着色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認しております。

 

＜実験条件＞
超遠心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質量として10 µg)のバッファー溶液 または ②バッファーのみ を各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細胞(1.25×10⁴ cells)に添加して、4時間後の蛍光画像を観察しました。

結果として、バッファーのみで得られた回収物は細胞へ添加しても蛍光輝点が観察されず、回収物に未反応の色素が残っていないことを確認しました。

①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合

　　　　　　　　　　　　　細胞へ添加後(4h)の蛍光画像

②バッファーのみをキットで処理した場合

　　　　　　　　　　　　　細胞へ添加後(4h)の蛍光画像

■　検出条件
　Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
　Red    ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
　Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm

Q

染色後のエクソソームは保存できますか。

A

染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。

Q

エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。

A

小社では染色後のエクソソームを用いた細胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。

なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお勧めできません。

Q

エクソソーム以外に夾雑物が含まれる場合、夾雑物も染色されますか？

A

はい。エクソソーム以外のタンパク質等の夾雑物が含まれると、夾雑物も染色されてしまいます。
そのため、精製したエクソソームをご準備ください。
精製方法については、「推奨されるエクソソームの精製法はありますか？」をご参照ください。

Q

1sampleあたりの染色できるエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)を教えてください。

A

1sampleあたりのエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)は以下の通りです。
精製済エクソソーム(超遠心法)として、タンパク質：1-10 μg/sample, 粒子数 10-100x 10⁸ 個/sample

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。