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试剂盒内含
性质
该试剂盒，可通过二抗的方法轻松检测出作为DNA损伤的指标γH2AX。 本试剂盒内包含了实验所需的所有试剂，即使是第一次使用的人操作起来也很方便，并且我们还将介绍使用γH2AX作为指标的文献及实验例以供参考。
DNA损伤检测原理
DNA损伤中经常会出现DNA双链断裂，H2AX（一种组蛋白H2X的亚种），当出现DNA双链断裂时，会迅速而大量地被磷酸化。 这种磷酸化的H2AX（γH2AX），作为DNA损伤的标志物，有望被用来作为评估化学物质，活性氧，紫外线，辐射等的遗传毒性和致癌性。 近年来，γH2AX的检测也被用来作为评价细胞衰老的一种指标。
该产品使用单克隆抗体实验室生产的抗γH2AX抗体。
试剂盒特点
<试剂盒内已包含所有需要试剂>
所有试剂均已包含在试剂盒内，您可以马上检测并获得数据。
*对于多次染色和组织染色，请先查看常见问题中的“多次染色的注意事项”和“组织染色的注意事项”。
<操作简便>
细胞固定和膜渗透处理后，只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。
<3色可选>
细胞固定和膜渗透处理后，只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。
| 产品名称 | 荧光 | 激发发射波长 |
| DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green | 绿色 | λex : 494 nm、λem : 518 nm |
| DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red | 红色 | λex : 550 nm、λem : 566 nm |
| DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red | 深红色 | λex : 646 nm、λem : 668 nm |
试剂盒实验例
在评估细胞衰老时，应使用多种衰老指标进行分析。
<细胞衰老实验例>
| 概要 | 检测指标 | 论文 |
| 在自噬不足的卫生细胞中检测到细胞衰老，相反，通过添加自噬诱导剂后，细胞衰老被抑制。 | γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 | Laura Garcia-Prat, et. al., Nature, 2016, 529, 37. |
| 在2型糖尿病模型中，证实了衰老指标活性增加，DNA损伤水平增加。 | γH2AX、SA-β-gal、p21 | Milad S. Bitar, et. al., Am J Physiol Endocrinol Metab, 2013, 305(8), E951. |
| 在缺乏特定蛋白质（BRE）的小鼠成纤维细胞中，观察到细胞衰老明显增强。 | γH2AX、SA-β–gal | W. Shi, M. K. Tang, Y. Yao, C. Tang, Y. L. Chui and K. K. Lee Sci Rep. , 2016, 6, 23506. |
| 在棕榈酸处理的HepG2细胞中，染色质结构突变复合物之一SMARCD1减少，所有衰老指标的活性均得到增强。 | γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 | I. Chisato, et. al., NPJ Aging Mech Dis., 2017, 3, 11. |
| 在参与DNA修复的Ercc1基因缺陷小鼠中，证实了仅通过自发DNA损伤即会导致ROS水平升高和衰老诱导。 | γH2AX、SA-β-gal、p16 | R. R. Andria, et. Al., Redox Biology, 2018, 17, 259. |
<结合其他指标的细胞实验例>
<染色条件>
将不同代数的WI-38细胞固定后，用细胞衰老检测试剂盒-SPiDER-βGal对其进行染色。
使用0.1％Triton-X / PBS进行膜渗透处理后，用该试剂盒对γH2AX进行染色。
<检测条件>
H2AX（深红色）：Ex.590-650 nm / Em.663-738 nm
SA-β-gal：Ex.533-557 nm / Em.570-640 nm
DAPI：Ex.340-380 nm / Em.435-485 nm
常见问题Q&A
| Q：抗γH2AX抗体工作液和二抗工作液是否可以保存？ |
| A：无法保存，请当天使用。 |
| Q：可以使用试剂盒内含的封闭液以外，其他的试剂进行稀释抗体吗？ |
| A：我们建议使用试剂盒内含的封闭液进行稀释。用其他溶液稀释可能会增加背景。 |
| Q：多重染色的注意点 |
| A：由于该试剂盒使用源自小鼠的一抗，因此在共染色其他抗原时，请选择小鼠来源的一抗以外的一抗。 |
| Q：组织染色的注意点 |
| 请注意，不能用于小鼠组织的组织染色。
当需要对小鼠组织进行染色时，抗小鼠抗体（荧光标记的二抗）会对小鼠组织中IgG的非特异性吸附，从而增加背景。 <试剂盒中包含的抗体信息> |
| 来源 | 交叉性 | |
| 一抗 | 小鼠 | 人、小鼠 |
| 荧光标记的二抗 | 山羊 | 小鼠IgG |
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