亲和蛋白磁珠最终版

Tamavidin^®2-REV Magnetic Beads

<Tamavidin^®2-REV ~和生物素可逆性结合>

　　Tamavidin^®2-REV是新亲和蛋白[Tamavidin^®2]的变体。由于生物素的结合力降低，可形成可逆的生物素结合复合物。因此，通过添加过量生物素，可以竞争性洗脱生物素分子。

　　（之前的亲和蛋白/链亲和素与生物素的结合力非常牢固且不可逆。）

◆MagCapture™ Tamavidin®2-REV 概要

　　MagCapture™ Tamavidin®2-REV试剂组成：磁珠悬浮液，TBS缓冲液（pH7.4），0.05w/v%叠氮化钠，50w/v%甘油。

◆MagCapture™ Tamavidin^®2-REV使用案例

　　生物素化DYKDDDDK-BAP回收性能验证。

　　竞争洗脱的生物素溶液组成：2mmol/L 生物素，PBS溶液。

添加生物素化DYKDDDDK-BAP  10ng至细胞裂解液（相当于1*106细胞数）与原产品Streptavidin磁珠比较添加回收性能。 MagCapture™ Tamavidin®2-REV与原产品比较，低背景，能够回收到目生物素化DYKDDDDK-BAP。

生物素抗体免疫沉降

　　采用生物素化Anti-hAgo2 Mab，从K562细胞回收内源性人Ago2蛋白质。

　　与原产品Streptavidin磁珠相比，MagCapture™ Tamavidin^®2-REV是因其低背景，能够回收到内源性人Ago2蛋白质。

◆RNA Pull-down检测

  应用（HOTAIR RNA）

　　通过RNA Pull-down检测比较原产品链霉亲和素磁珠和MagCapture™ Tamavidin^®2-REV的性能。

　　RNA Pull-dow检测后的生物素可竞争性洗脱。（数据未公布）。

A	用生物素标记HOTAIR RNA的有义链和反义链进行RNAPull-down检测，通过SDS样品缓冲液洗脱，纯化的蛋白质样本通过银染色可检测出来。各RNA探针的反应样本均采用的是K562（5×106细胞数）的总细胞裂解物。
B	利用RNAPull-down实验获得的样本进行免疫印迹实验。一抗是抗Ezh2抗体(D2C9)以及LSD1抗体（C69G12）。 MagCapture™ Tamavidin®2-REV与原产品相比，可高效率且低背景回收RNA结合蛋白。

Tamavidin^®2 系列 产品概要

Magnetic Beads

　　本产品是将新规格抗生物素蛋白样蛋白的Tamavidin^®2-REV固相化在磁珠上。

　　Tamavidin^®2-REV是新规格的抗生物素蛋白样蛋白。因通过氨基酸修饰具有可逆的生物素结合性能，在结合生物素分子后，通过添加过量的生物素在温和洗脱条件下可回收靶分子。

Tamavidin^®2重组体

产品名称	等电点（pl）※1	耐热性※2	有机溶剂耐性	生物素结合速度系数(ka(M-1S-1))	生物素解离速度系数(kd(S-1))	分子量（四聚物）
Tamavidin®2	7.4	Tm=85℃	+	(1.0±0.5)×106	检测极限值以下※4	約60kDa
Tamavidin®2-REV	8	Tm=75℃	–	(1.3±0.5)×106	(1.5±0.4)×10-5	約60kDa
Tamavidin®2-LPI	6	Tm=65℃	–	(1.2±0.5)×106	检测极限值以下	約60kDa
Tamavidin® 2-HOT	7.23	高耐熱性	高耐性※3	(3.0±1.7)×105	检测极限值以下	約60kDa

※1	等电点：仅为Tamavidin®2-LPI的实测值。其他产品是通过氨基酸序列计算出来的数值。
※2	耐热性（TM值）：生物素结合活性加热20分钟可达到加热前的50%。关于Tamavidin®2-HOT，因为在99.9℃加热30分钟结合活性保持在90%以上，所以算不出数值。
※3	高耐性：40-50%DMSO中
※4	检测极限值：5×10-6(kd(S-1))

欲了解相关资料请点击：Tamavidin^®2-REV Magnetic Beads技术研讨会

【参考文献】

＜Tamavidin^®2＞
[1]　Takakura, Y. et al., "Tamavidins – novel avidin-like biotin-binding proteins from the Tamogitake mushroom.", FEBS Journal, 276, 1383(2009).
[2]　Takakura, Y. et al., "Tamavidin, a versatile affinity tag for protein purification and immobilization.",J. Biotechnol., 145, 317(2010).
＜Tamavidin^®2-REV＞
[3]　Takakura, Y. et al., "Tamavidin2-REV: An engineered tamavidin with reversible biotin-binding capability.", J. Biotechnol., 164(1), 19(2013).
＜Tamavidin^®2-LPI＞
[4]　Takakura, Y.et al., "Engineering of novel tamavidin 2 muteins with lowered isoelectric points and lowered non-specific binding properties.", J. Biosci. Bioeng.,114(5), 485(2012).
＜Tamavidin^®2-HOT＞
[5]　Takakura, Y. et al., "Tamavidin-HOT, a highly thermostable biotin-binding protein.", J. Biotechnol., 169, 1(2014).

[6]　Ukekawa, R. et al., "A useful new tool for isolation of long non-coding RNA-binding proteins.",Medical Science Digest, 40(7), 355(2014).

[7]　Takakura, Y. et al.: "Tamavidin2-REV : an engineered tamavidin with reversible biotin-binding capability.", J. Biotechnol., 164(1), 19-25(2013).